22RV1細胞| 22RV1細胞系(xi) 培養步驟

產(chan)品名稱：22RV1細胞

中文名稱(cheng)：人前列腺癌細胞；22RV1

規(gui)格：T25

供(gong)應商：上海(hai)慧(hui)穎生物科技有限公(gong)司(si)

復(fu)蘇(su)周期：10個工作日左右

培養步驟：

1）復蘇細(xi)(xi)胞：將(jiang)含有1mL細(xi)(xi)胞懸液的(de)凍存管在(zai)37℃水浴中迅速搖(yao)晃解凍，加入(ru)5mL培養基混合均(jun)勻(yun)(yun)。在(zai)1000RPM條件下(xia)離(li)心5分(fen)鐘，棄(qi)去上清(qing)液，補(bu)加4-6mL*培養基后吹勻(yun)(yun)。然后將(jiang)所有細(xi)(xi)胞懸液加入(ru)培養瓶中培養過夜(ye)（或將(jiang)細(xi)(xi)胞懸液加入(ru)6cm皿中），培養過夜(ye)。第二天換(huan)液并(bing)檢查細(xi)(xi)胞密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞(bao)(bao)傳(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞(bao)(bao)密度達(da)80%-90%，即可進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考(kao)以下方(fang)法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的(de)PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消(xiao)化(hua)(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培(pei)養(yang)(yang)瓶中(zhong)(zhong)，置于(yu)37℃培(pei)養(yang)(yang)箱中(zhong)(zhong)消(xiao)化(hua)(hua)1-2min，然(ran)后在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)(xi)胞(bao)(bao)消(xiao)化(hua)(hua)情況，若細(xi)(xi)胞(bao)(bao)大部分變圓并脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操(cao)作臺，輕敲幾下(xia)培(pei)養(yang)(yang)瓶后加5ml以上含10%血(xue)清的*培(pei)養(yang)(yang)基終止消(xiao)化(hua)(hua)。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件(jian)下離(li)心8-10分鐘，棄去上(shang)清液，補加(jia)1-2mL培養液后吹勻。

4. 按(an)(an)5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按(an)(an)1：2到1：5的比例分到新(xin)(xin)的含5-6 ml培養液的新(xin)(xin)皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

PS：若客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)(dao)2ml小(xiao)管(guan)細(xi)胞(bao)，收(shou)到(dao)(dao)細(xi)胞(bao)后，用(yong)75%酒精噴(pen)灑(sa)整個(ge)管(guan)子消(xiao)毒后放(fang)到(dao)(dao)超(chao)凈臺(tai)或安全柜內，嚴(yan)格(ge)無菌操作；將小(xiao)管(guan)細(xi)胞(bao)轉移至T25培養瓶(ping)或6cm培養皿(min)，加入5ml左右*培養基混勻，放(fang)入培養箱過夜培養后查(cha)看細(xi)胞(bao)密度：若密度未超(chao)過80%，換液繼續培養，視(shi)情(qing)況傳代(dai)或者凍(dong)存。若密度超(chao)過80%，可直接進(jin)行(xing)傳代(dai)（方法同上）。

2、對(dui)于懸浮細胞，傳(chuan)代可參(can)考以下方法(fa)：

方法一：收集細胞(bao)，1000RPM條件下離心8-10分(fen)(fen)鐘，棄去上清液(ye)，補加1-2mL培養(yang)液(ye)后吹(chui)勻(yun)，將細胞(bao)懸液(ye)按(an)1：2到1：5的(de)比(bi)例分(fen)(fen)到新的(de)含8ml培養(yang)基的(de)新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

方(fang)法二：可選擇半(ban)數(shu)換液(ye)方(fang)式，棄去半(ban)數(shu)培(pei)養(yang)基后，將(jiang)剩(sheng)余(yu)細胞懸起，將(jiang)細胞懸液(ye)按1：2到1：3的(de)比例分(fen)到新(xin)(xin)的(de)含(han)8ml培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)(xin)皿(min)中或者瓶中。

3）細胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)(bao)生(sheng)長狀態良好時，可進行細胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)。貼壁細胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)時，棄(qi)去培養基后加入少量胰(yi)酶，細胞(bao)(bao)變圓脫落(luo)后，進行離心(xin)收集，1000RPM條件下離心(xin)8-10分鐘，去除(chu)上(shang)清，按凍(dong)存(cun)數量加入血清及DMSO，凍(dong)存(cun)比例(li)為(wei)90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管細(xi)胞，收到細(xi)胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超(chao)(chao)凈臺或(huo)安(an)全柜內，嚴格無(wu)菌操作；將小管細(xi)胞轉移至T25培養(yang)(yang)瓶或(huo)6cm培養(yang)(yang)皿，加(jia)入5ml左右*培養(yang)(yang)基混(hun)勻，放入培養(yang)(yang)箱過(guo)夜(ye)培養(yang)(yang)后查看細(xi)胞密度：若密度未超(chao)(chao)過(guo)80%，換液繼續培養(yang)(yang)，視(shi)情況傳代(dai)或(huo)者凍存。若密度超(chao)(chao)過(guo)80%，可(ke)直接(jie)進行傳代(dai)（方法同(tong)上）。

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