NK-92MI 細胞傳(chuan)代(dai)方法 慧穎生物墻裂推薦

產品名稱：NK-92MI 人惡性(xing)非(fei)霍奇金(jin)淋(lin)巴瘤患(huan)者的自然(ran)殺傷細胞

貨號(hao)：H103

種屬：人

來源：ATCC/中(zhong)科院(yuan)/協和醫院(yuan)等(deng)地引(yin)進

生長(chang)狀(zhuang)態：懸浮 淋巴母細胞(bao)養 成團聚集(ji)

培養條件：培養基：a-MEM（無核酸，有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉） +43.2μg/mL Inositol+8.82μg/mL Folic acid+0.1mM 2-巰&基乙醇+12.5%FBS+12.5%HS+1% P/S（推(tui)薦HAKATA優(you)等(deng)胎(tai)牛血清，貨號:HN-FBS-50; 馬(ma)血清，貨號：HM-FBS-50）

溫(wen)度：37℃     氣相：95%空氣,5% CO2

傳代方法：

用75%酒精噴灑整個培(pei)(pei)養(yang)瓶消毒，將其豎直置(zhi)于培(pei)(pei)養(yang)箱中進(jin)行2-4小(xiao)時的(de)緩沖，.然(ran)后置(zhi)于無菌(jun)操作臺(tai)，打開瓶口，小(xiao)心吸(xi)取上(shang)層培(pei)(pei)養(yang)基(ji)，留2-4ml培(pei)(pei)養(yang)基(ji)以(yi)將大部(bu)分細(xi)胞留在培(pei)(pei)養(yang)瓶底部(bu)，加入新(xin)鮮培(pei)(pei)養(yang)基(ji)。吸(xi)取出的(de)舊(jiu)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)1000r/min 離心5min后，去除上(shang)清，根據細(xi)胞數量決定是(shi)合到一起還是(shi)另行取新(xin)培(pei)(pei)養(yang)瓶培(pei)(pei)養(yang)。根據細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)況及(ji)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)顏色變化對其進(jin)行換液或傳代，每2至(zhi)3天加入新(xin)鮮培(pei)(pei)養(yang)基(ji)（根據細(xi)胞密度）,盡量少用離心的(de)方式換液;

通過添加新鮮培養基來維持培養。或者可以通過離心去除舊培養基，再加入新培養基并以2-3×10⁵個活細胞/mL的密度再懸浮進行培養。建議將細胞密度維持在2×10⁵個至1×10⁶個細胞/mL之間。當細胞團過大時可輕輕吹打成小細胞團，不要吹打過度。

常見問(wen)題及(ji)解決方案：

1.培養(yang)瓶有(you)破裂(lie)，培養(yang)液(ye)有(you)漏液(ye)：細胞極大可能會污(wu)染，所(suo)以我們會及時安(an)排幫老師解(jie)決(jue)。

2.收(shou)到細胞(bao)后(hou)盡快(kuai)更換為(wei)含 10%血(xue)清的(de)新鮮培(pei)養(yang)基，如因特殊(shu)情況需要繼(ji)續使用(yong)原(yuan)瓶培(pei)養(yang)基，請在原(yuan)瓶培(pei)養(yang)基中額外(wai)添加(jia) 10%的(de)血(xue)清（原(yuan)瓶培(pei)養(yang)基的(de)繼(ji)續使用(yong)時間(jian)長不宜超過 72 小時）

3.細(xi)(xi)胞(bao)漂浮：培(pei)養瓶(ping)不開封，瓶(ping)口(kou)酒精擦拭后平躺(tang)放置在培(pei)養箱。1-2小時后觀(guan)察(cha)，如(ru)(ru)細(xi)(xi)胞(bao)大部(bu)分又貼(tie)回瓶(ping)底，表明細(xi)(xi)胞(bao)活(huo)力正(zheng)常，剩余漂浮的(de)細(xi)(xi)胞(bao)可以去掉，留8-10ml培(pei)養液(ye)培(pei)養觀(guan)察(cha)，細(xi)(xi)胞(bao)生長至匯合度80%，進行消(xiao)化(hua)傳代；如(ru)(ru)細(xi)(xi)胞(bao)還(huan)是不貼(tie)壁，將細(xi)(xi)胞(bao)離(li)心收集轉到(dao)新培(pei)養瓶(ping)，原培(pei)養瓶(ping)加(jia)部(bu)分培(pei)養液(ye)繼續培(pei)養，中間(jian)注意觀(guan)察(cha)，我們的(de)技術人(ren)員會(hui)一直跟蹤指導，直到(dao)問題解決(jue)。

保存方法：

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預熱后使用。)

保存(cun)條件(jian)：液氮存(cun)儲

僅(jin)供研(yan)究之用

來源(yuan)：慧穎生物(wu)，盜圖(tu)必究