gibco141血清正版少(shao)量到(dao)貨

gibco141血清10099-141胎牛FBS分裝步驟

無(wu)菌分裝(zhuang)過程： 轉入無(wu)菌間，在超凈臺內分裝(zhuang)血(xue)清到50ML-100ML的凍存管內，前提是在分裝(zhuang)之前搖勻一下血(xue)清然后再分裝(zhuang)。確保無(wu)菌環境和(he)無(wu)菌操作以及無(wu)菌耗材。

1、 如何(he)儲存和解凍血(xue)清才不(bu)會使產品質(zhi)量受損(sun)？

將血清(qing)從(cong)冷(leng)凍箱取(qu)出后，先置于2～8℃冰箱使(shi)(shi)之融(rong)解，然后在室溫下(xia)(xia)使(shi)(shi)之全融(rong)。但(dan)必須注意的(de)(de)是(shi)，融(rong)解過程中必須規(gui)則地搖(yao)晃均勻。長時間儲存(cun)在2－8℃時，血清(qing)中的(de)(de)各種蛋白(bai)和(he)脂(zhi)蛋白(bai)（如冷(leng)凝集素(su)、纖維(wei)蛋白(bai)原、玻粘(zhan)連蛋白(bai)等）可能聚集而形成沉(chen)淀或可見(jian)的(de)(de)混濁(zhuo)。因此，推薦在-20℃以下(xia)(xia)儲存(cun)血清(qing)，并避免(mian)反復凍融(rong)。我(wo)們建議血清(qing)應(ying)保存(cun)在-2O℃。若存(cun)放于4℃時，請勿超過一個月。若一次(ci)無(wu)法用完(wan)一瓶，建議無(wu)菌分裝血清(qing)至恰當的(de)(de)滅菌容器內，再放回(hui)冷(leng)凍。

2、血(xue)清中包含絮狀(zhuang)沉淀，它(ta)們是(shi)什么(me)，怎么(me)處理？

沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)(dian)包含纖維蛋白(bai)和脂(zhi)蛋白(bai)。這是正常特性(xing)，不(bu)會(hui)影響產(chan)品性(xing)質(zhi)。要(yao)除去(qu)沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)(dian)，離心血(xue)清(qing)（400g，1-2分(fen)鐘）或(huo)者簡(jian)單的(de)讓(rang)其沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)(dian)在瓶子底部，將血(xue)清(qing)小心的(de)轉移(yi)到另一個無(wu)菌(jun)瓶里（一般不(bu)建議(yi)采用過濾的(de)方法除去(qu)沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)(dian)，因為沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)(dian)會(hui)堵塞濾膜而無(wu)法過濾）。大(da)多情況輕輕搖動沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)(dian)并加(jia)(jia)熱至(zhi)37℃就會(hui)再(zai)溶解。所以，使用產(chan)品時要(yao)搖動并加(jia)(jia)熱血(xue)清(qing)至(zhi)37℃，沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)(dian)會(hui)自然消失。

4、 如何(he)避免血清中(zhong)產(chan)生沉淀？

按如下操(cao)作可避免沉淀的產生：

（1）解凍血清時(shi)，請隨時(shi)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉(chen)淀的(de)發生。

（2）血清分裝凍存時，須(xu)規則搖晃均勻(yun)（小心勿造(zao)成氣泡），使溫度與成分均一。

（3）勿(wu)直(zhi)接(jie)由-20℃直(zhi)接(jie)至37℃解凍(dong)，因溫(wen)度改變太大，容易造(zao)成(cheng)蛋白(bai)質凝結(jie)而發生沉(chen)淀。

（4）勿將(jiang)血清置于37℃太(tai)久，否(fou)則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wen)定(ding)的(de)(de)成份也會因此受到破(po)壞，從而影響血清的(de)(de)品質。

（5）血(xue)清(qing)的熱滅活非常容(rong)易造(zao)成(cheng)沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

（6）若(ruo)必(bi)須做血(xue)清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原(yuan)則，并且隨(sui)時搖晃(huang)均(jun)勻(yun)。溫度過(guo)高，時間過(guo)久(jiu)或(huo)搖晃(huang)不均(jun)勻(yun)，都會造成沉淀物的增(zeng)多。

5、 培養基中添加了血清和(he)抗生素(su)后，可(ke)長期保存嗎？

一(yi)旦您在新鮮培養基中(zhong)添加了血清(qing)和抗(kang)生(sheng)素時，您應該在兩到三(san)周內(nei)使用它。因為一(yi)些抗(kang)生(sheng)素和血清(qing)中(zhong)的基本成分在解凍后就開始降解。

6、 為什么(me)要熱滅活(huo)血清(qing)?

