MDCK-II細胞/ MDCK-II犬腎細胞     培養步驟

產品名稱：MDCK-II細胞(bao)

中文名稱：犬腎細胞；MDCK-II

規格：T25

形態特(te)征：L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表達(da)載體轉染并在含G418的(de)(de)培(pei)(pei)養基(ji)(ji)中篩選穩轉株。Wnt-3A基(ji)(ji)因(yin)編碼(ma)一個(ge)有變異的(de)(de)信號功效分泌(mi)(mi)性糖蛋白。 Wnt基(ji)(ji)因(yin)控制胚胎發(fa)過程(cheng)中的(de)(de)許多(duo)模式形成和生長(chang)事(shi)件。這(zhe)些細胞分泌(mi)(mi)有生物活性的(de)(de)Wnt-3A蛋白。它們(men)是目前生產Wnt-3A條(tiao)(tiao)件培(pei)(pei)養基(ji)(ji)的(de)(de)好(hao)來源。由于(yu)這(zhe)種條(tiao)(tiao)件培(pei)(pei)養基(ji)(ji)還包含Wnt-3A蛋白外的(de)(de)其(qi)他因(yin)子，對于(yu)涉及Wnt-3A條(tiao)(tiao)件培(pei)(pei)養基(ji)(ji)的(de)(de)實(shi)驗有必(bi)要用其(qi)來源細胞株(ATCC CRL-2648)作(zuo)對照。

生長狀態：上皮樣

特征特性(xing)：貼壁生長

培養條件：DMEM(高糖(tang)）+10%FBS（推薦HAKATA優等胎牛血清貨號：HN-FBS-500）

傳代方法：1:3傳代，3-4天(tian)傳1次

凍存(cun)條件(jian)：HAKATA ® 無血清細胞凍存(cun)液 貨(huo)號：H-W-100 規格(ge)：100ML

支原體檢測：陰性

使用權限(xian)：A類

參考文獻：

供應商：上(shang)海慧(hui)穎生物科技有限公司

復蘇周期(qi)：10個工作日左(zuo)右

培養步驟：

1）復蘇細(xi)胞(bao)：將含有(you)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管在(zai)(zai)37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加入5mL培(pei)養(yang)基混合均勻。在(zai)(zai)1000RPM條件(jian)下離心(xin)5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培(pei)養(yang)基后吹勻。然后將所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入6cm皿中(zhong)），培(pei)養(yang)過夜。第(di)二天(tian)換液并檢查(cha)細(xi)胞(bao)密度。

2）細(xi)(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果細(xi)(xi)胞密度達80%-90%，即可(ke)進行傳(chuan)代培(pei)養。

1、對于貼(tie)壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清(qing)，用不含鈣、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消(xiao)(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培(pei)(pei)(pei)養瓶(ping)(ping)中，置于(yu)37℃培(pei)(pei)(pei)養箱(xiang)中消(xiao)(xiao)化(hua)1-2min，然后在顯(xian)微鏡下觀察細胞消(xiao)(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細胞大部(bu)分變圓并脫落，迅速拿回(hui)操作臺，輕敲幾下培(pei)(pei)(pei)養瓶(ping)(ping)后加5ml以上含10%血清的*培(pei)(pei)(pei)養基終止消(xiao)(xiao)化(hua)。

3.輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞，*脫(tuo)落(luo)后吸出，在1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培(pei)養液后吹(chui)勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bu)加培養液(ye)，將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1：2到1：5的比例分到新(xin)的含(han)5-6 ml培養液(ye)的新(xin)皿中或者瓶中。

PS：若(ruo)客(ke)戶收到2ml小管細(xi)胞(bao)，收到細(xi)胞(bao)后，用75%酒精(jing)噴(pen)灑(sa)整個管子消(xiao)毒后放到超凈臺或(huo)安全柜內(nei)，嚴格無菌操作；將小管細(xi)胞(bao)轉移至T25培養(yang)(yang)瓶或(huo)6cm培養(yang)(yang)皿(min)，加入(ru)5ml左(zuo)右*培養(yang)(yang)基混勻，放入(ru)培養(yang)(yang)箱過(guo)夜培養(yang)(yang)后查看細(xi)胞(bao)密度(du)：若(ruo)密度(du)未超過(guo)80%，換液(ye)繼(ji)續(xu)培養(yang)(yang)，視情(qing)況傳(chuan)代(dai)(dai)或(huo)者凍存。若(ruo)密度(du)超過(guo)80%，可直(zhi)接進行傳(chuan)代(dai)(dai)（方法(fa)同上(shang)）。

