REH細胞| REH細胞系 培(pei)養步驟

產品名(ming)稱：REH細(xi)胞

中文(wen)名稱(cheng)：人急性非(fei)B非(fei)T淋巴(ba)細胞(bao)白血病細胞(bao)；REH

規格：T25

供應商：上(shang)海慧穎(ying)生物科技有限公司

復蘇周期：10個工作日左(zuo)右

培養步驟：

1）復蘇(su)細胞(bao)(bao)：將含有(you)1mL細胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃(huang)解凍，加(jia)(jia)(jia)入(ru)5mL培(pei)養基混合(he)均勻。在1000RPM條件下(xia)離心5分(fen)鐘，棄去上(shang)清(qing)液(ye)(ye)，補加(jia)(jia)(jia)4-6mL*培(pei)養基后吹勻。然后將所有(you)細胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)加(jia)(jia)(jia)入(ru)培(pei)養瓶中培(pei)養過夜(ye)（或將細胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)加(jia)(jia)(jia)入(ru)6cm皿中），培(pei)養過夜(ye)。第二天換液(ye)(ye)并檢查細胞(bao)(bao)密度。

2）細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果細(xi)胞密(mi)度達80%-90%，即可進行傳(chuan)代培(pei)養。

1、對于貼壁細(xi)胞，傳代可參考以(yi)下方法：

1. 棄去培養上清，用(yong)不含鈣、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

2. 加1-2ml消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)(yu)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶中，置于(yu)(yu)37℃培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱中消(xiao)化1-2min，然后在顯微(wei)鏡下觀察細胞消(xiao)化情況(kuang)，若細胞大(da)部分變圓(yuan)并(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回操作臺(tai)，輕敲幾(ji)下培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶后加5ml以上含10%血清(qing)的*培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。

3.輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞，*脫落后吸(xi)出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2mL培養液(ye)后吹(chui)勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培(pei)養液，將細(xi)胞懸液按1：2到(dao)(dao)1：5的(de)比例(li)分到(dao)(dao)新的(de)含5-6 ml培(pei)養液的(de)新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收(shou)(shou)到2ml小管(guan)(guan)細(xi)胞，收(shou)(shou)到細(xi)胞后(hou)，用75%酒精(jing)噴灑(sa)整個管(guan)(guan)子消毒(du)后(hou)放(fang)到超凈臺或安全柜內(nei)，嚴(yan)格無菌操作(zuo)；將小管(guan)(guan)細(xi)胞轉(zhuan)移(yi)至T25培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶或6cm培(pei)(pei)養(yang)(yang)皿，加入5ml左右*培(pei)(pei)養(yang)(yang)基混勻，放(fang)入培(pei)(pei)養(yang)(yang)箱過(guo)夜培(pei)(pei)養(yang)(yang)后(hou)查看細(xi)胞密度：若密度未(wei)超過(guo)80%，換(huan)液繼續培(pei)(pei)養(yang)(yang)，視情況傳代(dai)(dai)或者凍存。若密度超過(guo)80%，可直接進行傳代(dai)(dai)（方法同上）。

2、對于懸浮細胞(bao)，傳(chuan)代可(ke)參考以下方(fang)法(fa)：

方法一：收集(ji)細胞(bao)，1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘，棄去上清液，補加(jia)1-2mL培養液后吹勻，將細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1：2到1：5的(de)比例分到新的(de)含(han)8ml培養基的(de)新皿中或者瓶中。

方法二：可(ke)選(xuan)擇(ze)半數(shu)換(huan)液方式，棄去半數(shu)培養基后，將(jiang)剩余(yu)細胞(bao)懸(xuan)起，將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按1：2到(dao)1：3的比(bi)例分到(dao)新(xin)(xin)的含8ml培養基的新(xin)(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)。

3）細(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)長狀態良好時，可(ke)進行細(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)。貼(tie)壁細(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)時，棄去培養基后(hou)加(jia)入(ru)少量(liang)胰酶，細(xi)胞(bao)(bao)變(bian)圓脫落后(hou)，進行離心收集，1000RPM條件(jian)下離心8-10分鐘，去除上清，按凍(dong)存(cun)數量(liang)加(jia)入(ru)血清及DMSO，凍(dong)存(cun)比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若(ruo)客戶收到(dao)2ml小管細胞(bao)(bao)，收到(dao)細胞(bao)(bao)后(hou)(hou)，用75%酒精噴灑(sa)整個管子消毒后(hou)(hou)放(fang)到(dao)超(chao)(chao)凈臺(tai)或(huo)(huo)安(an)全柜內，嚴(yan)格無菌操作；將小管細胞(bao)(bao)轉移至T25培(pei)(pei)養瓶或(huo)(huo)6cm培(pei)(pei)養皿，加入5ml左右*培(pei)(pei)養基混勻，放(fang)入培(pei)(pei)養箱過夜培(pei)(pei)養后(hou)(hou)查看細胞(bao)(bao)密(mi)度(du)：若(ruo)密(mi)度(du)未超(chao)(chao)過80%，換液繼續培(pei)(pei)養，視情況(kuang)傳代或(huo)(huo)者(zhe)凍存。若(ruo)密(mi)度(du)超(chao)(chao)過80%，可直接進行傳代（方(fang)法同上）。

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