3AO細(xi)胞|3AO細(xi)胞系(xi) 培養步驟

產(chan)品名稱：3AO細(xi)胞

中文名稱：人卵巢癌細(xi)胞；3AO

規格：T25

供應(ying)商(shang)：上海慧穎(ying)生物科技(ji)有限公司

復(fu)蘇周期：10個工作日左右

培養步(bu)驟：

1）復蘇(su)細(xi)胞(bao)：將含有(you)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存管(guan)在37℃水浴中(zhong)(zhong)迅速搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)(jia)(jia)入5mL培(pei)養(yang)(yang)基混合均(jun)勻(yun)。在1000RPM條(tiao)件下離心5分鐘，棄去上清液(ye)，補(bu)加(jia)(jia)(jia)4-6mL*培(pei)養(yang)(yang)基后吹勻(yun)。然后將所有(you)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)(jia)(jia)入培(pei)養(yang)(yang)瓶中(zhong)(zhong)培(pei)養(yang)(yang)過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)(jia)(jia)入6cm皿中(zhong)(zhong)），培(pei)養(yang)(yang)過(guo)夜。第二天換(huan)液(ye)并(bing)檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2）細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如果細(xi)胞(bao)密度(du)達80%-90%，即可進行(xing)傳(chuan)代培養。

1、對于貼(tie)壁細胞，傳(chuan)代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

2. 加(jia)1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)(pei)養(yang)瓶中，置于37℃培(pei)(pei)養(yang)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞(bao)消化情況，若細胞(bao)大部分變圓并脫落(luo)，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培(pei)(pei)養(yang)瓶后加(jia)5ml以上(shang)含10%血清的*培(pei)(pei)養(yang)基終止(zhi)消化。

3.輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘(zhong)，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2mL培養(yang)液(ye)后吹(chui)勻。

4. 按5-6ml/瓶(ping)(ping)補加培養液，將細胞懸(xuan)液按1：2到(dao)1：5的(de)比例分到(dao)新的(de)含5-6 ml培養液的(de)新皿中或者(zhe)瓶(ping)(ping)中。

PS：若(ruo)(ruo)客戶收(shou)到(dao)2ml小管細(xi)胞(bao)，收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)后，用75%酒精噴灑整(zheng)個管子消(xiao)毒后放到(dao)超(chao)(chao)凈臺或安全柜內(nei)，嚴格無菌操作(zuo)；將小管細(xi)胞(bao)轉(zhuan)移至T25培(pei)養(yang)瓶或6cm培(pei)養(yang)皿，加(jia)入(ru)5ml左右*培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)勻，放入(ru)培(pei)養(yang)箱過(guo)夜培(pei)養(yang)后查看細(xi)胞(bao)密度(du)：若(ruo)(ruo)密度(du)未超(chao)(chao)過(guo)80%，換液(ye)繼續(xu)培(pei)養(yang)，視情(qing)況傳代或者凍(dong)存。若(ruo)(ruo)密度(du)超(chao)(chao)過(guo)80%，可直接進行傳代（方法同(tong)上）。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集(ji)細胞，1000RPM條件下離(li)心(xin)8-10分鐘，棄(qi)去上清液(ye)(ye)，補(bu)加1-2mL培(pei)養液(ye)(ye)后吹勻，將細胞懸(xuan)液(ye)(ye)按1：2到1：5的比(bi)例分到新的含8ml培(pei)養基的新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

方法(fa)二(er)：可選擇半數換液方式(shi)，棄去半數培養(yang)基后(hou)，將剩(sheng)余細(xi)(xi)胞懸起，將細(xi)(xi)胞懸液按(an)1：2到(dao)1：3的比例分到(dao)新(xin)的含8ml培養(yang)基的新(xin)皿中或者瓶中。

3）細胞凍(dong)存(cun)(cun)(cun)：待(dai)細胞生長狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可進行細胞凍(dong)存(cun)(cun)(cun)。貼壁細胞凍(dong)存(cun)(cun)(cun)時(shi)，棄(qi)去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫(tuo)落(luo)后，進行離(li)(li)心收集，1000RPM條(tiao)件下離(li)(li)心8-10分鐘(zhong)，去除(chu)上清，按凍(dong)存(cun)(cun)(cun)數量加入血清及DMSO，凍(dong)存(cun)(cun)(cun)比例(li)為(wei)90%FBS+10%DMSO。

PS：若(ruo)客戶收到2ml小(xiao)管細胞(bao)，收到細胞(bao)后，用(yong)75%酒(jiu)精噴灑整個管子消毒后放(fang)(fang)到超凈臺或(huo)安全柜內，嚴格(ge)無菌操作；將小(xiao)管細胞(bao)轉(zhuan)移至T25培(pei)養瓶或(huo)6cm培(pei)養皿，加入5ml左右*培(pei)養基混勻(yun)，放(fang)(fang)入培(pei)養箱過(guo)夜培(pei)養后查看細胞(bao)密(mi)度(du)：若(ruo)密(mi)度(du)未超過(guo)80%，換液繼續培(pei)養，視(shi)情況傳代(dai)或(huo)者凍(dong)存。若(ruo)密(mi)度(du)超過(guo)80%，可直接(jie)進行傳代(dai)（方(fang)法同上(shang)）。

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