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SERANA胎牛(niu)(niu)血清 S-FBS-AU-045 胎牛(niu)(niu)血清沉淀(dian)
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SERANA胎(tai)牛血(xue)清 S-FBS-AU-045 胎(tai)牛血(xue)清沉淀(dian) 是什么(me)?
血清中經常(chang)會出(chu)現肉眼可見的沉淀(dian),其成(cheng)分有多(duo)種類型,產生(sheng)的原(yuan)因有很多(duo),主要有纖維(wei)蛋(dan)白、磷酸鈣(gai)還(huan)有一些其它(ta)成(cheng)分。
1. 纖維蛋白(Fibrin)
血(xue)清中(zhong)肉(rou)眼(yan)可見的(de)沉淀物大多屬于(yu)這一類型。由于(yu)在(zai)生產過(guo)程(cheng)中(zhong),血(xue)清采集、過(guo)濾(lv)(lv)(3 次 0.1 μm過(guo)濾(lv)(lv))和灌裝(zhuang)處(chu)理都(dou)是在(zai)低溫條件下(xia)快速完(wan)成, 此時血(xue)清中(zhong)纖(xian)維蛋(dan)白原(Fibrinogen)處(chu)于(yu)溶解(jie)狀態。但在(zai)解(jie)凍之后, 血(xue)清中(zhong)纖(xian)維蛋(dan)白原往(wang)往(wang)會發生凝集,形成肉(rou)眼(yan)可見的(de)沉淀。
2. 磷(lin)酸(suan)鈣(Calcium Phosphate)
這是一種常見的(de)沉淀成分,通常會造成血清出現云霧狀渾濁(zhuo)。當(dang)產品在 37℃保存時,這種現象尤其明顯,在倒置(zhi)顯微(wei)鏡下可觀察(cha)到小黑(hei)點的(de)存在。這些小黑(hei)點在布(bu)朗運動的(de)作用下四處游動,常被誤(wu)認為是微(wei)生物(wu)污染。
3. 其他(ta)成分(Other)
血清中的(de)其他(ta)成分(fen)也會(hui)形成沉淀,例如膽固醇形成的(de)油脂滴和其他(ta)蛋白(bai)沉淀等。
Gibco 10099141 之胎牛血清沉淀會影響細胞培養(yang)嗎?
1. 細(xi)胞(bao)生長(chang)
我們在出廠前都(dou)會(hui)對血清(qing)進行(xing)一(yi)系列質(zhi)檢測試,確保(bao)血清(qing)質(zhi)量達到(dao)(dao)嚴格標準。血清(qing)測試和細(xi)胞培養(yang)經驗也表(biao)明,其沉淀(dian)成分不會(hui)影響(xiang)血清(qing)作為細(xi)胞培養(yang)添(tian)加物的(de)表(biao)現。這一(yi)點得(de)到(dao)(dao)了眾(zhong)多客(ke)戶和其他血清(qing)供應商的(de)肯定。解(jie)凍之后, 血清(qing)中纖維蛋白(bai)原往(wang)往(wang)會(hui)發生凝集(ji),形成肉眼可(ke)見的(de)沉淀(dian)。
2. 懷疑污染
磷(lin)酸(suan)鈣顆粒(li)經常(chang)會(hui)(hui)被當成微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)污(wu)染(ran)而(er)引發不必要的(de)擔憂。一般情況下(xia),當操作(zuo)人(ren)員融(rong)化血清(qing)后注意到(dao)有(you)霧狀渾濁時,常(chang)將其存放在(zai) 4℃冰箱(xiang)中(zhong)觀察,并考慮接(jie)下(xia)來是否繼(ji)續使(shi)用。但這樣會(hui)(hui)使(shi)沉淀進一步(bu)增(zeng)多(duo),反而(er)會(hui)(hui)使(shi)血清(qing)更加渾濁,進而(er)誤以為存在(zai)血清(qing)污(wu)染(ran)。并且(qie),在(zai)倒置顯微(wei)鏡下(xia),可在(zai)血清(qing)中(zhong)觀察到(dao)四處游(you)動的(de)小黑點(磷(lin)酸(suan)鈣顆粒(li)的(de)布朗運動),更容易使(shi)人(ren)誤以為存在(zai)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)污(wu)染(ran)。
為防止(zhi)這(zhe)類(lei)誤解的產生,我們不建(jian)議客戶培(pei)養血清來(lai)驗證(zheng)是(shi)(shi)否存在污(wu)染(ran),而是(shi)(shi)將血清直(zhi)接接種在細菌培(pei)養基上進行(xing)培(pei)養,以觀察是(shi)(shi)否有細菌的增殖。并且,進行(xing)革(ge)蘭氏(shi)染(ran)色,并在油鏡(100 X 10 倍)下觀察可直(zhi)接確認是(shi)(shi)否存在微生物污(wu)染(ran)。
怎(zen)樣操作可(ke)以盡量避免沉淀出現(xian)?
