5-8F細胞|5-8F細胞系 培養步驟(zou)

產品(pin)名稱：5-8F細(xi)胞(bao)

中文名稱：人高轉(zhuan)移鼻(bi)咽癌細胞系(xi)；5-8F

規格：T25

供(gong)應商：上海慧穎(ying)生物科技有(you)限(xian)公司

復蘇周(zhou)期：10個(ge)工(gong)作日(ri)左右(you)

培養步驟：

1）復蘇細胞(bao)：將含有(you)1mL細胞(bao)懸液(ye)的凍存管在37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖晃解凍，加(jia)入5mL培(pei)(pei)養(yang)基混合均(jun)勻。在1000RPM條(tiao)件(jian)下(xia)離心5分鐘(zhong)，棄去上清液(ye)，補(bu)加(jia)4-6mL*培(pei)(pei)養(yang)基后(hou)吹勻。然(ran)后(hou)將所有(you)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入培(pei)(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)(pei)養(yang)過(guo)夜（或將細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入6cm皿中(zhong)），培(pei)(pei)養(yang)過(guo)夜。第二天換液(ye)并檢查細胞(bao)密度(du)。

2）細胞傳代：如果細胞密度(du)達80%-90%，即可進(jin)行傳代培(pei)養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考(kao)以(yi)下方(fang)法(fa)：

1. 棄去培養(yang)上清，用(yong)不含鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗細胞1-2次。

2. 加(jia)1-2ml消(xiao)化(hua)(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)養(yang)瓶(ping)中，置于37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化(hua)(hua)1-2min，然后在顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞消(xiao)化(hua)(hua)情(qing)況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操(cao)作臺，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)后加(jia)5ml以上含10%血(xue)清(qing)的*培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)(hua)。

3.輕輕吹(chui)打細胞，*脫落(luo)后(hou)(hou)吸出，在1000RPM條(tiao)件下離心8-10分鐘，棄去上清(qing)液，補加1-2mL培養液后(hou)(hou)吹(chui)勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將(jiang)細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或(huo)者瓶中。

PS：若(ruo)客(ke)戶收到(dao)(dao)2ml小(xiao)管細(xi)胞，收到(dao)(dao)細(xi)胞后，用75%酒精(jing)噴灑整個管子消毒后放(fang)到(dao)(dao)超(chao)凈臺(tai)或(huo)安全柜內(nei)，嚴(yan)格無菌(jun)操作；將(jiang)小(xiao)管細(xi)胞轉移至T25培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶或(huo)6cm培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿(min)，加入5ml左右*培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基混勻，放(fang)入培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱過(guo)(guo)夜培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)后查看細(xi)胞密(mi)度：若(ruo)密(mi)度未超(chao)過(guo)(guo)80%，換液繼續培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)，視情況傳(chuan)代(dai)或(huo)者凍存。若(ruo)密(mi)度超(chao)過(guo)(guo)80%，可直接進行傳(chuan)代(dai)（方法同上）。

2、對于懸浮細胞(bao)，傳代可參(can)考以下方法：

方(fang)法(fa)一：收集細胞，1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘，棄去上清(qing)液(ye)，補加1-2mL培養液(ye)后(hou)吹勻(yun)，將細胞懸液(ye)按1：2到1：5的比例分到新(xin)的含8ml培養基的新(xin)皿中或者瓶中。

方法二：可選(xuan)擇(ze)半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余(yu)細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的(de)比(bi)例分到新的(de)含8ml培養基的(de)新皿(min)中或者瓶(ping)中。

3）細(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍存：待細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長狀態良(liang)好時，可進行(xing)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍存。貼壁(bi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍存時，棄去培養基后加入少(shao)量胰(yi)酶，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)變圓脫落后，進行(xing)離心收集，1000RPM條件下離心8-10分(fen)鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到(dao)2ml小管(guan)(guan)(guan)細胞，收到(dao)細胞后(hou)，用75%酒(jiu)精噴灑(sa)整(zheng)個管(guan)(guan)(guan)子消毒(du)后(hou)放到(dao)超(chao)凈臺(tai)或安全(quan)柜(ju)內，嚴格無菌操作；將小管(guan)(guan)(guan)細胞轉移(yi)至T25培(pei)(pei)養(yang)瓶或6cm培(pei)(pei)養(yang)皿，加入(ru)(ru)5ml左右*培(pei)(pei)養(yang)基混勻，放入(ru)(ru)培(pei)(pei)養(yang)箱過(guo)夜培(pei)(pei)養(yang)后(hou)查看細胞密度：若密度未超(chao)過(guo)80%，換液(ye)繼(ji)續培(pei)(pei)養(yang)，視情況傳代或者凍存(cun)。若密度超(chao)過(guo)80%，可直接進(jin)行傳代（方法同上）。

慧穎生物是一家專業(ye)從事細胞(bao)培養相關(guan)產品的公司，擁有獨(du)立(li)細胞(bao)房（可(ke)隨(sui)時約定(ding)參(can)觀），供應胎牛血清，無血清細胞(bao)凍(dong)存液，無血清培養基(ji)，常規(gui)培養基(ji)，胰酶，雙(shuang)抗，*培養基(ji)，STR鑒定(ding)細胞(bao)，感受(shou)態細胞(bao)等，專業(ye)，專注，性價比高(gao)，是您Shou選之家。

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