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細胞名稱:NCI-H1437 人肺癌(ai)細胞
貨號(hao):H047
種屬:人(ren)
細(xi)胞來源:從ATCC/中科院/協和醫院等地(di)引進
生長特性:貼壁 上皮樣
培養(yang)條件:培養(yang)基:90%RPMI-1640+10%FBS(推薦使用HAKATA優(you)等(deng)胎牛血清HN-FBS-50)
溫(wen)度(du):37℃
氣相(xiang):95%空氣,5%二(er)氧化碳
傳(chuan)代(dai)說明:
1.用75%酒精噴灑整個(ge)培養(yang)瓶(ping)消毒,將(jiang)其(qi)(qi)平躺置(zhi)于培養(yang)箱中(zhong)(zhong)進行1-3小時的(de)緩沖,.然后置(zhi)于無菌操作臺,打開(kai)瓶(ping)口,將(jiang)其(qi)(qi)中(zhong)(zhong)的(de)培養(yang)液去掉(diao),再往其(qi)(qi)中(zhong)(zhong)加(jia)入(ru)5-6mL新鮮培養(yang)基(以(yi)T25培養(yang)瓶(ping)為例(li))并(bing)置(zhi)于細(xi)胞培養(yang)箱中(zhong)(zhong)培養(yang),根(gen)據細(xi)胞生長狀況及(ji)培養(yang)基顏(yan)色變(bian)化對其(qi)(qi)進行換(huan)液以(yi)及(ji)傳代,一般2到3天(tian)換(huan)一次液;
2.待細胞長滿(man)瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳(chuan)代,傳(chuan)代比例為1:3到1:8;
3傳代步驟:將0.25%胰(yi)酶(mei)-0.53 mM EDTA消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)液(ye)置于(yu)37°預(yu)熱,倒掉(diao)培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)(ping)中的(de)培(pei)(pei)養(yang)基(ji),往(wang)培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)(ping)中加(jia)入(ru)(ru)3-5 ml PBS,輕(qing)晃洗滌(di)后棄去(qu)。往(wang)瓶(ping)(ping)中加(jia)1-2 ml預(yu)熱好的(de)胰(yi)酶(mei),置于(yu)37°孵(fu)育消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(次(ci)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)需(xu)時(shi)常(chang)取出置于(yu)顯微鏡(jing)下(xia)觀察,以顯微鏡(jing)下(xia)細(xi)胞(bao)觸角回收變(bian)圓(yuan)、輕(qing)拍瓶(ping)(ping)壁見細(xi)胞(bao)脫(tuo)落為*消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)時(shi)間,記錄*消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)時(shi)間,以便于(yu)下(xia)次(ci)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)),消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)好后加(jia)入(ru)(ru)3ml*培(pei)(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)。用移(yi)液(ye)槍輕(qing)輕(qing)吹打瓶(ping)(ping)壁上的(de)細(xi)胞(bao),使之(zhi)*脫(tuo)落,然后收集(ji)細(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液(ye),1200rpm離(li)心3min,棄上清,加(jia)入(ru)(ru)*培(pei)(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan)(xuan)細(xi)胞(bao),進行傳代。
保(bao)存說明:
凍存條件:80%*培養(yang)基+10%FBS+10%DMSO
(備注:建議使用本公司的冷凍(dong)液(H-W-100),用4度(du)保存的冷凍(dong)液直接重懸細胞,不能預熱(re)后使用。)
保(bao)存條件:液氮存儲(chu)
常(chang)見問題說明:
1.培(pei)養瓶有(you)破裂(lie),培(pei)養液有(you)漏液:細胞(bao)極(ji)大可(ke)能會污染,所(suo)以(yi)我們會及時安排幫老師解決(jue)。
2.收(shou)到(dao)細胞后盡快更換為含 10%血清的新(xin)鮮培養基,如因特殊情況需要(yao)繼續(xu)使用原(yuan)瓶培養基,請(qing)在原(yuan)瓶培養基中額外添加 10%的血清(原(yuan)瓶培養基的繼續(xu)使用時(shi)間zui長不宜超過 72 小時(shi))
3.細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)漂浮:培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)不(bu)開(kai)封,瓶(ping)口酒(jiu)精(jing)擦拭后平躺放置在培(pei)(pei)養(yang)箱。1-2小時后觀察,如細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)大部(bu)分又貼回瓶(ping)底(di),表明細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)活力正常,剩余漂浮的(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)可(ke)以(yi)去掉,留(liu)8-10ml培(pei)(pei)養(yang)液培(pei)(pei)養(yang)觀察,細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生長至(zhi)匯合度(du)80%,進行消化傳代;如細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)還是不(bu)貼壁,將(jiang)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)離心(xin)收(shou)集轉(zhuan)到新培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping),原培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)加(jia)部(bu)分培(pei)(pei)養(yang)液繼續培(pei)(pei)養(yang),中間注意(yi)觀察,我們的(de)技術人員會一直跟蹤指(zhi)導,直到問題解決。
供應商:慧穎細胞庫 人源均來自于第三方str鑒定,請(qing)放心(xin)購買(mai)
供應限制:僅(jin)供科(ke)研使用
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