2、對于(yu)懸浮細胞，傳代可(ke)參(can)考以(yi)下(xia)方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條(tiao)件下離心(xin)8-10分鐘，棄去上(shang)清液(ye)，補加1-2mL培養(yang)液(ye)后吹勻，將細胞懸(xuan)液(ye)按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang)基(ji)的新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

方(fang)法二：可選擇半數換液(ye)方(fang)式，棄去(qu)半數培養(yang)基后，將剩余細(xi)(xi)胞懸起(qi)，將細(xi)(xi)胞懸液(ye)按(an)1：2到1：3的比例(li)分到新的含8ml培養(yang)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞(bao)(bao)凍存(cun)(cun)：待細胞(bao)(bao)生長狀(zhuang)態良好時(shi)，可進行(xing)細胞(bao)(bao)凍存(cun)(cun)。貼壁細胞(bao)(bao)凍存(cun)(cun)時(shi)，棄去(qu)培養基后(hou)加(jia)入少量胰酶(mei)，細胞(bao)(bao)變圓脫(tuo)落后(hou)，進行(xing)離心(xin)收集，1000RPM條件下離心(xin)8-10分鐘，去(qu)除上清(qing)，按凍存(cun)(cun)數量加(jia)入血清(qing)及DMSO，凍存(cun)(cun)比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小(xiao)管細(xi)(xi)胞，收到細(xi)(xi)胞后(hou)(hou)，用(yong)75%酒精噴灑整個管子消毒后(hou)(hou)放(fang)到超(chao)凈臺或(huo)安全柜內，嚴(yan)格無菌(jun)操作(zuo)；將小(xiao)管細(xi)(xi)胞轉移至T25培(pei)養瓶(ping)或(huo)6cm培(pei)養皿，加入(ru)5ml左右*培(pei)養基混勻，放(fang)入(ru)培(pei)養箱(xiang)過(guo)夜培(pei)養后(hou)(hou)查看(kan)細(xi)(xi)胞密度(du)：若密度(du)未超(chao)過(guo)80%，換液繼續培(pei)養，視情況(kuang)傳代或(huo)者凍存(cun)。若密度(du)超(chao)過(guo)80%，可直接進行傳代（方法(fa)同上）。

慧穎生物是一家專業從事細(xi)胞(bao)培(pei)養相關產品的公司，擁有(you)獨(du)立細(xi)胞(bao)房（可(ke)隨時(shi)約定(ding)參(can)觀），供應胎(tai)牛血(xue)清，無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，無血(xue)清培(pei)養基，常(chang)規培(pei)養基，胰酶，雙抗(kang)，*培(pei)養基，STR鑒定(ding)細(xi)胞(bao)，感(gan)受態細(xi)胞(bao)等，專業，專注，性(xing)價比(bi)高，是您(nin)Shou選之(zhi)家。

熱賣細胞(bao)：

貨號    簡稱    中文名稱    培養(yang)條件(jian)    特性    形(xing)態

H001    HeLa    人宮(gong)頸癌細胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞(bao)樣

H002    143B    人骨肉瘤細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H003    293T    人胚腎(shen)細(xi)胞 DMEM+10% FBS    貼壁    上(shang)皮細(xi)胞樣

H004    A2780   人(ren)卵(luan)巢癌(ai)細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H005    A549    人(ren)非小細胞肺癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H006    A673    人尤因肉瘤細胞  DMEM+10% FBS    貼壁  ;  多邊形

H007    AGS 人胃(wei)腺癌(ai)細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼(tie)壁    上(shang)皮(pi)細胞樣

H008    BGC823  人胃(wei)腺癌細胞(低分化)    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H009    C33A    人宮(gong)頸癌細胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼壁(bi)    上皮細胞(bao)樣

