RAW264.7細(xi)胞形態，RAW264.7細(xi)胞株操作說明RAW264.7細(xi)胞形態

操作說明：

收到細(xi)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察(cha)整個細(xi)胞生(sheng)長情況(kuang)。

（一）  如果(guo)細胞(bao)未長滿，用75%酒精噴灑整個(ge)瓶(ping)(ping)消(xiao)毒后(hou)放到超菌臺內，嚴格無(wu)菌操作，打開細胞(bao)培(pei)(pei)養瓶(ping)(ping)，吸出(chu)培(pei)(pei)養液(ye)(ye)，換 10ml新鮮培(pei)(pei)養液(ye)(ye)后(hou)繼續(xu)培(pei)(pei)養。

(二)如果細(xi)胞已長滿，即可(ke)進行傳代培(pei)養。具體步驟如下：

1. 棄(qi)去培養液，用PBS（不(bu)含鈣,鎂離子）洗(xi)1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)養瓶(ping)中，倒放(fang)于37℃培(pei)養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培(pei)養瓶(ping)10-30秒，在倒置顯微鏡下(xia)(xia)觀察(cha)細胞消化情(qing)況，若細胞大部(bu)分變圓，迅速(su)拿回操作(zuo)臺，輕敲幾(ji)下(xia)(xia)培(pei)養瓶(ping)后加少量(liang)*培(pei)養基終(zhong)止消化。

3. 按(an)6-8ml/瓶(ping)補加*培(pei)養基，輕輕打勻后(hou)吸出一半，分到新(xin)的培(pei)養瓶(ping)中。如果沒有特別說明，收到細胞后(hou)的次(ci)傳(chuan)代一般是一傳(chuan)二。

注：1、觀察細胞在低倍(bei)鏡（4或5X物鏡)下(xia)進行，否則不能準確判斷細胞的傳代(dai)密度。看細胞的形(xing)態請在10X或20X物鏡下(xia)。

2、瓶中運輸(shu)培(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)不(bu)能重復再用,請換用加雙(shuang)抗的(de)新培(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)，細胞凍(dong)存(cun)后,培(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)中可不(bu)加任何抗生素。

3、有些細胞(bao)貼(tie)(tie)壁(bi)不牢，如發現貼(tie)(tie)壁(bi)細胞(bao)有脫落，可離(li)心(xin)吹打后(hou)接種到新瓶內。

4、收到(dao)細胞后，若發現培養瓶(ping)破(po)損、有液溢(yi)出及(ji)細胞有污染，請及(ji)時與我們(men)聯系(xi)。

運輸保(bao)存：

采用干(gan)冰保存(cun)運輸。收到細(xi)(xi)(xi)胞時，若(ruo)干(gan)冰已經*融化，請(qing)立即將(jiang)細(xi)(xi)(xi)胞復(fu)蘇培養；若(ruo)尚留(liu)有干(gan)冰，請(qing)立即將(jiang)細(xi)(xi)(xi)胞放(fang)入液(ye)氮(dan)中保存(cun)待用，請(qing)按條件貯存(cun)細(xi)(xi)(xi)

胞，切不(bu)可將細胞置于(yu)高溫環(huan)境。

注意(yi)事項(xiang)

1 ）操(cao)作前(qian)要洗(xi)手(shou)，進入超(chao)凈(jing)臺后手(shou)要用 75% 酒精或 0.2% 新潔爾滅擦試(shi)。試(shi)劑等瓶口也要擦試(shi)。

2 ）點燃酒(jiu)精燈，操(cao)作在火(huo)(huo)焰附近進行，耐熱物品要(yao)經常在火(huo)(huo)焰上燒灼，金屬(shu)器(qi)械燒灼時間(jian)不能太長，以免(mian)退火(huo)(huo)，并冷(leng)卻后才能夾取(qu)(qu)組織，吸(xi)取(qu)(qu)過營(ying)養液(ye)的(de)用(yong)具

