143B細(xi)胞(bao)| 143B細(xi)胞(bao)系 培養步驟(zou)

產品名稱：143B細胞

中文名稱：人骨肉(rou)瘤細(xi)胞；143B

規格：T25

供應(ying)商：上海慧(hui)穎生物(wu)科技有限公司

復蘇周期：10個工作日左(zuo)右

培養步驟：

1）復蘇細(xi)胞(bao)：將(jiang)含有1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管在(zai)37℃水(shui)浴中迅速搖晃解凍，加(jia)(jia)入5mL培養(yang)基混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000RPM條件(jian)下離心5分鐘，棄去上清液，補加(jia)(jia)4-6mL*培養(yang)基后(hou)吹(chui)勻(yun)。然后(hou)將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)(jia)入培養(yang)瓶中培養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)(jia)入6cm皿中），培養(yang)過夜。第二天換液并檢查細(xi)胞(bao)密度。

2）細胞(bao)傳代：如果細胞(bao)密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于(yu)貼壁(bi)細胞，傳(chuan)代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，置于(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2min，然(ran)后(hou)在(zai)顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分變(bian)圓并脫落，迅速拿(na)回操作(zuo)臺，輕(qing)敲幾下(xia)培養(yang)瓶后(hou)加5ml以上(shang)含10%血清的*培養(yang)基(ji)終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出(chu)，在1000RPM條件(jian)下(xia)離心8-10分鐘，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，補加1-2mL培養(yang)液(ye)后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液(ye)，將細胞懸液(ye)按1：2到1：5的(de)比例分到新的(de)含5-6 ml培養液(ye)的(de)新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到(dao)2ml小管細胞(bao)，收到(dao)細胞(bao)后(hou)，用75%酒精噴灑整個管子消(xiao)毒(du)后(hou)放到(dao)超凈(jing)臺或(huo)安全(quan)柜內，嚴格(ge)無菌(jun)操作；將(jiang)小管細胞(bao)轉移(yi)至T25培(pei)養瓶(ping)或(huo)6cm培(pei)養皿，加(jia)入5ml左右*培(pei)養基混(hun)勻(yun)，放入培(pei)養箱過夜(ye)培(pei)養后(hou)查看細胞(bao)密(mi)度(du)：若密(mi)度(du)未超過80%，換液繼續培(pei)養，視情況傳代(dai)或(huo)者凍存。若密(mi)度(du)超過80%，可(ke)直(zhi)接(jie)進行傳代(dai)（方法同(tong)上）。

2、對于(yu)懸浮(fu)細胞，傳代可(ke)參考以下方法：

方法一：收集細(xi)胞，1000RPM條件(jian)下離心8-10分(fen)鐘，棄去上清液(ye)，補(bu)加1-2mL培(pei)(pei)養(yang)液(ye)后吹(chui)勻，將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)按1：2到(dao)1：5的(de)比例分(fen)到(dao)新的(de)含8ml培(pei)(pei)養(yang)基的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)。

方(fang)法二：可選擇半數換液(ye)方(fang)式，棄去半數培養基后，將(jiang)剩(sheng)余細胞懸起(qi)，將(jiang)細胞懸液(ye)按1：2到1：3的(de)比例分到新的(de)含8ml培養基的(de)新皿中或者瓶(ping)中。

3）細胞凍存(cun)(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀態良好時，可進行細胞凍存(cun)(cun)。貼壁細胞凍存(cun)(cun)時，棄去培養(yang)基后加(jia)入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收(shou)集，1000RPM條件(jian)下離心8-10分鐘(zhong)，去除上清，按(an)凍存(cun)(cun)數量加(jia)入血清及DMSO，凍存(cun)(cun)比例(li)為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客(ke)戶收到2ml小管細(xi)胞(bao)(bao)，收到細(xi)胞(bao)(bao)后，用75%酒(jiu)精噴灑整(zheng)個管子消毒(du)后放到超凈臺或(huo)安(an)全柜內，嚴格無菌操作；將小管細(xi)胞(bao)(bao)轉移至(zhi)T25培(pei)養(yang)瓶或(huo)6cm培(pei)養(yang)皿，加(jia)入5ml左右(you)*培(pei)養(yang)基混(hun)勻(yun)，放入培(pei)養(yang)箱過夜培(pei)養(yang)后查看(kan)細(xi)胞(bao)(bao)密度(du)：若密度(du)未超過80%，換液繼續培(pei)養(yang)，視情況傳代(dai)或(huo)者凍存。若密度(du)超過80%，可(ke)直(zhi)接進行傳代(dai)（方法同上）。

慧穎生物是一(yi)家(jia)(jia)專(zhuan)業從事細(xi)胞培養相關產品的公司，擁有獨立細(xi)胞房（可隨時約定參觀），供應(ying)胎牛血(xue)清(qing)(qing)，無血(xue)清(qing)(qing)細(xi)胞凍(dong)存液，無血(xue)清(qing)(qing)培養基(ji)(ji)，常規培養基(ji)(ji)，胰酶，雙抗，*培養基(ji)(ji)，STR鑒定細(xi)胞，感受(shou)態細(xi)胞等，專(zhuan)業，專(zhuan)注，性價比高，是您(nin)Shou選之家(jia)(jia)。

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