H010    CACO2   人結直腸(chang)腺癌細(xi)胞    DMEM+20% FBS    貼壁    上(shang)皮細(xi)胞樣

H011    COLO205 人結腸癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   半(ban)懸浮  上(shang)皮細胞樣

H012    DU145   人前(qian)列(lie)腺癌細胞  DMEM+10% FBS    貼(tie)壁    上皮細胞樣

H013    ES-2    人卵巢(chao)透(tou)明細胞(bao)(bao)癌(ai)細胞(bao)(bao)    McCoy's 5A+10%FBS   貼壁    上皮細胞(bao)(bao)樣

H014    H1650   人非小(xiao)細(xi)胞肺癌細(xi)胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上(shang)皮(pi)細(xi)胞樣

H015    H460    人大細(xi)胞(bao)肺(fei)癌細(xi)胞(bao)    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細(xi)胞(bao)樣

H016    HACAT   人永生化(hua)角質形成細(xi)胞(bao)    DMEM+15% FBS    貼壁    上皮細(xi)胞(bao)樣(yang)

H017    HCT116  人結腸癌細胞    McCoy's 5A+10%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H018    HEK293  人胚腎細(xi)(xi)胞 DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)(xi)胞樣(yang)

H019    HEPG2   人肝癌(ai)細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H020    HGC27   人胃癌細胞(未分(fen)化)  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H021    HT-29  人結腸癌(ai)細(xi)胞    McCoy's 5A+10%FBS   貼壁    上皮細(xi)胞樣

H022    HUVEC   人臍靜脈內皮(pi)細(xi)胞(bao)    ECM 貼壁   ; 上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)樣

H023    KYSE150 人食道(dao)癌細胞(bao)    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞(bao)樣(yang)

H024    L02(HL7702)(QSG-7701)   人(ren)正常肝細胞    RPMI-1640+20% FBS   貼壁    上皮(pi)細胞樣

H025    LOVO    人結腸(chang)癌細胞(bao)    F12K+10% FBS    貼壁    上皮細胞(bao)樣

H026    MCF-10A 人(ren)正(zheng)常乳腺(xian)上(shang)皮細胞  DMEM/F12(1:1) 培(pei)養基+胰島素(10ug/ml)+表皮生長因子(20ng/ml)+100ng/ml霍(huo)亂病毒 +5% 馬血清   貼壁    上(shang)皮細胞樣(yang)

H027    MCF7   人乳腺(xian)癌細胞    DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素(su)    貼(tie)壁 ;   上皮細胞樣

H028    LX-2    人肝星狀細(xi)胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)胞樣

H029    MDA-MB-468  人乳腺癌細胞    L-15+10% FBS    貼(tie)壁    上皮細胞樣

H030    MIA Paca2   人(ren)胰腺癌(ai)細(xi)胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼壁(bi)    上皮細(xi)胞(bao)樣 少量圓形(xing)懸浮

H031    NCI-H1299   人非(fei)小(xiao)細胞肺(fei)癌(ai)細胞 RPMI1640+10%FBS 貼壁    上皮細胞樣

H032    PANC-1  人胰(yi)腺癌細胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞(bao)樣

H033    RBE 人(ren)肝膽管癌細(xi)胞 DMEM+10%FBS 貼壁    上皮細(xi)胞樣

H034    SAOS-2  人成骨肉瘤細胞 McCoy's 5A+15%FBS   貼(tie)壁    上皮細胞樣

H035    SiHa    人子宮頸鱗癌(ai)細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮(pi)細胞樣

H036    NB 4    急性早幼粒細(xi)胞白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞    RPMI-1640+10% FBS   懸浮(fu)    圓形

H037    SPC-A-1 人肺(fei)腺癌細(xi)(xi)胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)(xi)胞(bao)樣

H038    SW480   人結腸癌細(xi)胞    L-15+10% FBS    貼(tie)壁    上皮細(xi)胞樣

H039    U-87MG 人腦星形膠質母細(xi)胞(bao)瘤細(xi)胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼(tie)壁(bi)    上皮細(xi)胞(bao)樣

H040    ZR-75-1 人乳腺癌細胞(bao)    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上(shang)皮細胞(bao)樣(yang)

H041    SW1116  人結腸(chang)腺(xian)癌細(xi)(xi)胞  L-15+10% FBS    貼壁    上皮(pi)細(xi)(xi)胞樣

