AGS細胞(bao)|AGS細胞(bao)系(xi) 培養步驟

產品名(ming)稱：AGS細胞

中文名稱：人(ren)胃腺(xian)癌細胞；AGS

規格：T25

供應(ying)商：上海(hai)慧穎生物科技有限公(gong)司

復蘇(su)周期(qi)：10個工作(zuo)日左右

培養(yang)步驟：

1）復(fu)蘇細(xi)胞(bao)(bao)：將含有(you)1mL細(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)(ye)(ye)的凍存管在(zai)37℃水浴中迅速搖晃解(jie)凍，加入(ru)(ru)5mL培(pei)(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液(ye)(ye)(ye)(ye)，補加4-6mL*培(pei)(pei)養(yang)基后吹(chui)勻。然后將所有(you)細(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)(ye)(ye)加入(ru)(ru)培(pei)(pei)養(yang)瓶中培(pei)(pei)養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)(ye)(ye)加入(ru)(ru)6cm皿(min)中），培(pei)(pei)養(yang)過夜。第二天換液(ye)(ye)(ye)(ye)并檢查細(xi)胞(bao)(bao)密度。

2）細胞傳(chuan)代(dai)：如果細胞密度達80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代(dai)培養。

1、對于貼(tie)壁細胞(bao)，傳代可參考(kao)以(yi)下方法：

1. 棄(qi)去培養上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化(hua)(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，置于37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化(hua)(hua)1-2min，然后(hou)在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)(hua)情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部分變圓并(bing)脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶后(hou)加5ml以上含10%血清的*培(pei)養(yang)基終止消化(hua)(hua)。

3.輕輕吹(chui)打細(xi)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件(jian)下離心8-10分鐘，棄(qi)去上清液，補加(jia)1-2mL培養(yang)液后吹(chui)勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1：2到1：5的比例分到新的含(han)5-6 ml培養液的新皿中或(huo)者瓶中。

PS：若客戶收(shou)到2ml小管(guan)細(xi)胞，收(shou)到細(xi)胞后(hou)，用75%酒精(jing)噴灑整個管(guan)子消毒后(hou)放到超(chao)凈臺或(huo)(huo)安全(quan)柜內，嚴格無(wu)菌操作；將小管(guan)細(xi)胞轉移至(zhi)T25培(pei)(pei)養(yang)瓶或(huo)(huo)6cm培(pei)(pei)養(yang)皿，加入5ml左右*培(pei)(pei)養(yang)基混(hun)勻，放入培(pei)(pei)養(yang)箱過夜培(pei)(pei)養(yang)后(hou)查看(kan)細(xi)胞密度：若密度未超(chao)過80%，換(huan)液繼續培(pei)(pei)養(yang)，視情況傳(chuan)代或(huo)(huo)者(zhe)凍存。若密度超(chao)過80%，可直接進行傳(chuan)代（方法同(tong)上）。

2、對于懸浮(fu)細(xi)胞，傳代可參考以下方法：

方法一(yi)：收(shou)集細胞，1000RPM條件(jian)下離(li)心8-10分鐘，棄(qi)去上清液，補(bu)加1-2mL培養(yang)液后吹勻(yun)，將細胞懸液按1：2到1：5的(de)比例分到新(xin)的(de)含8ml培養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或者瓶中。

方(fang)法二(er)：可選擇半數換(huan)液方(fang)式，棄去半數培養(yang)(yang)基(ji)(ji)后，將(jiang)剩余細胞懸起，將(jiang)細胞懸液按1：2到(dao)1：3的(de)比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8ml培養(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)新(xin)皿(min)中或者瓶(ping)中。

3）細胞(bao)凍(dong)(dong)存：待細胞(bao)生長(chang)狀態良(liang)好(hao)時，可進行細胞(bao)凍(dong)(dong)存。貼壁細胞(bao)凍(dong)(dong)存時，棄去(qu)培(pei)養基后加(jia)入(ru)少量胰酶，細胞(bao)變圓(yuan)脫落后，進行離(li)(li)心收集，1000RPM條件下離(li)(li)心8-10分鐘，去(qu)除上清(qing)，按凍(dong)(dong)存數量加(jia)入(ru)血清(qing)及(ji)DMSO，凍(dong)(dong)存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客(ke)戶收到(dao)2ml小(xiao)管(guan)細(xi)胞，收到(dao)細(xi)胞后(hou)，用75%酒(jiu)精(jing)噴(pen)灑整個管(guan)子消(xiao)毒后(hou)放到(dao)超凈(jing)臺或安全柜內，嚴(yan)格(ge)無菌操作；將(jiang)小(xiao)管(guan)細(xi)胞轉移至(zhi)T25培(pei)(pei)養瓶(ping)或6cm培(pei)(pei)養皿，加入5ml左右(you)*培(pei)(pei)養基混勻，放入培(pei)(pei)養箱過夜培(pei)(pei)養后(hou)查看(kan)細(xi)胞密(mi)度：若密(mi)度未超過80%，換液繼(ji)續(xu)培(pei)(pei)養，視情況傳代(dai)(dai)或者凍存。若密(mi)度超過80%，可直接進行傳代(dai)(dai)（方法同上）。

慧穎生物是一家(jia)專業從事細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)相(xiang)關產品(pin)的公司(si)，擁有獨立細(xi)胞(bao)(bao)房（可隨時約(yue)定參觀），供應胎牛(niu)血清，無血清細(xi)胞(bao)(bao)凍存液，無血清培(pei)養(yang)基，常規培(pei)養(yang)基，胰(yi)酶(mei)，雙抗，*培(pei)養(yang)基，STR鑒定細(xi)胞(bao)(bao)，感(gan)受態細(xi)胞(bao)(bao)等，專業，專注(zhu)，性價比高，是您Shou選(xuan)之家(jia)。

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