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RWPE-1細胞之正確(que)轉染(ran)
產品名稱:RWPE-1細胞
中文名稱(cheng):人正常前(qian)列腺上皮細胞
種(zhong)屬:人
來(lai)源:前列腺上皮;HPV18轉(zhuan)化(hua);男(nan)性(xing)
培養條件:F12K/1640
生長狀態:貼壁(bi)生長
2017年新(xin)學期,迎著朝(chao)陽,放飛夢(meng)想,久別重(zhong)逢(feng),相聚一堂,百尺竿頭,更進一步,學無(wu)止(zhi)境,自立自強,為(wei)國爭(zheng)光,慧穎細(xi)胞(bao)庫為(wei)答(da)謝各位莘(xin)莘(xin)學子的厚愛,在新(xin)學期開(kai)學之(zhi)際,將1223株細胞特(te)惠出售,更多(duo)活動(dong)詳情,請致(zhi)電市場部!
RWPE-1細胞(bao)之正確轉(zhuan)染
常規轉(zhuan)染(ran)(ran)技(ji)術分(fen)為穩定轉(zhuan)染(ran)(ran)(*轉(zhuan)染(ran)(ran))和(he)瞬時轉(zhuan)染(ran)(ran)兩類。穩定轉(zhuan)染(ran)(ran)是指外源DNA 既可(ke)以整合到宿主染(ran)(ran)色(se)體中(zhong),也可(ke)能作為一種游(you)離體存(cun)(cun)在。瞬時轉(zhuan)染(ran)(ran)則指外源DNA/RNA 不整合到宿主染(ran)(ran)色(se)體中(zhong),一個(ge)(ge)宿主細胞中(zhong)可(ke)存(cun)(cun)在多(duo)個(ge)(ge)拷貝數,產生(sheng)高水平的(de)表達,但通常只(zhi)持續幾天,多(duo)用于啟動子和(he)其它調控元件的(de)分(fen)析。
轉染(ran)方(fang)法不(bu)同,對轉染(ran)結果影響很大。常見的轉染(ran)方(fang)法有:
1. 磷酸(suan)鈣(gai)法:該方(fang)法利用磷酸(suan)鈣(gai)DNA 復合物吸附細(xi)胞膜被細(xi)胞內吞原理得到瞬(shun)時或穩定轉染結(jie)果,操作簡便(bian)但重復性(xing)差,不可用于原代細(xi)胞的(de)轉染。
2. DEAE-右旋(xuan)糖苷法(fa):帶正電的(de)DEAE-右旋(xuan)糖苷與核酸帶負電的(de)磷酸骨架(jia)相互作(zuo)用形(xing)成的(de)復合物(wu)被(bei)細胞(bao)內吞,可用于瞬(shun)時轉染,方法(fa)相對簡便、結果可重復但對細胞(bao)有一定的(de)毒(du)副作(zuo)用。
3. 電穿孔(kong)(kong)(kong)法:利用高脈沖(chong)電壓破壞細胞(bao)(bao)膜(mo)電位,DNA通(tong)過膜(mo)上形成的小孔(kong)(kong)(kong)導入(ru)。穩定轉染,瞬時轉染均適用。適用性廣但細胞(bao)(bao)致死率高,DNA 和細胞(bao)(bao)用量(liang)大, 需(xu)根(gen)據(ju)不同細胞(bao)(bao)類型(xing)優化電穿孔(kong)(kong)(kong)實(shi)驗(yan)條件。
4. 病毒介(jie)導(dao)法(fa):通過(guo)侵染(ran)宿主細(xi)胞(bao)(bao)(bao)將外源基因整合到染(ran)色體(ti)中。適用(yong)于(yu)穩定轉染(ran),可(ke)用(yong)于(yu)難轉染(ran)的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)、原代細(xi)胞(bao)(bao)(bao),體(ti)內細(xi)胞(bao)(bao)(bao)等。
5. 陽離子(zi)脂質體(ti)法:帶正電(dian)的脂質體(ti)與核(he)酸帶負電(dian)的磷(lin)酸基團形(xing)成復(fu)(fu)合(he)物被細(xi)(xi)胞內(nei)吞從而形(xing)成穩(wen)定轉染(ran)或(huo)瞬時(shi)性轉。該方法適用性廣(guang),轉染(ran)效(xiao)率高,重復(fu)(fu)性好,但轉染(ran)時(shi)需除血清。轉染(ran)效(xiao)果隨細(xi)(xi)胞類(lei)型變化大。
6. 顯(xian)微(wei)注(zhu)射法:用顯(xian)微(wei)操作將DNA 直接注(zhu)入靶細胞核,適用于穩定轉(zhuan)染和瞬(shun)時轉(zhuan)染,轉(zhuan)染細胞數有限,多用于工程(cheng)改造或轉(zhuan)基因(yin)動物的胚(pei)胎細胞。
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