AN3 CA細胞(bao)| AN3 CA細(xi)胞系(xi) 培養(yang)步驟

產品名稱(cheng)：AN3 CA細(xi)胞

中文名稱：人子宮內膜(mo)腺癌(ai)細胞(bao)；AN3 CA

規格：T25

供應商：上海慧穎生物科(ke)技有(you)限公司

復蘇周期：10個工作(zuo)日(ri)左右

培(pei)養步驟：

1）復蘇細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：將含有1mL細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)的凍(dong)存管在37℃水浴中(zhong)迅速搖晃解凍(dong)，加(jia)入5mL培(pei)養基混合均勻(yun)。在1000RPM條(tiao)件下離心(xin)5分鐘，棄去上清液(ye)，補加(jia)4-6mL*培(pei)養基后(hou)吹勻(yun)。然后(hou)將所(suo)有細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)加(jia)入培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或將細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)加(jia)入6cm皿中(zhong)），培(pei)養過(guo)夜(ye)。第二天換液(ye)并(bing)檢查細(xi)(xi)胞(bao)(bao)密(mi)度(du)。

2）細胞(bao)傳代：如果細胞(bao)密度達(da)80%-90%，即可進(jin)行傳代培(pei)養。

1、對(dui)于(yu)貼壁細胞，傳(chuan)代(dai)可參考(kao)以下方法：

1. 棄去(qu)培養上清，用不含鈣、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加(jia)1-2ml消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)養瓶中(zhong)(zhong)，置于37℃培(pei)養箱中(zhong)(zhong)消(xiao)化1-2min，然后在顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化情況，若細(xi)胞大部分變圓并脫落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作臺，輕敲幾下培(pei)養瓶后加(jia)5ml以上含10%血清(qing)的*培(pei)養基終止消(xiao)化。

3.輕輕吹(chui)打(da)細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下(xia)離(li)心8-10分鐘，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu)加1-2mL培養(yang)液后吹(chui)勻(yun)。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液(ye)，將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1：2到(dao)1：5的比例分到(dao)新的含5-6 ml培養液(ye)的新皿中或者(zhe)瓶中。

PS：若(ruo)客戶收到(dao)2ml小管(guan)細胞，收到(dao)細胞后(hou)，用(yong)75%酒精噴灑整個(ge)管(guan)子消毒后(hou)放到(dao)超(chao)凈臺或安全柜(ju)內(nei)，嚴格無菌(jun)操作；將小管(guan)細胞轉移至T25培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)或6cm培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿，加(jia)入(ru)5ml左右*培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基混勻，放入(ru)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱過(guo)夜(ye)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)后(hou)查看細胞密度(du)：若(ruo)密度(du)未超(chao)過(guo)80%，換(huan)液(ye)繼(ji)續培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)，視情況傳代或者凍存。若(ruo)密度(du)超(chao)過(guo)80%，可(ke)直接(jie)進行傳代（方法同上）。

2、對(dui)于懸浮細(xi)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收(shou)集細胞，1000RPM條件下離(li)心(xin)8-10分鐘(zhong)，棄去上清液，補加(jia)1-2mL培養(yang)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的(de)比例分到新(xin)的(de)含(han)8ml培養(yang)基的(de)新(xin)皿中或者瓶中。

方法二(er)：可選擇半(ban)數(shu)換液(ye)方式，棄去(qu)半(ban)數(shu)培(pei)養(yang)基后，將剩余細胞(bao)懸起，將細胞(bao)懸液(ye)按1：2到1：3的(de)比(bi)例分(fen)到新的(de)含8ml培(pei)養(yang)基的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)。

3）細(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)(bao)生長狀態良好(hao)時，可進行細(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)。貼(tie)壁細(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)時，棄去(qu)培養(yang)基后加入少量(liang)(liang)胰酶，細(xi)胞(bao)(bao)變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去(qu)除上清(qing)，按凍(dong)存(cun)數量(liang)(liang)加入血清(qing)及DMSO，凍(dong)存(cun)比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若(ruo)客(ke)戶收(shou)到(dao)(dao)2ml小(xiao)管(guan)(guan)細(xi)胞(bao)，收(shou)到(dao)(dao)細(xi)胞(bao)后，用75%酒精(jing)噴(pen)灑整個(ge)管(guan)(guan)子消毒后放到(dao)(dao)超(chao)(chao)凈臺或(huo)安(an)全(quan)柜內，嚴格無菌(jun)操作；將小(xiao)管(guan)(guan)細(xi)胞(bao)轉移(yi)至T25培(pei)(pei)(pei)養(yang)瓶或(huo)6cm培(pei)(pei)(pei)養(yang)皿，加入5ml左右*培(pei)(pei)(pei)養(yang)基混勻(yun)，放入培(pei)(pei)(pei)養(yang)箱過(guo)夜培(pei)(pei)(pei)養(yang)后查看細(xi)胞(bao)密度：若(ruo)密度未超(chao)(chao)過(guo)80%，換(huan)液繼續培(pei)(pei)(pei)養(yang)，視情況傳(chuan)(chuan)代或(huo)者凍存。若(ruo)密度超(chao)(chao)過(guo)80%，可直接進行傳(chuan)(chuan)代（方法(fa)同上）。

慧穎生物(wu)是(shi)一家(jia)專業從事細胞(bao)培養相(xiang)關產品的公司，擁有獨(du)立細胞(bao)房(fang)（可隨時約(yue)定參觀(guan)），供應胎牛血清(qing)，無(wu)血清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液，無(wu)血清(qing)培養基，常(chang)規培養基，胰酶，雙抗，*培養基，STR鑒定細胞(bao)，感(gan)受態(tai)細胞(bao)等(deng)，專業，專注，性價比(bi)高，是(shi)您Shou選之家(jia)。

熱賣細(xi)胞(bao)：