加(jia)熱(re)可以滅(mie)活補體(ti)系統。激(ji)活的補體(ti)參與溶解(jie)細(xi)胞事(shi)件，刺激(ji)平滑肌收縮，細(xi)胞和血小板釋放組胺，激(ji)活淋巴細(xi)胞和巨噬(shi)細(xi)胞。在免疫學(xue)研究，培養ES細(xi)胞、平滑肌細(xi)胞時，推薦使用熱(re)滅(mie)活血清。

7、 有(you)必要做熱滅活嗎?

實驗(yan)顯(xian)示，經(jing)過(guo)正(zheng)確處理(li)(li)的(de)(de)(de)熱(re)滅活血清(qing)，對(dui)大多數的(de)(de)(de)細胞(bao)而(er)(er)言是(shi)不需(xu)要(yao)(yao)的(de)(de)(de)。經(jing)此(ci)處理(li)(li)過(guo)的(de)(de)(de)血清(qing)對(dui)細胞(bao)的(de)(de)(de)生長只有微小(xiao)的(de)(de)(de)促進，或*沒(mei)有任(ren)何作用，甚至通(tong)常(chang)(chang)(chang)因為(wei)(wei)高溫處理(li)(li)影響了血清(qing)的(de)(de)(de)質量，而(er)(er)造成細胞(bao)生長速(su)率的(de)(de)(de)降(jiang)低。而(er)(er)經(jing)過(guo)熱(re)處理(li)(li)的(de)(de)(de)血清(qing)，沉淀物的(de)(de)(de)形成會顯(xian)著的(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)多，這些沉淀物在(zai)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，像是(shi)“小(xiao)黑點”，常(chang)(chang)(chang)常(chang)(chang)(chang)會讓研(yan)(yan)究(jiu)者(zhe)誤(wu)以為(wei)(wei)是(shi)血清(qing)遭受污染(ran)，而(er)(er)把(ba)血清(qing)放在(zai)37℃環(huan)境中，又會使此(ci)沉淀物更(geng)增(zeng)(zeng)多，使研(yan)(yan)究(jiu)者(zhe)誤(wu)認為(wei)(wei)是(shi)微生物的(de)(de)(de)分(fen)裂擴增(zeng)(zeng)。若(ruo)非必須(xu)，可以不需(xu)要(yao)(yao)做熱(re)處理(li)(li)這一步。不但節省時間，更(geng)確保(bao)血清(qing)的(de)(de)(de)質量!

8、細(xi)胞培養(yang)中出現黑點是污染嗎？如何處(chu)理？

一旦您在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)(yang)的(de)過(guo)程中(zhong)發現有(you)黑(hei)(hei)點(dian)生成，首先，要(yao)肉眼(yan)觀察培(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)是否混濁，然后(hou)，在鏡下觀察培(pei)養(yang)(yang)(yang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)生長(chang)的(de)狀態(tai)(tai)，黑(hei)(hei)點(dian)是否游動。如果細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)被(bei)污染，微(wei)生物則會大量繁殖，培(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)就(jiu)會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xi)(xi)菌污染、支(zhi)原(yuan)體污染等。如果在鏡下觀察細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，生長(chang)狀態(tai)(tai)良好(hao)，與(yu)黑(hei)(hei)點(dian)出現前(qian)相比，沒有(you)任何(he)變化(hua)，那么，黑(hei)(hei)點(dian)的(de)出現可(ke)(ke)(ke)能與(yu)以下幾種(zhong)情況有(you)關：（1）細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)生長(chang)過(guo)老，破碎(sui)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)殘骸(hai)；（2）血清質量不好(hao)，反復凍融的(de)結果；（3）配制培(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)pH值偏高，不宜細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)生長(chang)；（4）配制培(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)水質、容(rong)器(qi)不合(he)格。可(ke)(ke)(ke)應用離(li)心、過(guo)濾的(de)方法去除(chu)這些黑(hei)(hei)點(dian)；（5）培(pei)養(yang)(yang)(yang)原(yuan)代細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)中(zhong)出現小黑(hei)(hei)點(dian)，可(ke)(ke)(ke)能是原(yuan)代組(zu)織中(zhong)的(de)雜質，多次傳代可(ke)(ke)(ke)以消除(chu)。

