PLC/PRF/5細胞(bao)| PLC/PRF/5細胞系(xi) 培養步驟

產(chan)品名稱：PLC/PRF/5細(xi)胞(bao)

中(zhong)文名稱：人肝癌(ai)細胞；PLC/PRF/5

規格：T25

供應(ying)商：上海慧穎生物科技有限公司

復蘇周(zhou)期：10個工(gong)作日左右(you)

培養步驟(zou)：

1）復(fu)蘇細胞(bao)：將(jiang)含有1mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍存(cun)管在37℃水浴中(zhong)(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解凍，加入5mL培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)混合均(jun)勻。在1000RPM條件下離心(xin)5分(fen)鐘，棄去上清液，補(bu)加4-6mL*培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)后吹(chui)勻。然(ran)后將(jiang)所有細胞(bao)懸(xuan)液加入培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶中(zhong)(zhong)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)過夜（或將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加入6cm皿(min)中(zhong)(zhong)），培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)過夜。第二天換液并(bing)檢查(cha)細胞(bao)密度(du)。

2）細胞傳代(dai)：如(ru)果細胞密(mi)度(du)達80%-90%，即可進行(xing)傳代(dai)培養。

1、對于(yu)貼壁細胞，傳代可(ke)參考以下方(fang)法(fa)：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加(jia)1-2ml消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶(ping)中，置于37℃培養箱中消(xiao)化(hua)1-2min，然后在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀察細胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞大(da)部分變(bian)圓并脫落(luo)，迅速拿回操作臺，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)后加(jia)5ml以上含10%血清(qing)的*培養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。

3.輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)吹(chui)打細胞，*脫(tuo)落(luo)后(hou)吸出，在1000RPM條件下離心(xin)8-10分(fen)鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后(hou)吹(chui)勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到(dao)1：5的(de)比例分到(dao)新(xin)的(de)含5-6 ml培養液的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶中。

PS：若(ruo)客戶收到2ml小管細(xi)胞(bao)，收到細(xi)胞(bao)后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放(fang)到超凈臺(tai)或(huo)安(an)全柜(ju)內，嚴格無菌操作；將小管細(xi)胞(bao)轉移至T25培(pei)(pei)(pei)養(yang)瓶或(huo)6cm培(pei)(pei)(pei)養(yang)皿，加入5ml左(zuo)右*培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)混勻(yun)，放(fang)入培(pei)(pei)(pei)養(yang)箱過(guo)(guo)夜(ye)培(pei)(pei)(pei)養(yang)后查看細(xi)胞(bao)密(mi)(mi)度：若(ruo)密(mi)(mi)度未超過(guo)(guo)80%，換液繼續培(pei)(pei)(pei)養(yang)，視情況傳(chuan)代或(huo)者凍(dong)存。若(ruo)密(mi)(mi)度超過(guo)(guo)80%，可直接進行傳(chuan)代（方(fang)法(fa)同上）。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收(shou)集細胞(bao)，1000RPM條件下離心8-10分鐘(zhong)，棄去上清液(ye)，補加(jia)1-2mL培養(yang)液(ye)后吹勻，將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1：2到1：5的比例分到新(xin)的含8ml培養(yang)基的新(xin)皿中或者瓶(ping)中。

方法二：可選擇半數(shu)換液方式，棄去半數(shu)培(pei)養(yang)基后，將剩余細胞懸(xuan)起，將細胞懸(xuan)液按1：2到1：3的(de)比例分到新的(de)含8ml培(pei)養(yang)基的(de)新皿中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)。

3）細(xi)(xi)胞(bao)凍存(cun)(cun)：待細(xi)(xi)胞(bao)生長狀態良(liang)好時(shi)，可(ke)進行(xing)細(xi)(xi)胞(bao)凍存(cun)(cun)。貼壁細(xi)(xi)胞(bao)凍存(cun)(cun)時(shi)，棄去培養基后(hou)加(jia)入少(shao)量(liang)胰(yi)酶，細(xi)(xi)胞(bao)變圓脫落(luo)后(hou)，進行(xing)離(li)心收(shou)集，1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘(zhong)，去除上(shang)清(qing)，按凍存(cun)(cun)數(shu)量(liang)加(jia)入血(xue)清(qing)及DMSO，凍存(cun)(cun)比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若(ruo)客戶收到2ml小管(guan)細胞(bao)(bao)(bao)，收到細胞(bao)(bao)(bao)后(hou)(hou)，用75%酒精噴灑(sa)整個管(guan)子消毒后(hou)(hou)放到超凈(jing)臺或(huo)(huo)安全柜內，嚴格無菌(jun)操作；將小管(guan)細胞(bao)(bao)(bao)轉移至(zhi)T25培養(yang)瓶或(huo)(huo)6cm培養(yang)皿，加入5ml左(zuo)右*培養(yang)基混(hun)勻，放入培養(yang)箱過(guo)(guo)夜培養(yang)后(hou)(hou)查看(kan)細胞(bao)(bao)(bao)密(mi)(mi)度(du)：若(ruo)密(mi)(mi)度(du)未超過(guo)(guo)80%，換液繼續培養(yang)，視情況傳代或(huo)(huo)者(zhe)凍(dong)存。若(ruo)密(mi)(mi)度(du)超過(guo)(guo)80%，可直接(jie)進(jin)行傳代（方法同上）。

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