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V79細胞株之正確轉染

發(fa)布時間:2017-02-23瀏覽:1459次

ATCC V79細胞(bao)株之(zhi)正(zheng)確轉染

產品名稱(cheng):ATCC V79細(xi)胞(bao)

中(zhong)文名(ming)稱:非洲綠猴腎細胞

種(zhong)屬:非洲綠猴(hou)

來源:腎;SV40轉化;雌性   

培(pei)養條件:DMEM+10%胎牛血清

生長(chang)狀(zhuang)態:貼壁生長(chang)

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ATCC V79細胞(bao)株(zhu)之(zhi)正確轉染(ran)

常(chang)規轉(zhuan)染(ran)技(ji)術分為穩定(ding)(ding)轉(zhuan)染(ran)(*轉(zhuan)染(ran))和(he)瞬時轉(zhuan)染(ran)兩類(lei)。穩定(ding)(ding)轉(zhuan)染(ran)是指外(wai)源(yuan)DNA 既可以整(zheng)合到宿(su)主(zhu)染(ran)色體(ti)中(zhong),也可能作為一種游(you)離體(ti)存在。瞬時轉(zhuan)染(ran)則指外(wai)源(yuan)DNA/RNA 不整(zheng)合到宿(su)主(zhu)染(ran)色體(ti)中(zhong),一個宿(su)主(zhu)細胞(bao)中(zhong)可存在多(duo)個拷貝數,產(chan)生(sheng)高水平的(de)表達(da),但通常(chang)只持續幾天,多(duo)用于啟動子和(he)其它調控元件的(de)分析。

轉染(ran)方法不同,對轉染(ran)結果影響很大。常見的轉染(ran)方法有:

1. 磷(lin)酸鈣(gai)法:該方法利用(yong)磷(lin)酸鈣(gai)DNA 復(fu)合物吸附細(xi)胞膜被(bei)細(xi)胞內吞原理得到瞬(shun)時或穩定轉染結果,操作簡便但(dan)重復(fu)性差(cha),不可用(yong)于原代細(xi)胞的轉染。

2. DEAE-右旋(xuan)(xuan)糖苷法(fa):帶(dai)正電(dian)的DEAE-右旋(xuan)(xuan)糖苷與核酸帶(dai)負電(dian)的磷酸骨架相互(hu)作(zuo)用(yong)(yong)形成的復(fu)合物(wu)被(bei)細(xi)胞內(nei)吞,可用(yong)(yong)于瞬時(shi)轉染,方法(fa)相對簡便、結果可重復(fu)但對細(xi)胞有(you)一定(ding)的毒副作(zuo)用(yong)(yong)。

3. 電穿孔法:利用高脈沖電壓破(po)壞細(xi)(xi)胞(bao)膜(mo)電位,DNA通過膜(mo)上形(xing)成的小(xiao)孔導入(ru)。穩(wen)定轉染,瞬時轉染均適用。適用性(xing)廣(guang)但(dan)細(xi)(xi)胞(bao)致死率高,DNA 和細(xi)(xi)胞(bao)用量大, 需(xu)根據(ju)不同細(xi)(xi)胞(bao)類型優化電穿孔實驗條件。

4. 病毒介導法:通過侵染宿主細胞(bao)(bao)將外源基因(yin)整合到(dao)染色體(ti)中。適用于穩定(ding)轉染,可用于難轉染的細胞(bao)(bao)、原代細胞(bao)(bao),體(ti)內細胞(bao)(bao)等(deng)。

5. 陽離子脂(zhi)質(zhi)(zhi)體法:帶正電的脂(zhi)質(zhi)(zhi)體與核酸(suan)(suan)帶負電的磷酸(suan)(suan)基團形(xing)成復(fu)合物被(bei)細胞內吞從而(er)形(xing)成穩定轉染或瞬時性轉。該方法適用性廣,轉染效率高(gao),重復(fu)性好,但轉染時需除血清。轉染效果隨細胞類型變化大。

6. 顯(xian)微(wei)注射法:用顯(xian)微(wei)操作(zuo)將DNA 直接注入(ru)靶(ba)細胞(bao)核,適用于穩定轉(zhuan)(zhuan)染和瞬時轉(zhuan)(zhuan)染,轉(zhuan)(zhuan)染細胞(bao)數有限,多用于工程(cheng)改造或(huo)轉(zhuan)(zhuan)基因(yin)動(dong)物(wu)的胚胎細胞(bao)。

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ATCC V79細胞株之正確轉染

 

 

 

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