HO-8910PM細(xi)胞(bao)| HO-8910PM細胞系 培養步驟(zou)

產品名(ming)稱：HO-8910PM細胞

中文名(ming)稱：人高(gao)轉移卵巢癌細(xi)胞；HO-8910PM

規格：T25

供應(ying)商：上(shang)海慧穎生物科技有限公司

復蘇周期(qi)：10個工作日左右

培(pei)養步驟：

1）復蘇細(xi)胞(bao)：將(jiang)含(han)有1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液(ye)的凍存管在(zai)37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃解凍，加入(ru)5mL培(pei)(pei)養(yang)基混合均勻。在(zai)1000RPM條件下離(li)心5分鐘，棄去(qu)上清液(ye)，補加4-6mL*培(pei)(pei)養(yang)基后吹(chui)勻。然后將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液(ye)加入(ru)培(pei)(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)(pei)養(yang)過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液(ye)加入(ru)6cm皿中(zhong)），培(pei)(pei)養(yang)過(guo)夜。第二天(tian)換(huan)液(ye)并檢查細(xi)胞(bao)密度。

2）細胞(bao)傳代(dai)：如果細胞(bao)密(mi)度達80%-90%，即可進(jin)行傳代(dai)培養。

1、對于(yu)貼壁細胞，傳代可(ke)參考以下(xia)方法：

1. 棄(qi)去培養上清(qing)，用不含鈣、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

2. 加1-2ml消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶(ping)中，置于37℃培養箱中消(xiao)化(hua)1-2min，然后在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞(bao)大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)后加5ml以(yi)上含10%血清的*培養基終止消(xiao)化(hua)。

3.輕輕吹(chui)打細(xi)胞，*脫落后(hou)吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液(ye)，補加1-2mL培養液(ye)后(hou)吹(chui)勻(yun)。

4. 按5-6ml/瓶補(bu)加(jia)培養液，將細胞懸液按1：2到(dao)1：5的(de)比例分到(dao)新的(de)含5-6 ml培養液的(de)新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

PS：若客(ke)戶收(shou)到(dao)2ml小管(guan)細(xi)(xi)胞，收(shou)到(dao)細(xi)(xi)胞后，用75%酒精噴灑(sa)整個管(guan)子消毒后放(fang)到(dao)超(chao)(chao)(chao)凈臺或(huo)安全柜內，嚴格無菌操作；將小管(guan)細(xi)(xi)胞轉移(yi)至T25培養(yang)瓶或(huo)6cm培養(yang)皿，加入(ru)5ml左右*培養(yang)基混勻，放(fang)入(ru)培養(yang)箱(xiang)過夜培養(yang)后查看細(xi)(xi)胞密度(du)：若密度(du)未超(chao)(chao)(chao)過80%，換液繼(ji)續培養(yang)，視(shi)情況傳代或(huo)者凍存。若密度(du)超(chao)(chao)(chao)過80%，可(ke)直接進(jin)行傳代（方法同上）。

2、對于懸浮細(xi)胞，傳(chuan)代可參(can)考以下方(fang)法：

方法(fa)一：收集(ji)細(xi)胞，1000RPM條件下(xia)離心(xin)8-10分鐘，棄去上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2mL培(pei)養液(ye)后吹勻(yun)，將細(xi)胞懸液(ye)按1：2到(dao)1：5的比(bi)例(li)分到(dao)新的含8ml培(pei)養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半(ban)數(shu)換液方式(shi)，棄(qi)去半(ban)數(shu)培養(yang)基(ji)后，將剩余細(xi)胞懸(xuan)起，將細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1：2到1：3的比例分到新的含(han)8ml培養(yang)基(ji)的新皿中或者瓶中。

3）細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態良好時，可進行細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)存。貼壁細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)存時，棄(qi)去培養(yang)基后加入少量胰酶(mei)，細(xi)(xi)胞(bao)變圓脫落后，進行離心收(shou)集，1000RPM條件(jian)下離心8-10分鐘，去除上清(qing)，按(an)凍(dong)存數(shu)量加入血清(qing)及DMSO，凍(dong)存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若(ruo)客戶收到2ml小管細(xi)(xi)胞，收到細(xi)(xi)胞后(hou)，用75%酒精(jing)噴灑整個管子(zi)消毒后(hou)放到超(chao)凈(jing)臺或(huo)安全柜內，嚴格(ge)無菌操作；將小管細(xi)(xi)胞轉(zhuan)移至T25培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)6cm培(pei)(pei)養(yang)皿，加入5ml左右*培(pei)(pei)養(yang)基混勻(yun)，放入培(pei)(pei)養(yang)箱過(guo)(guo)夜培(pei)(pei)養(yang)后(hou)查看細(xi)(xi)胞密(mi)(mi)度(du)：若(ruo)密(mi)(mi)度(du)未超(chao)過(guo)(guo)80%，換液繼續(xu)培(pei)(pei)養(yang)，視情況傳代或(huo)者凍存。若(ruo)密(mi)(mi)度(du)超(chao)過(guo)(guo)80%，可(ke)直(zhi)接進(jin)行(xing)傳代（方法同(tong)上）。

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