H042    293A    人胚腎細(xi)胞(bao)(bao)  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)胞(bao)(bao)樣

H043   ; SGC-7901    人胃(wei)腺癌細胞(bao)    RPMI-1640 +10% FBS  貼壁    上皮細胞(bao)樣

H044    Ishikawa    人子宮內膜癌細胞    DMEM+10% FBS    貼(tie)壁    上皮細胞樣

H045    Eca-109 人食管(guan)癌細胞(bao)    RPMI-1640+10% FBS   貼(tie)壁  ;  上皮細胞(bao)樣(yang)

H046    RD-ES   人尤文氏肉瘤(liu)    RPMI-1640+15% FBS   貼壁    上皮(pi)細胞樣

H047    NCI-H1437   人肺癌細胞(bao)  RPMI-1640+10% FBS   貼壁(bi)   ; 上(shang)皮細胞(bao)樣

H048    HOS     人骨(gu)肉瘤(liu)細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H049    Hela S3 人宮頸癌(ai)細(xi)(xi)胞    F12K+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)(xi)胞樣

H050    ECC1    人宮頸內膜腺癌細(xi)胞(bao)  DMEM+10% FBS   ; 貼壁(bi)    上皮細(xi)胞(bao)樣

H051    SUP-B15     人Ph+急淋白血病細胞(bao)系   IMDM+20% FBS ;   懸浮    淋巴母(mu)細胞(bao)樣

H052    TF-1    人血液白血病細胞    RPMI1640+ 10% FBS+2ng/mL 重組人GM-CSF   懸(xuan)浮    淋巴(ba)母細胞樣

H053    NCI-H446    人小細(xi)胞(bao)(bao)肺癌細(xi)胞(bao)(bao)    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上(shang)皮細(xi)胞(bao)(bao)樣(yang)

H054    GES-1   人胃(wei)正常黏膜上皮細胞 ;   RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣(yang)

H055    IOSE80 人卵巢正(zheng)常上皮(pi)細(xi)胞株    RPMI-1640+10% FBS   貼壁(bi)    上皮(pi)細(xi)胞樣

H056    GIST882 人胃腸道(dao)間質瘤細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁(bi)    上皮細胞樣

H057    KGN 人(ren)卵(luan)巢顆粒細胞癌(ai)    DMEM/F12(1:1)+10% FBS   貼(tie)壁    上皮(pi)細胞樣(yang)

H058    U937    人組(zu)織細(xi)胞(bao)(bao)淋巴(ba)瘤細(xi)胞(bao)(bao)    RPMI-1640 +10% FBS  懸浮    單核(he)細(xi)胞(bao)(bao)樣(yang)

H059    SV-HUC-1    人膀胱(guang)上皮永生化細(xi)胞    F12K+10% FBS    貼(tie)壁    上皮細(xi)胞樣

H060    tpc-1   人乳(ru)頭瘤狀(zhuang)甲狀(zhuang)腺(xian)癌(ai)細胞  F12K+10% FBS    貼壁    上皮(pi)細胞樣

H061    hela-luci   Luciferase穩定表(biao)達Hela細(xi)胞 DMEM(L)+10% FBS 貼(tie)壁(bi)    上皮細(xi)胞樣

H062    colo320 人結腸癌細(xi)胞    RPMI-1640+10% FBS   半懸浮  圓形

H063    bxpc-3  人胰腺腺癌細胞(bao)  RPMI-1640+10% FBS   貼壁(bi) ;   上皮(pi)細胞(bao)樣

H064    raji    人Burkitt's淋(lin)巴瘤細胞(bao)  RPMI-1640+10% FBS   懸浮    淋(lin)巴母細胞(bao)樣

H065    5637    人(ren)膀(bang)胱癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H066    chang-liver 人肝(gan)細胞(已被hela污染）    DMEM(L)+10% FBS 貼壁  ;  上皮細胞樣

H067    a549-gfp    gfp標記的A549細(xi)胞(bao)  F12K+10% FBS    貼壁    上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)樣

H068    hs578.t 人乳腺癌(ai)細胞(bao)    DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素    貼壁(bi)    上皮(pi)細胞(bao)樣(yang)

