SK-BR-3細胞| SK-BR-3細胞系 培養步驟

產品名稱(cheng)：SK-BR-3細胞

中文名稱：人乳(ru)腺癌(ai)細胞；SK-BR-3

規格(ge)：T25

供應商：上海慧(hui)穎生物科技有限(xian)公(gong)司

復蘇周(zhou)期：10個工作日左右

培養步驟：

1）復蘇(su)細(xi)(xi)胞(bao)：將含(han)有1mL細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液的凍(dong)存管在(zai)37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖晃(huang)解凍(dong)，加入5mL培(pei)養(yang)基混合均勻。在(zai)1000RPM條件下離心5分鐘(zhong)，棄去(qu)上清液，補加4-6mL*培(pei)養(yang)基后吹勻。然后將所有細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液加入培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜（或將細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液加入6cm皿中(zhong)），培(pei)養(yang)過夜。第二天換液并檢(jian)查細(xi)(xi)胞(bao)密(mi)度。

2）細(xi)胞傳(chuan)(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞密度達(da)80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳(chuan)(chuan)代(dai)培養(yang)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以(yi)下方法：

1. 棄去培養上清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂離子的PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

2. 加1-2ml消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)中，置于(yu)37℃培(pei)(pei)養(yang)箱中消(xiao)化1-2min，然后在顯微鏡下(xia)(xia)觀察細(xi)(xi)胞消(xiao)化情況，若細(xi)(xi)胞大部分變(bian)圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕(qing)敲幾下(xia)(xia)培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)后加5ml以上含10%血清的*培(pei)(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。

3.輕輕吹(chui)打細胞，*脫落后(hou)吸出，在1000RPM條件下離(li)心8-10分鐘，棄(qi)去上(shang)清液，補加(jia)1-2mL培養液后(hou)吹(chui)勻。

4. 按(an)5-6ml/瓶(ping)補(bu)加培養液(ye)，將細胞懸液(ye)按(an)1：2到1：5的比例分到新(xin)的含5-6 ml培養液(ye)的新(xin)皿中或者瓶(ping)中。

PS：若(ruo)(ruo)客戶收到2ml小(xiao)管細(xi)(xi)胞(bao)，收到細(xi)(xi)胞(bao)后，用(yong)75%酒精噴灑(sa)整個管子(zi)消(xiao)毒后放(fang)到超凈臺或安(an)全柜內，嚴格無(wu)菌操作；將小(xiao)管細(xi)(xi)胞(bao)轉移至T25培(pei)(pei)養瓶或6cm培(pei)(pei)養皿(min)，加入5ml左右*培(pei)(pei)養基混勻，放(fang)入培(pei)(pei)養箱過夜培(pei)(pei)養后查看細(xi)(xi)胞(bao)密度：若(ruo)(ruo)密度未超過80%，換液繼續培(pei)(pei)養，視情(qing)況傳(chuan)(chuan)代(dai)或者凍存(cun)。若(ruo)(ruo)密度超過80%，可直(zhi)接(jie)進行傳(chuan)(chuan)代(dai)（方法同上）。

2、對于懸浮細胞，傳代(dai)可參(can)考以下方法：

方法一：收(shou)集(ji)細胞，1000RPM條件下離心(xin)8-10分鐘，棄去上清液(ye)，補(bu)加1-2mL培養液(ye)后吹勻，將細胞懸(xuan)液(ye)按1：2到1：5的比例分到新(xin)的含8ml培養基的新(xin)皿中或者(zhe)瓶(ping)中。

方(fang)法二：可選擇半數(shu)換液方(fang)式，棄去半數(shu)培(pei)養基后，將剩(sheng)余(yu)細(xi)(xi)胞懸(xuan)起，將細(xi)(xi)胞懸(xuan)液按1：2到1：3的(de)比(bi)例分到新的(de)含8ml培(pei)養基的(de)新皿中(zhong)(zhong)或者瓶中(zhong)(zhong)。

3）細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存(cun)：待細(xi)(xi)胞(bao)生長狀態良好時，可進(jin)行(xing)細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存(cun)。貼壁細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存(cun)時，棄去培(pei)養基后(hou)加入(ru)(ru)少量(liang)胰酶，細(xi)(xi)胞(bao)變圓(yuan)脫落(luo)后(hou)，進(jin)行(xing)離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘(zhong)，去除上清，按凍(dong)(dong)存(cun)數量(liang)加入(ru)(ru)血清及DMSO，凍(dong)(dong)存(cun)比例為(wei)90%FBS+10%DMSO。

PS：若(ruo)(ruo)(ruo)客(ke)戶收到2ml小管細胞(bao)，收到細胞(bao)后，用75%酒(jiu)精噴灑整個(ge)管子消毒后放(fang)到超(chao)凈臺或(huo)(huo)(huo)安(an)全柜內，嚴格(ge)無菌操(cao)作；將(jiang)小管細胞(bao)轉移至T25培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶或(huo)(huo)(huo)6cm培(pei)(pei)養(yang)(yang)皿，加入5ml左右*培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)混勻，放(fang)入培(pei)(pei)養(yang)(yang)箱(xiang)過(guo)夜培(pei)(pei)養(yang)(yang)后查看(kan)細胞(bao)密(mi)度(du)：若(ruo)(ruo)(ruo)密(mi)度(du)未超(chao)過(guo)80%，換液繼(ji)續培(pei)(pei)養(yang)(yang)，視情(qing)況傳(chuan)代(dai)或(huo)(huo)(huo)者凍存。若(ruo)(ruo)(ruo)密(mi)度(du)超(chao)過(guo)80%，可直接進(jin)行傳(chuan)代(dai)（方法同(tong)上）。

慧(hui)穎生物(wu)是一家專業從事細胞培養相關產品的(de)公司(si)，擁(yong)有獨立細胞房（可(ke)隨時約定參(can)觀），供(gong)應(ying)胎牛(niu)血(xue)清(qing)，無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍存液，無(wu)血(xue)清(qing)培養基，常(chang)規培養基，胰酶，雙(shuang)抗(kang)，*培養基，STR鑒(jian)定細胞，感受態(tai)細胞等，專業，專注(zhu)，性價(jia)比(bi)高，是您(nin)Shou選(xuan)之家。

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