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K562/ADR細胞| K562/ADR細胞系 培養步(bu)驟
產品名稱(cheng):K562/ADR細胞
中文名(ming)稱:人K562耐阿霉素細胞株;K562/ADR
規格(ge):T25
供(gong)應(ying)商:上海慧穎(ying)生物科技(ji)有限公司
復蘇周期:10個工作日左右
培(pei)養步驟:
1)復蘇細(xi)胞:將含有1mL細(xi)胞懸(xuan)(xuan)液的(de)凍存(cun)管在37℃水浴中(zhong)(zhong)迅速搖晃解凍,加入(ru)5mL培(pei)(pei)養(yang)基(ji)混合均勻。在1000RPM條(tiao)件下離心5分鐘,棄去上清(qing)液,補加4-6mL*培(pei)(pei)養(yang)基(ji)后(hou)吹勻。然(ran)后(hou)將所有細(xi)胞懸(xuan)(xuan)液加入(ru)培(pei)(pei)養(yang)瓶中(zhong)(zhong)培(pei)(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)(或將細(xi)胞懸(xuan)(xuan)液加入(ru)6cm皿中(zhong)(zhong)),培(pei)(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)。第二天(tian)換(huan)液并檢(jian)查細(xi)胞密度。
2)細胞(bao)(bao)傳代(dai):如果細胞(bao)(bao)密度(du)達80%-90%,即(ji)可進行傳代(dai)培養。
1、對(dui)于貼壁細胞,傳代可參考以下方(fang)法:
1. 棄去(qu)培(pei)養上清,用不含鈣、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗(xi)細胞1-2次。
2. 加1-2ml消(xiao)化(hua)(hua)液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培養瓶中,置(zhi)于(yu)37℃培養箱中消(xiao)化(hua)(hua)1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞(bao)消(xiao)化(hua)(hua)情況,若細胞(bao)大部分變圓(yuan)并脫落,迅速拿回操(cao)作(zuo)臺,輕敲幾(ji)下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止(zhi)消(xiao)化(hua)(hua)。
3.輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條(tiao)件(jian)下離心8-10分鐘,棄去上(shang)清液(ye),補加1-2mL培養液(ye)后吹(chui)勻(yun)。
4. 按5-6ml/瓶補加培(pei)養液,將(jiang)細胞懸液按1:2到1:5的比(bi)例(li)分到新的含(han)5-6 ml培(pei)養液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小(xiao)管(guan)細胞(bao),收到細胞(bao)后(hou)(hou),用75%酒精(jing)噴灑整個管(guan)子消毒(du)后(hou)(hou)放到超(chao)凈臺或安全(quan)柜(ju)內,嚴格無菌操(cao)作(zuo);將小(xiao)管(guan)細胞(bao)轉移至T25培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶或6cm培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿(min),加入(ru)5ml左右(you)*培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基混勻,放入(ru)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱過(guo)夜培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)后(hou)(hou)查看細胞(bao)密度(du):若密度(du)未超(chao)過(guo)80%,換液繼續(xu)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang),視情況傳代或者凍存。若密度(du)超(chao)過(guo)80%,可直接進行傳代(方(fang)法同(tong)上)。
2、對于懸(xuan)浮細胞(bao),傳代(dai)可參考(kao)以(yi)下方法(fa):
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹(chui)勻,將細胞懸液按1:2到1:5的(de)(de)比例分到新的(de)(de)含8ml培養基的(de)(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)。
方(fang)法二:可選擇半數換液方(fang)式,棄去半數培養基后(hou),將(jiang)剩余細(xi)胞懸起,將(jiang)細(xi)胞懸液按1:2到1:3的比例分(fen)到新的含8ml培養基的新皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)。
3)細(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存:待細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態良(liang)好時,可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存。貼(tie)壁細(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存時,棄去(qu)培(pei)養(yang)基后(hou)加入少量(liang)胰酶,細(xi)胞(bao)變圓脫落后(hou),進(jin)行離(li)(li)心(xin)收集,1000RPM條件下離(li)(li)心(xin)8-10分鐘,去(qu)除上清,按(an)凍(dong)(dong)存數量(liang)加入血(xue)清及DMSO,凍(dong)(dong)存比例為90%FBS+10%DMSO。
PS:若客戶(hu)收到2ml小(xiao)管(guan)細胞,收到細胞后,用75%酒精噴(pen)灑整(zheng)個(ge)管(guan)子(zi)消毒后放到超凈(jing)臺或安(an)全柜內,嚴格(ge)無菌操作;將小(xiao)管(guan)細胞轉移至T25培(pei)養瓶(ping)或6cm培(pei)養皿,加入5ml左右*培(pei)養基混(hun)勻,放入培(pei)養箱(xiang)過(guo)夜培(pei)養后查看細胞密度(du):若密度(du)未(wei)超過(guo)80%,換液繼(ji)續培(pei)養,視情況傳(chuan)代或者凍存。若密度(du)超過(guo)80%,可直接進行傳(chuan)代(方法(fa)同(tong)上)。
慧穎(ying)生物是一家專(zhuan)業(ye)從事細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養相關產品的公(gong)司,擁有獨立(li)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)房(可(ke)隨時約定參觀),供應胎牛血清(qing)(qing),無血清(qing)(qing)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍存液(ye),無血清(qing)(qing)培養基,常(chang)規培養基,胰酶,雙抗,*培養基,STR鑒定細(xi)(xi)胞(bao)(bao),感受態細(xi)(xi)胞(bao)(bao)等,專(zhuan)業(ye),專(zhuan)注,性價比高,是您Shou選之家。
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