H069    T24 人膀胱(guang)移行細胞(bao)癌細胞(bao)    McCoy's 5A+15%FBS   貼壁    上皮細胞(bao)樣(yang)

H070    K562    人慢(man)性(xing)髓系(xi)白(bai)血(xue)病細胞    IMDM+10% FBS    懸浮    淋巴母細胞樣

H071    EH-GB1  人膽(dan)囊癌細胞（表達GFP和(he)RED2）  DMEM+15% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H072    skov-3  人卵(luan)巢腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)  McCoy's 5A+15%FBS   貼壁    上皮細(xi)胞(bao)樣

H073    ECV304  人膀胱癌細胞(bao)（T24衍生(sheng)物）   M199+20%FBS 貼(tie)壁(bi)    上(shang)皮細胞(bao)樣

H074    nci-n87 人胃癌細(xi)胞 ; RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮(pi)細(xi)胞樣

H075    B-CPAP  人(ren)甲狀腺癌(ai)細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H076    NCI-H1975   人非小(xiao)細胞肺腺癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮(pi)細胞樣

H077    HK-2    人腎皮質近曲小管上(shang)皮細(xi)胞    DMEM/F12(1:1)+10% FBS   貼壁    上(shang)皮細(xi)胞樣(yang)

H078    J82 人膀(bang)胱(guang)癌細胞  ;  DMEM(L)+10% FBS 貼壁(bi)    上皮(pi)細胞樣

H079    A431    人皮膚鱗(lin)癌細胞(bao)  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞(bao)樣

H080    MG63    人骨肉瘤細(xi)胞    DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細(xi)胞樣

H081    SW48    人結腸癌細(xi)胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)胞樣(yang)

H082    ME180   人宮頸表皮樣癌  McCoy's 5A+10%FBS   貼(tie)壁(bi)    上皮細(xi)胞(bao)樣

H083    hepaRG-GFP  Gfp標記的人(ren)肝癌(ai)細(xi)胞 DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細(xi)胞樣(yang)

H084    BEAS-2B 人正常肺上皮(pi)細胞(bao)    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮(pi)細胞(bao)樣

H085    THP-1  ATCC：TIB-202    人髓系(xi)白血病單核細(xi)胞    RPMI-1640+10% FBS   懸浮(fu)    單核細(xi)胞樣

H086    PC9 人肺癌細(xi)胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xi)胞樣

H087    Fadu    人(ren)咽鱗癌(ai)細胞(bao)    DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上(shang)皮細胞(bao)樣

H088    Huh7    人肝癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮(pi)細(xi)胞(bao)(bao)樣(yang)

H089    Hcc9810 人肝癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮(pi)細胞樣

H090   ; Jurkat cloneE6-1    人急性(xing)T淋(lin)巴(ba)(ba)細(xi)胞(bao)白血病細(xi)胞(bao)  RPMI-1640+10% FBS   懸浮(fu)    淋(lin)巴(ba)(ba)母細(xi)胞(bao)樣

H091    KBM-7   人慢性粒細(xi)胞白(bai)血病細(xi)胞  IMDM+10% FBS    懸浮    圓(yuan)形

H092    GBC-SD  人(ren)膽囊癌細胞(bao)    RPMI-1640+10% FBS   貼(tie)壁    上皮細胞(bao)樣(yang)

H093    JEKO-1  人套細胞(bao)淋巴癌細胞(bao)  RPMI-1640+20% FBS   懸浮    圓形(xing)

H094    CAL27   人(ren)口腔鱗(lin)癌  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H095    DB  彌漫大B細胞淋(lin)巴(ba)瘤細胞  RPMI-1640+10% FBS   懸浮    淋(lin)巴(ba)母細胞樣(yang)

H096    hne1-lmp1   轉入LMP1基(ji)因人鼻咽(yan)癌細胞   RPMI-1640+10% FBS   貼壁(bi)    上(shang)皮細胞樣(yang)

H097    nci-h226    人(ren)肺(fei)鱗癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上(shang)皮(pi)細胞樣

H098    hepg2.2.15  人肝癌細(xi)胞(bao)  DMEM+10% FBS    貼(tie)壁    上皮細(xi)胞(bao)樣