1. 正確解凍
首(shou)先,應按照(zhao)逐步解凍(dong)(dong)(dong)的(de)方式正確解凍(dong)(dong)(dong)血(xue)清:從(cong)-20℃取出后(hou),置于(yu)(yu) 4℃冰箱緩慢解凍(dong)(dong)(dong),zui后(hou)置于(yu)(yu)室(shi)溫(wen)完成解凍(dong)(dong)(dong)。如(ru)果(guo)直接從(cong)-20℃拿到室(shi)溫(wen)或 37 ℃水浴解凍(dong)(dong)(dong),則非常容易產生(sheng)沉淀。在解凍(dong)(dong)(dong)過程(cheng)中,請注意時不時緩慢搖(yao)晃瓶子,減少沉淀的(de)產生(sheng)。為避免反復凍(dong)(dong)(dong)融,建議您(nin)將(jiang)血(xue)清分裝使(shi)用(yong)。
2. 使用和保存(cun)注意(yi)事項(xiang)
血(xue)清(qing)沉(chen)淀很難預測和避免,出現(xian)沉(chen)淀后也無需擔憂,這(zhe)并不會(hui)影響(xiang)血(xue)清(qing)的品質(zhi)。已知血(xue)清(qing)沉(chen)淀在以下條件(jian)下會(hui)有增多的可能:
1) 熱滅活;
2) 37℃培養;
3) 反復凍融;
4) 伽馬射線照射;
5) 2-8℃長期保存;
6) 長期保(bao)存于可自動化霜的冰箱中(溫度不穩定)。
血(xue)清沉(chen)淀(dian)(dian)(dian)的(de)形(xing)成機理多(duo)種多(duo)樣,具體(ti)的(de)機理尚(shang)不(bu)十分明(ming)確。我們尚(shang)不(bu)能準確預測和(he)控制(zhi)血(xue)清沉(chen)淀(dian)(dian)(dian)的(de)產生(sheng)。目(mu)前市(shi)面上所有品牌(pai)的(de)血(xue)清產品都(dou)存在沉(chen)淀(dian)(dian)(dian)現象(xiang),這一點可以在各品牌(pai)上關(guan)于沉(chen)淀(dian)(dian)(dian)問題的(de)聲明(ming)上得到證實(shi)。
出(chu)現血清沉淀該如何(he)處理?
我們建(jian)議(yi)您采用2000 rpm 離心5分(fen)鐘(zhong),取上(shang)清使用就好,比過濾(lv)方便,不(bu)需要(yao)另外(wai)準(zhun)備濾(lv)心和針筒,又不(bu)容易污染。
總 結(jie):
血清(qing)產品中(zhong)出現沉(chen)淀(dian)屬于常見(jian)現象(xiang),但(dan)不會影響(xiang)血清(qing)的(de)品質,對細胞培養(yang)而言也是沒有任何問題(ti)的(de),大家可以放心(xin)使用!