RT4細胞| RT4細(xi)胞系 培養(yang)步驟

產(chan)品名(ming)稱：RT4細(xi)胞

中文名稱：人膀胱移行(xing)細胞乳頭瘤；RT4

規(gui)格：T25

供應商：上(shang)海慧穎生物科技有(you)限公司(si)

復蘇周期：10個工作日左(zuo)右(you)

培(pei)養步驟：

1）復蘇細胞(bao)：將(jiang)含有1mL細胞(bao)懸液(ye)的凍存管在37℃水浴中迅速搖(yao)晃解凍，加入5mL培養(yang)(yang)基混合均勻。在1000RPM條件(jian)下離心5分(fen)鐘(zhong)，棄去上清液(ye)，補加4-6mL*培養(yang)(yang)基后吹勻。然(ran)后將(jiang)所有細胞(bao)懸液(ye)加入培養(yang)(yang)瓶中培養(yang)(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)加入6cm皿中），培養(yang)(yang)過夜。第二天換液(ye)并檢查(cha)細胞(bao)密(mi)度。

2）細胞(bao)傳(chuan)代：如果細胞(bao)密度達80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

1、對于貼壁細(xi)胞，傳代(dai)可參考以下(xia)方法(fa)：

1. 棄去培養上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

2. 加1-2ml消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培(pei)養瓶中，置于(yu)37℃培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)1-2min，然后(hou)在顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下(xia)培(pei)養瓶后(hou)加5ml以上含10%血清(qing)的(de)*培(pei)養基終止消(xiao)化(hua)。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后(hou)吸出(chu)，在1000RPM條件(jian)下離(li)心(xin)8-10分鐘(zhong)，棄去上清液，補加1-2mL培養液后(hou)吹勻。

4. 按(an)5-6ml/瓶補加培養(yang)液，將細胞懸液按(an)1：2到1：5的比例分到新(xin)的含5-6 ml培養(yang)液的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶中。

PS：若(ruo)客戶收(shou)(shou)到(dao)2ml小管細(xi)胞(bao)，收(shou)(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放(fang)到(dao)超(chao)凈臺或安(an)全柜內，嚴格(ge)無(wu)菌操(cao)作；將小管細(xi)胞(bao)轉移至T25培(pei)養瓶或6cm培(pei)養皿，加入5ml左(zuo)右*培(pei)養基(ji)混勻(yun)，放(fang)入培(pei)養箱過(guo)(guo)夜培(pei)養后查看細(xi)胞(bao)密度(du)：若(ruo)密度(du)未超(chao)過(guo)(guo)80%，換(huan)液(ye)繼續(xu)培(pei)養，視情況傳代(dai)或者(zhe)凍存。若(ruo)密度(du)超(chao)過(guo)(guo)80%，可直(zhi)接進行傳代(dai)（方(fang)法(fa)同上）。

2、對于懸浮(fu)細胞，傳(chuan)代(dai)可參考以下方法：

方法一(yi)：收集細胞(bao)，1000RPM條件下(xia)離心8-10分鐘，棄去上(shang)清液(ye)，補加1-2mL培養液(ye)后吹勻(yun)，將細胞(bao)懸液(ye)按1：2到1：5的比例(li)分到新(xin)的含(han)8ml培養基的新(xin)皿中或者瓶中。

方(fang)法二(er)：可選擇(ze)半數換液(ye)方(fang)式，棄去半數培(pei)養基后，將剩余細(xi)胞懸起，將細(xi)胞懸液(ye)按1：2到1：3的(de)比例分到新的(de)含8ml培(pei)養基的(de)新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

3）細胞凍(dong)(dong)存：待細胞生長狀態良(liang)好時(shi)，可進(jin)行細胞凍(dong)(dong)存。貼(tie)壁(bi)細胞凍(dong)(dong)存時(shi)，棄(qi)去(qu)培養(yang)基后加(jia)入少量(liang)胰酶，細胞變圓脫落(luo)后，進(jin)行離(li)心(xin)收集，1000RPM條(tiao)件下離(li)心(xin)8-10分鐘(zhong)，去(qu)除上清，按凍(dong)(dong)存數量(liang)加(jia)入血清及(ji)DMSO，凍(dong)(dong)存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收(shou)到(dao)2ml小管(guan)(guan)細(xi)(xi)胞，收(shou)到(dao)細(xi)(xi)胞后，用75%酒精(jing)噴灑整個管(guan)(guan)子消毒后放到(dao)超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作(zuo)；將小管(guan)(guan)細(xi)(xi)胞轉移至T25培(pei)養瓶(ping)或6cm培(pei)養皿，加入5ml左右(you)*培(pei)養基混勻，放入培(pei)養箱過(guo)夜(ye)培(pei)養后查(cha)看細(xi)(xi)胞密度：若密度未超過(guo)80%，換(huan)液繼續培(pei)養，視(shi)情況傳代或者凍(dong)存。若密度超過(guo)80%，可直接進行傳代（方法同上）。

慧(hui)穎生物是(shi)一家專(zhuan)業(ye)從(cong)事細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養相關產品的(de)公司，擁有獨立細(xi)(xi)胞(bao)房(fang)（可(ke)隨時(shi)約定參觀），供應胎(tai)牛血清(qing)，無血清(qing)細(xi)(xi)胞(bao)凍存液，無血清(qing)培(pei)養基，常規(gui)培(pei)養基，胰(yi)酶(mei)，雙(shuang)抗，*培(pei)養基，STR鑒定細(xi)(xi)胞(bao)，感(gan)受態細(xi)(xi)胞(bao)等，專(zhuan)業(ye)，專(zhuan)注(zhu)，性價比(bi)高，是(shi)您(nin)Shou選之家。

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