NCI-H1299細(xi)胞| NCI-H1299細(xi)胞系(xi) 培養步驟

產品名稱：NCI-H1299細胞

中文名稱：人非小細胞肺癌(ai)細胞；NCI-H1299

規格：T25

供應(ying)商：上(shang)海慧穎生物(wu)科技有限(xian)公司

復(fu)蘇周期：10個工作(zuo)日左(zuo)右

培養(yang)步驟：

1）復(fu)蘇(su)細胞(bao)：將(jiang)含(han)有1mL細胞(bao)懸液的凍存管在(zai)(zai)37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖晃解凍，加(jia)入5mL培養(yang)基混合均勻。在(zai)(zai)1000RPM條件下離(li)心5分鐘，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu)加(jia)4-6mL*培養(yang)基后(hou)吹(chui)勻。然后(hou)將(jiang)所有細胞(bao)懸液加(jia)入培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將(jiang)細胞(bao)懸液加(jia)入6cm皿中(zhong)），培養(yang)過(guo)夜。第二天(tian)換液并(bing)檢查細胞(bao)密度。

2）細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細胞(bao)密度達80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下(xia)方法：

1. 棄(qi)去培養上清，用(yong)不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)養(yang)瓶中，置于37℃培(pei)養(yang)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞(bao)消化情(qing)況，若細胞(bao)大部分變圓并脫落(luo)，迅速拿回操作(zuo)臺，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶后加5ml以(yi)上含(han)10%血(xue)清的*培(pei)養(yang)基(ji)終止消化。

3.輕輕吹打(da)細(xi)胞，*脫落后(hou)吸(xi)出，在(zai)1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去(qu)上清液，補加1-2mL培養液后(hou)吹勻。

4. 按(an)(an)5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按(an)(an)1：2到(dao)1：5的(de)比例分到(dao)新(xin)的(de)含5-6 ml培養液的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)。

PS：若(ruo)客(ke)戶(hu)收到2ml小(xiao)管細(xi)胞(bao)，收到細(xi)胞(bao)后，用(yong)75%酒精(jing)噴灑整個管子消毒后放到超(chao)凈(jing)臺(tai)或安(an)全柜內，嚴格無菌操(cao)作；將小(xiao)管細(xi)胞(bao)轉移至T25培(pei)養(yang)瓶或6cm培(pei)養(yang)皿，加入(ru)5ml左右*培(pei)養(yang)基混勻，放入(ru)培(pei)養(yang)箱過(guo)(guo)夜培(pei)養(yang)后查(cha)看(kan)細(xi)胞(bao)密度(du)(du)：若(ruo)密度(du)(du)未超(chao)過(guo)(guo)80%，換液繼續培(pei)養(yang)，視(shi)情況(kuang)傳(chuan)代或者凍存。若(ruo)密度(du)(du)超(chao)過(guo)(guo)80%，可直接進行傳(chuan)代（方法(fa)同(tong)上）。

2、對于懸浮細胞(bao)，傳(chuan)代可參考以下方法：

方法一：收(shou)集(ji)細(xi)胞，1000RPM條件下(xia)離心8-10分鐘，棄去上清液，補加(jia)1-2mL培養液后吹勻，將細(xi)胞懸液按1：2到(dao)1：5的比例分到(dao)新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方(fang)(fang)法二：可(ke)選擇(ze)半數(shu)換液(ye)方(fang)(fang)式，棄去半數(shu)培養基后，將剩余細(xi)胞懸起，將細(xi)胞懸液(ye)按1：2到1：3的(de)比例(li)分到新的(de)含8ml培養基的(de)新皿中或(huo)者瓶中。

3）細(xi)(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)(xi)胞生(sheng)長狀態良好(hao)時(shi)，可進行細(xi)(xi)胞凍存(cun)。貼壁(bi)細(xi)(xi)胞凍存(cun)時(shi)，棄去培養(yang)基后加入少量胰酶，細(xi)(xi)胞變(bian)圓(yuan)脫落后，進行離(li)心收集，1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘，去除上(shang)清(qing)(qing)，按凍存(cun)數量加入血清(qing)(qing)及DMSO，凍存(cun)比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若(ruo)客戶(hu)收到2ml小管細(xi)胞(bao)，收到細(xi)胞(bao)后(hou)，用75%酒精噴灑(sa)整個管子消毒后(hou)放到超(chao)(chao)凈臺或安全柜內，嚴(yan)格無菌操(cao)作；將小管細(xi)胞(bao)轉移至T25培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)或6cm培(pei)(pei)養(yang)皿(min)，加入5ml左右*培(pei)(pei)養(yang)基混(hun)勻，放入培(pei)(pei)養(yang)箱過夜培(pei)(pei)養(yang)后(hou)查看(kan)細(xi)胞(bao)密(mi)(mi)度(du)：若(ruo)密(mi)(mi)度(du)未(wei)超(chao)(chao)過80%，換液繼續培(pei)(pei)養(yang)，視情況傳代(dai)或者(zhe)凍(dong)存。若(ruo)密(mi)(mi)度(du)超(chao)(chao)過80%，可直接進(jin)行傳代(dai)（方法(fa)同上）。

慧穎生物是一(yi)家專業從(cong)事細(xi)(xi)胞培(pei)養相關產品的公(gong)司(si)，擁(yong)有獨立細(xi)(xi)胞房（可隨時(shi)約定(ding)參觀），供(gong)應(ying)胎牛(niu)血清，無(wu)血清細(xi)(xi)胞凍存液，無(wu)血清培(pei)養基，常規培(pei)養基，胰(yi)酶，雙抗，*培(pei)養基，STR鑒定(ding)細(xi)(xi)胞，感受態細(xi)(xi)胞等，專業，專注，性價比(bi)高，是您(nin)Shou選之家。

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