細胞

 1 T-25瓶

細胞(bao)說(shuo)明書(shu)

一(yi)份

細胞來源：

DSMZ細胞庫

培養條件：

培養基：90%胎牛血清+10%FBS

氣相：空氣95%，二氧化碳5%

溫度：37℃

培養：

一(yi)、貼壁細(xi)胞

1.用(yong)75%酒精噴(pen)灑整(zheng)個瓶消毒(du)，將其平躺置于(yu)培養箱中進(jin)行(xing)2-3小時的緩沖，.然(ran)后(hou)置于無菌操作臺，打(da)開瓶口，將其(qi)中的培養液去(qu)掉(diao)，再往其中加入5-6mL新鮮(xian)培養(yang)基并(bing)置于(yu)細(xi)(xi)胞培養(yang)箱中培養(yang)，根據細(xi)(xi)胞生長狀況(kuang)及培養(yang)基顏色(se)變化(hua)對其進(jin)行(xing)換液以及傳代；

2.待細(xi)胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進(jin)行(xing)傳代，第(di)一次傳代比例為1:2。

3傳代步驟：將(jiang)0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱，倒(dao)掉(diao)培養瓶中(zhong)的培養基，往培養瓶中(zhong)加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去(qu)。往瓶中加1ml預熱(re)好(hao)的胰酶，置于37°孵育(yu)消化（第一次消化需時常取出(chu)置于顯微鏡下(xia)觀察，以顯微鏡下(xia)細(xi)胞(bao)觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫(tuo)落為最佳消化時間，記錄較(jiao)適合消化(hua)時間，以(yi)便于下次消化(hua)），消化(hua)好(hao)后加入1ml完培終(zhong)止消化。用移液槍輕(qing)輕(qing)吹打瓶壁上的(de)細(xi)胞，使之(zhi)脫落，然后(hou)收集細(xi)胞懸(xuan)液，1200rpm離心3min，棄(qi)上清，加(jia)入(ru)完培重懸(xuan)細胞，進行傳(chuan)代。

二、懸(xuan)浮細胞

1.用75%酒精噴(pen)灑整個瓶消毒，然后(hou)置于(yu)無菌操(cao)作臺(tai)，打開瓶口，輕輕吹打后(hou)，將(jiang)其中的(de)細胞懸液轉移到離(li)心管中，然后(hou)1200rpm離心3min，去上清；

2.將離心好(hao)的(de)細胞轉移至T-25瓶中，并加入(ru)5-6mL新鮮培(pei)養(yang)(yang)基(ji)，然后(hou)將其(qi)置于細(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)(yang)，根(gen)據細(xi)胞生長狀(zhuang)況及培(pei)養(yang)(yang)基(ji)顏色變化對(dui)其(qi)進(jin)行換液(ye)（離(li)心后(hou)去舊液(ye)，加入新鮮培(pei)養(yang)(yang)基(ji)）；

3.顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞數目比較多時，對其進(jin)行傳代，第一次(ci)傳代比例為1:2（離心(xin)后平均分(fen)成兩(liang)瓶培(pei)養）。

細胞(bao)總數：

1~3*10⁶

傳(chuan)代周(zhou)期：

2-3天

傳代比(bi)例：

1:2~1:4

換液頻率：

2-3天

凍(dong)存液：

90%FBS+10%DMSO