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R 1610細胞株之正確轉染

發(fa)布時間:2017-02-23瀏覽(lan):1329次

ATCC R 1610細胞(bao)株之正確(que)轉染

產(chan)品(pin)名稱:ATCC R 1610細胞

中(zhong)文名(ming)稱:倉鼠肺細胞

種屬:倉鼠肺細胞

 

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ATCC R 1610細胞株之正確(que)轉染

常規(gui)轉(zhuan)染技術分為(wei)穩定轉(zhuan)染(*轉(zhuan)染)和瞬時(shi)轉(zhuan)染兩(liang)類。穩定轉(zhuan)染是指外源DNA 既可以整(zheng)合到宿主染色體中(zhong)(zhong),也可能(neng)作為(wei)一種游離體存在(zai)。瞬時(shi)轉(zhuan)染則指外源DNA/RNA 不整(zheng)合到宿主染色體中(zhong)(zhong),一個宿主細胞(bao)中(zhong)(zhong)可存在(zai)多(duo)個拷貝數,產生高水(shui)平(ping)的(de)表(biao)達,但通常只持(chi)續(xu)幾(ji)天,多(duo)用于啟動子和其它調控元件(jian)的(de)分析。

轉(zhuan)染(ran)方(fang)法不同,對轉(zhuan)染(ran)結果影響(xiang)很大。常見的轉(zhuan)染(ran)方(fang)法有(you):

1. 磷酸鈣法(fa):該(gai)方(fang)法(fa)利用磷酸鈣DNA 復合物吸(xi)附細(xi)胞膜(mo)被細(xi)胞內吞(tun)原理得到(dao)瞬時(shi)或穩定轉染結果,操作簡便但重復性差,不可(ke)用于(yu)原代(dai)細(xi)胞的轉染。

2. DEAE-右(you)旋(xuan)糖苷法:帶(dai)(dai)正電(dian)(dian)的(de)(de)(de)DEAE-右(you)旋(xuan)糖苷與(yu)核酸(suan)帶(dai)(dai)負電(dian)(dian)的(de)(de)(de)磷酸(suan)骨架相互作(zuo)用(yong)形成的(de)(de)(de)復合物(wu)被細胞內吞,可用(yong)于瞬時轉染,方(fang)法相對(dui)簡便、結(jie)果可重復但對(dui)細胞有一定的(de)(de)(de)毒副作(zuo)用(yong)。

3. 電(dian)穿(chuan)孔(kong)法:利用高(gao)脈沖(chong)電(dian)壓破壞細(xi)胞(bao)(bao)膜電(dian)位,DNA通(tong)過膜上形成(cheng)的小孔(kong)導入。穩定轉染,瞬時(shi)轉染均適(shi)用。適(shi)用性廣但細(xi)胞(bao)(bao)致死率高(gao),DNA 和細(xi)胞(bao)(bao)用量大, 需根據不同細(xi)胞(bao)(bao)類(lei)型(xing)優化電(dian)穿(chuan)孔(kong)實驗(yan)條件。

4. 病毒介導法:通過侵染宿主細(xi)胞(bao)(bao)將外源(yuan)基因(yin)整(zheng)合到(dao)染色體中。適用于穩定轉染,可用于難(nan)轉染的細(xi)胞(bao)(bao)、原代(dai)細(xi)胞(bao)(bao),體內細(xi)胞(bao)(bao)等。

5. 陽離子脂質(zhi)體法(fa)(fa):帶(dai)正(zheng)電的(de)脂質(zhi)體與核酸帶(dai)負(fu)電的(de)磷酸基團(tuan)形成復(fu)(fu)合物被細胞(bao)內吞從(cong)而形成穩定轉(zhuan)(zhuan)染(ran)或(huo)瞬時性轉(zhuan)(zhuan)。該方法(fa)(fa)適(shi)用性廣,轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效(xiao)率高,重復(fu)(fu)性好,但(dan)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)時需除(chu)血清。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效(xiao)果(guo)隨細胞(bao)類型變化大。

6. 顯微注(zhu)射法:用顯微操(cao)作(zuo)將DNA 直接(jie)注(zhu)入靶細(xi)胞核,適用于穩定轉染(ran)和瞬時轉染(ran),轉染(ran)細(xi)胞數有(you)限(xian),多用于工程(cheng)改造或轉基(ji)因動物的(de)胚胎細(xi)胞。

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ATCC R 1610細(xi)胞株之正確轉(zhuan)染

 

 

 

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