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EA.HY926細胞之正確(que)轉染
產品名稱:EA.HY926細胞
中文名稱:人臍靜脈細胞融合(he)細胞
種屬:人
來源(yuan):臍(qi)靜脈(mo);內皮細(xi)胞;A549融合;女(nv)性(xing)
培(pei)養(yang)條(tiao)件:DMEM/F12 +10%胎牛血(xue)清
生(sheng)長狀(zhuang)態:貼(tie)壁生(sheng)長
2017年新(xin)學期,迎著朝陽,放飛夢(meng)想,久別重(zhong)逢,相聚一(yi)堂(tang),百(bai)尺竿頭,更進一(yi)步,學無止(zhi)境,自立自強,為國爭光,慧穎細(xi)胞庫為答謝各位莘(xin)莘(xin)學子的(de)厚愛,在新(xin)學期開學之際,將1223株細胞(bao)特惠出售,更多活(huo)動詳情,請致電市場部(bu)!
EA.HY926細胞之正確轉(zhuan)染
常(chang)規轉(zhuan)染(ran)技術分為(wei)穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran)(*轉(zhuan)染(ran))和(he)瞬(shun)時轉(zhuan)染(ran)兩類。穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran)是指外源DNA 既可以整合(he)到宿(su)主染(ran)色(se)體中(zhong),也可能作(zuo)為(wei)一種游離(li)體存(cun)在。瞬(shun)時轉(zhuan)染(ran)則(ze)指外源DNA/RNA 不整合(he)到宿(su)主染(ran)色(se)體中(zhong),一個(ge)宿(su)主細胞中(zhong)可存(cun)在多個(ge)拷貝數,產生(sheng)高水平的(de)(de)表達,但通常(chang)只(zhi)持續幾天,多用于(yu)啟動子和(he)其它調(diao)控元(yuan)件(jian)的(de)(de)分析。
轉染方(fang)法不同,對轉染結果(guo)影響很大。常見的轉染方(fang)法有:
1. 磷酸(suan)(suan)鈣法(fa):該方法(fa)利用磷酸(suan)(suan)鈣DNA 復(fu)合(he)物吸(xi)附細胞(bao)(bao)膜被細胞(bao)(bao)內(nei)吞原(yuan)理(li)得(de)到瞬時或穩定轉(zhuan)染(ran)結果,操作簡便(bian)但重(zhong)復(fu)性差(cha),不(bu)可(ke)用于原(yuan)代細胞(bao)(bao)的轉(zhuan)染(ran)。
2. DEAE-右旋(xuan)糖(tang)苷(gan)法:帶正電的(de)DEAE-右旋(xuan)糖(tang)苷(gan)與核酸帶負電的(de)磷酸骨架相互作用形成的(de)復合(he)物被細(xi)胞內吞,可用于瞬時轉(zhuan)染,方法相對簡便、結果可重復但對細(xi)胞有(you)一定的(de)毒(du)副作用。
3. 電穿(chuan)孔(kong)法:利用高脈沖電壓破壞細(xi)(xi)胞膜電位,DNA通過膜上形成(cheng)的小孔(kong)導入。穩定(ding)轉(zhuan)染(ran),瞬時轉(zhuan)染(ran)均適用。適用性廣但細(xi)(xi)胞致死率高,DNA 和(he)細(xi)(xi)胞用量大, 需根據(ju)不(bu)同細(xi)(xi)胞類型優化電穿(chuan)孔(kong)實驗條件。
4. 病毒介導法:通(tong)過侵染宿主細(xi)胞將外源基因整合到染色體(ti)中(zhong)。適用(yong)(yong)于穩定(ding)轉染,可用(yong)(yong)于難轉染的細(xi)胞、原(yuan)代細(xi)胞,體(ti)內細(xi)胞等。
5. 陽(yang)離子脂質體法:帶正電的(de)(de)脂質體與核酸帶負(fu)電的(de)(de)磷酸基團形成復合物被細胞內吞從(cong)而形成穩定轉(zhuan)染或(huo)瞬時性轉(zhuan)。該方法適(shi)用(yong)性廣,轉(zhuan)染效率高(gao),重復性好,但(dan)轉(zhuan)染時需除血清。轉(zhuan)染效果隨(sui)細胞類型變化大。
6. 顯微(wei)(wei)注射法:用顯微(wei)(wei)操作將DNA 直接(jie)注入靶(ba)細胞(bao)核(he),適(shi)用于穩定轉(zhuan)(zhuan)染和瞬時(shi)轉(zhuan)(zhuan)染,轉(zhuan)(zhuan)染細胞(bao)數有(you)限,多用于工程改造或轉(zhuan)(zhuan)基因(yin)動物的胚胎細胞(bao)。
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