不能再燒灼，以免(mian)燒焦形成碳(tan)膜。

3 ）操作(zuo)動作(zuo)要準確(que)敏捷，但又(you)不能太快(kuai)，以防空(kong)氣(qi)流動，增(zeng)加污染機會。

4 ）不能用手觸已消毒器皿的工作(zuo)部分，工作(zuo)臺面上用品要布局合理。

5 ）瓶子開口(kou)后要盡量保持 45℃ 斜位。

6 ）吸溶液的吸管等不(bu)能(neng)混用 。

慧穎(ying)生物常賣細胞：

 SV40-MES-13    小鼠腎小球系膜細(xi)(xi)胞  DMEM/F12+10%FBS 貼壁    上皮細(xi)(xi)胞樣

LLC 小鼠lewis肺癌細胞(bao)  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞(bao)樣(yang)

GL261   小(xiao)鼠膠質瘤細(xi)胞  DMEM/F12+10%FBS 貼(tie)壁    上皮細(xi)胞樣

Neuro-2a    小(xiao)鼠腦(nao)神經瘤(liu)細胞(bao)(bao)    MEM+10% FBS 貼壁    上皮細胞(bao)(bao)樣(yang)

L929    小鼠結締組織L細胞株(zhu)929克隆 MEM+10% FBS 貼壁(bi)    上皮細胞樣(yang)

MC38    小鼠結腸癌(ai)細胞  DMEM+10% FBS    懸浮+貼壁(bi)   上皮細胞樣

B16-F10 小鼠皮膚黑色素(su)瘤細胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞(bao)樣(yang)

MEL 小鼠紅白血病細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣(yang)

NCTC 1469   小(xiao)鼠(shu)正常肝細胞  DMEM+10% HS 馬血清  貼壁(bi)    淋巴母細胞

STC-1   小鼠小腸(chang)內分泌(mi)細(xi)胞(bao)  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)胞(bao)樣(yang)

Hepa 1-6    小鼠肝癌細(xi)胞    DMEM+10% FBS    貼(tie)壁    上皮細(xi)胞樣

Ana-1   小鼠巨噬(shi)細胞    RPMI-1640+10% FBS   懸(xuan)浮+貼(tie)壁   淋巴母細胞

Sp2/0-Ag14  小鼠骨髓(sui)瘤細(xi)胞  DMEM+10%FBS 懸(xuan)浮+貼壁   淋巴(ba)母細(xi)胞

MPC-5   小(xiao)鼠(shu)足細(xi)胞  DMEM+10%FBS 貼(tie)壁    上皮(pi)細(xi)胞樣

HL-1    小鼠心肌細胞(bao)(bao)    DMEM+10%FBS 貼壁(bi)    上皮細胞(bao)(bao)樣

CT26    小鼠結腸癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼(tie)壁    上皮細胞樣

BAF3、BA/F3 小鼠原B細(xi)胞(bao)株(zhu)  RPMI-1640+10% FBS+10ng/ml IL-3 懸浮    淋(lin)巴母細(xi)胞(bao)

BALB/3T3 clone A31  小鼠胚胎成(cheng)纖維細胞(bao)  DMEM+10%FBS 貼壁    成(cheng)纖維細胞(bao)

C17.2   小鼠神經干細胞 ; DMEM+10%FBS 貼壁(bi)    成纖維細胞

C3H/10T1/2, Clone 8 小鼠胚胎成纖(xian)維(wei)細胞  MEM+10%FBS  貼壁(bi)    成纖(xian)維(wei)細胞

RENCA   小(xiao)鼠(shu)腎癌(ai)細胞    1640+10%FBS+0.1mM 非必需氨基(ji)酸+1mM 丙酮酸鈉+2mM L-谷(gu)氨酰(xian)胺+1%P/S    貼壁    上皮細胞樣

IMCD3   小鼠(shu)腎臟內髓集合管3上皮細胞(bao)    DMEM/F12+10%FBS 貼(tie)壁 ;  ; 上皮細胞(bao)樣(yang)

MB49    小鼠膀胱癌(ai)細胞  DMEM+10%FBS 貼壁    上皮細胞樣