9、 細胞培養中如何防止黑點生成？

（1） 盡可能地減(jian)少血清(qing)凍融(rong)次(ci)數。

（2） 培(pei)養基無需37℃水(shui)浴(yu)。

（3） 培(pei)養基保持(chi)*PH值7.0- 7.2。

（4） 嚴(yan)格(ge)控制配制培(pei)養基的水質，容器定期刷(shua)洗。

（5） 掌(zhang)握細胞傳(chuan)代的*時機，細胞切勿生長過老。

使(shi)用(yong)前處(chu)理(li)：大(da)部分(fen)血(xue)(xue)(xue)(xue)清在使(shi)用(yong)前必須滅(mie)(mie)活(huo)處(chu)理(li)，即(ji)56℃30分(fen)鐘。滅(mie)(mie)活(huo)的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)是(shi)去(qu)除(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue)清中的(de)(de)(de)補(bu)體成(cheng)分(fen)，避(bi)免補(bu)體對細胞產生毒性作用(yong)。血(xue)(xue)(xue)(xue)清經(jing)過滅(mie)(mie)活(huo)也會損失(shi)一(yi)些對細胞有利的(de)(de)(de)成(cheng)分(fen)，如生長(chang)因(yin)子，因(yin)此(ci)也有人提(ti)出血(xue)(xue)(xue)(xue)清不經(jing)滅(mie)(mie)活(huo)直(zhi)接(jie)用(yong)于(yu)培養，這樣做的(de)(de)(de)前提(ti)是(shi)確認血(xue)(xue)(xue)(xue)清中不含補(bu)體成(cheng)分(fen)。對于(yu)一(yi)些品質(zhi)高的(de)(de)(de)胎牛(niu)血(xue)(xue)(xue)(xue)清和新牛(niu)血(xue)(xue)(xue)(xue)清可以考慮不經(jing)滅(mie)(mie)活(huo)直(zhi)接(jie)用(yong)于(yu)細胞培養。

儲存(cun)條件：血清(qing)一般儲存(cun)于(yu)－20℃，同時應避免反復凍(dong)融。購買大包裝(zhuang)的(de)血清(qing)后(hou)，首(shou)先要(yao)滅活(huo)處(chu)理，然后(hou)分裝(zhuang)成小包裝(zhuang)，儲存(cun)于(yu)－20℃，使用(yong)前(qian)融化(hua)。融化(hua)時現(xian)置于(yu)4℃。融化(hua)后(hou)的(de)血清(qing)在(zai)4℃不宜長時間存(cun)放，應盡快使用(yong)。

使(shi)用(yong)濃(nong)度：自從有了合成培養基，血清(qing)就是(shi)作為一種添加(jia)成分與合成培養基混合使(shi)用(yong)，使(shi)用(yong)濃(nong)度一般為5－20％，zui常用(yong)是(shi)10％。過多血清(qing)容(rong)易使(shi)培養中的細胞發(fa)(fa)生變化，特別是(shi)一些(xie)二倍(bei)體(ti)的無(wu)限細胞系，迅速(su)生長之后容(rong)易發(fa)(fa)生惡(e)性(xing)轉(zhuan)化。

采(cai)購(gou)血清時，先從供(gong)應商處(chu)索(suo)取(qu)樣品進行試(shi)驗，選定(ding)一(yi)批后就要(yao)保留(liu)足夠使用6個月至1年的量(liang)，直至用另一(yi)批經過預先試(shi)驗的樣品代替(ti)。