LS174T細胞(bao)| LS174T細胞系 培養步驟

產(chan)品名稱：LS174T細胞

中文名(ming)稱(cheng)：人結直腸(chang)腺癌細(xi)胞；LS174T

規格：T25

供應商(shang)：上海慧穎生物科技有限公司

復蘇周期(qi)：10個工作日左右

培養(yang)步驟：

1）復蘇細(xi)胞(bao)：將(jiang)含有(you)1mL細(xi)胞(bao)懸液的凍(dong)存管在(zai)37℃水浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃解凍(dong)，加(jia)入(ru)5mL培養(yang)基混合(he)均勻。在(zai)1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bu)加(jia)4-6mL*培養(yang)基后(hou)吹勻。然后(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)培養(yang)瓶中培養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)6cm皿中），培養(yang)過夜。第二天換液并檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度。

2）細胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密度達80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

1、對于貼壁細(xi)胞，傳代可參考以(yi)下方法(fa)：

1. 棄去培養上清(qing)，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次。

2. 加(jia)1-2ml消化(hua)(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培(pei)養瓶(ping)(ping)中，置于(yu)37℃培(pei)養箱中消化(hua)(hua)1-2min，然(ran)后在顯微鏡下觀察細胞(bao)消化(hua)(hua)情況，若細胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓并(bing)脫(tuo)落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培(pei)養瓶(ping)(ping)后加(jia)5ml以上含(han)10%血(xue)清的*培(pei)養基終(zhong)止消化(hua)(hua)。

3.輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)，*脫(tuo)落后吸出(chu)，在1000RPM條件(jian)下離心8-10分鐘，棄去上清(qing)液，補加1-2mL培(pei)養液后吹(chui)勻。

4. 按(an)5-6ml/瓶補加培養液(ye)，將細胞懸液(ye)按(an)1：2到1：5的(de)比例分到新的(de)含(han)5-6 ml培養液(ye)的(de)新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

PS：若(ruo)客戶收到(dao)2ml小管細(xi)胞，收到(dao)細(xi)胞后，用(yong)75%酒精噴灑整個(ge)管子消毒后放到(dao)超(chao)凈臺或安全柜內，嚴格(ge)無(wu)菌(jun)操作(zuo)；將(jiang)小管細(xi)胞轉移至T25培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)或6cm培(pei)(pei)養(yang)皿，加(jia)入5ml左(zuo)右*培(pei)(pei)養(yang)基混勻，放入培(pei)(pei)養(yang)箱過(guo)夜培(pei)(pei)養(yang)后查看細(xi)胞密(mi)度：若(ruo)密(mi)度未(wei)超(chao)過(guo)80%，換液繼續培(pei)(pei)養(yang)，視情(qing)況傳代或者凍存。若(ruo)密(mi)度超(chao)過(guo)80%，可直(zhi)接進行傳代（方法同(tong)上）。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考(kao)以(yi)下方法：

方(fang)法一：收集細(xi)胞，1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘(zhong)，棄去(qu)上清液，補加1-2mL培養液后吹(chui)勻，將細(xi)胞懸液按1：2到1：5的(de)比例分到新(xin)的(de)含8ml培養基的(de)新(xin)皿中或者瓶中。

方法(fa)二：可選擇半數換液方式，棄去(qu)半數培養基后，將剩余細胞(bao)懸起，將細胞(bao)懸液按1：2到(dao)1：3的比例分到(dao)新的含8ml培養基的新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

3）細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生長(chang)狀態良好(hao)時，可進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。貼(tie)壁(bi)細胞(bao)凍(dong)存(cun)時，棄去(qu)培養基后加入少量胰酶(mei)，細胞(bao)變圓(yuan)脫落后，進(jin)行離心收(shou)集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去(qu)除上清，按凍(dong)存(cun)數量加入血(xue)清及(ji)DMSO，凍(dong)存(cun)比例為(wei)90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管(guan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，收到細(xi)(xi)胞(bao)(bao)后(hou)，用75%酒精噴灑整個管(guan)子消毒后(hou)放(fang)到超凈臺或(huo)(huo)安全(quan)柜(ju)內，嚴格無菌操(cao)作(zuo)；將小管(guan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)轉移至(zhi)T25培養瓶或(huo)(huo)6cm培養皿，加入5ml左右(you)*培養基(ji)混勻，放(fang)入培養箱過夜(ye)培養后(hou)查看細(xi)(xi)胞(bao)(bao)密(mi)(mi)度(du)：若密(mi)(mi)度(du)未超過80%，換液繼(ji)續培養，視情況傳代(dai)或(huo)(huo)者凍存。若密(mi)(mi)度(du)超過80%，可直(zhi)接進行傳代(dai)（方法同上）。

慧穎生物是一家專(zhuan)(zhuan)業(ye)從事細胞(bao)培養(yang)相關產品的公司，擁有獨立(li)細胞(bao)房（可隨時約(yue)定(ding)參觀），供(gong)應胎牛血(xue)清(qing)，無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，無(wu)血(xue)清(qing)培養(yang)基，常規(gui)培養(yang)基，胰(yi)酶(mei)，雙抗，*培養(yang)基，STR鑒(jian)定(ding)細胞(bao)，感受態細胞(bao)等，專(zhuan)(zhuan)業(ye)，專(zhuan)(zhuan)注，性價比(bi)高，是您Shou選之家。

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