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細(xi)胞(bao)名(ming)稱:LOVO/5-FU人結腸癌細(xi)胞(bao)五氟尿嘧(mi)啶(ding)耐(nai)藥株(zhu)
貨(huo)號:A004
種屬:耐藥株
細胞來源:從ATCC/中科(ke)院(yuan)(yuan)/協和醫院(yuan)(yuan)等地引進
生(sheng)長特性:貼(tie)壁 上皮(pi)樣
培(pei)養條(tiao)件(jian):培(pei)養基:90% RPMI-1640 +10% FBS +1000ng/ml 5-FU(推薦使用(yong)HAKATA優(you)等胎牛血清HN-FBS-50)
溫度(du):37℃
氣相:95%空氣,5%二氧(yang)化(hua)碳
傳代(dai)說(shuo)明:
1.用75%酒精噴(pen)灑整個培(pei)養(yang)瓶消毒,將(jiang)其平躺置(zhi)于培(pei)養(yang)箱中(zhong)進行(xing)1-3小時的(de)緩沖,.然(ran)后置(zhi)于無菌操作臺(tai),打開瓶口,將(jiang)其中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)去掉,再往其中(zhong)加(jia)入5-6mL新鮮培(pei)養(yang)基(ji)(以T25培(pei)養(yang)瓶為(wei)例)并置(zhi)于細(xi)胞培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang),根據細(xi)胞生長狀(zhuang)況及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏色變化對其進行(xing)換液(ye)以及(ji)傳代,一(yi)(yi)般2到3天換一(yi)(yi)次液(ye);
2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需(xu)要對其(qi)進(jin)行(xing)傳代(dai),傳代(dai)比(bi)例為1:3到1:8;
3傳(chuan)代(dai)步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)液置于(yu)37°預熱(re)(re),倒掉培(pei)養(yang)(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)(yang)基,往(wang)培(pei)養(yang)(yang)瓶中加入(ru)3-5 ml PBS,輕(qing)晃洗(xi)滌后棄去。往(wang)瓶中加1-2 ml預熱(re)(re)好(hao)的(de)胰酶,置于(yu)37°孵育消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(次(ci)消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)需時常取(qu)出置于(yu)顯(xian)微鏡下觀察,以顯(xian)微鏡下細(xi)胞(bao)(bao)觸角回收變(bian)圓、輕(qing)拍瓶壁見(jian)細(xi)胞(bao)(bao)脫落為*消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)時間(jian),記錄*消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)時間(jian),以便于(yu)下次(ci)消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)),消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)好(hao)后加入(ru)3ml*培(pei)養(yang)(yang)基終止消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)(hua)。用(yong)移(yi)液槍(qiang)輕(qing)輕(qing)吹打(da)瓶壁上(shang)(shang)的(de)細(xi)胞(bao)(bao),使之*脫落,然后收集細(xi)胞(bao)(bao)懸液,1200rpm離心3min,棄上(shang)(shang)清(qing),加入(ru)*培(pei)養(yang)(yang)基重(zhong)懸細(xi)胞(bao)(bao),進行傳(chuan)代(dai)。
保存說明:
凍(dong)存條件(jian):80%*培養(yang)基+10%FBS+10%DMSO
(備注:建議使用(yong)本公司的(de)冷凍液(ye)(H-W-100),用(yong)4度保(bao)存(cun)的(de)冷凍液(ye)直(zhi)接(jie)重懸細胞,不能預熱后使用(yong)。)
保(bao)存(cun)條件:液氮(dan)存(cun)儲
常見問(wen)題(ti)說(shuo)明:
1.培養瓶(ping)有(you)破(po)裂,培養液(ye)(ye)有(you)漏液(ye)(ye):細胞極大可能會污染,所以(yi)我們會及時安(an)排幫(bang)老師解決。
2.收到細胞(bao)后盡(jin)快(kuai)更(geng)換(huan)為含 10%血清的新(xin)鮮培(pei)養基(ji),如因特殊情況需要繼續(xu)使用原瓶培(pei)養基(ji),請在原瓶培(pei)養基(ji)中額外添加 10%的血清(原瓶培(pei)養基(ji)的繼續(xu)使用時間zui長不宜超過(guo) 72 小(xiao)時)
3.細(xi)胞(bao)漂浮:培(pei)(pei)(pei)養瓶(ping)不開封,瓶(ping)口酒精擦拭后平躺放(fang)置在(zai)培(pei)(pei)(pei)養箱。1-2小時后觀察(cha)(cha),如細(xi)胞(bao)大(da)部分又貼回(hui)瓶(ping)底,表明細(xi)胞(bao)活力正常,剩(sheng)余漂浮的細(xi)胞(bao)可以去掉,留8-10ml培(pei)(pei)(pei)養液培(pei)(pei)(pei)養觀察(cha)(cha),細(xi)胞(bao)生長至(zhi)匯(hui)合度80%,進行消化傳代;如細(xi)胞(bao)還(huan)是不貼壁,將細(xi)胞(bao)離心收(shou)集轉到新培(pei)(pei)(pei)養瓶(ping),原培(pei)(pei)(pei)養瓶(ping)加部分培(pei)(pei)(pei)養液繼續(xu)培(pei)(pei)(pei)養,中間注(zhu)意觀察(cha)(cha),我們的技術人員(yuan)會一直跟蹤指(zhi)導,直到問題解決(jue)。
供應商:慧穎細胞(bao)庫 人源均來自于第三方str鑒定(ding),請放心(xin)購買
供(gong)應(ying)限制:僅供(gong)科研(yan)使用(yong)
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SUER1261(XR) HuNS1細胞, 1×106 1ml/T25 詢價/元(yuan)
SUER1262(XR) HUP-T3細胞, 1×106 1ml/T25 詢(xun)價/元
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