HuCCT1人(ren)膽管(guan)癌(ai)細胞傳(chuan)代方法(fa)
慧穎(ying)生物熱(re)賣細胞：

人多發性骨髓瘤(liu)細胞RPMI-8226 1×10?cells T25培(pei)養瓶(ping) RPMI1640培養基；10%胎牛血清；1%雙(shuang)抗 懸浮(fu)生長 提供STR鑒定報(bao)告(gao)

人結直(zhi)腸腺癌(ai)細胞LS174T 1×10?cells T25培養瓶(ping) MEM培養基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁(bi)生(sheng)長 提供STR鑒定報告

人多形(xing)性惡性膠質(zhi)瘤(liu)T98G 1×10?cells T25培養瓶(ping) MEM培養基；10%胎牛(niu)血清；1%雙抗(kang) 貼壁生長 提供STR鑒定(ding)報(bao)告

人膽(dan)管癌(ai)細胞HuCCT1 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養(yang)基；10%胎牛血(xue)清；1%雙抗(kang) 貼(tie)壁生長 提供STR鑒定(ding)報告

人子宮(gong)內膜癌細胞Ishikawa 1×10?cells T25培養瓶 DMEM培養基；10%胎牛血(xue)清；1%雙抗 貼(tie)壁生長 提供STR鑒定報告(gao)

人葡萄(tao)膜黑色素瘤92-1 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告

人結(jie)腸癌細胞HCT-116 1×10?cells T25培養瓶 McCoy’s 5A培養基；10%胎(tai)牛血清；1%雙抗(kang) 貼壁生長 提供STR鑒(jian)定報告

人非(fei)小細胞肺癌細胞NCI-H3122 1×10?cells T25培(pei)養瓶 RPMI1640培(pei)養基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁(bi)生長 提供STR鑒定報告

人胰腺癌細(xi)胞HPAC 1×10?cells T25培養(yang)瓶(ping) DMEM培養基(ji)；10%胎牛(niu)血清；1%雙(shuang)抗(kang) 貼(tie)壁生(sheng)長(chang) 提供STR鑒定報告

人(ren)肝(gan)癌細胞SNU-398 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基；10%胎(tai)牛血清；1%雙抗(kang) 貼壁(bi)，懸浮(fu)混(hun)合生長(chang) 提供STR鑒定(ding)報(bao)告

1、HuCCT1人(ren)膽管癌細胞傳代方法提(ti)前打(da)開水裕鍋，加熱(re)到37度，從液氮 罐中取(qu)出需要(yao)復蘇(su)的(de)細胞；

2、放水裕(yu)鍋快速解(jie)凍(中(zhong)途不(bu)要隨(sui)意(yi)拿出凍(dong) 存管直到凍(dong)存管中(zhong)的液(ye)體(ti)全部融化)準(zhun)備細 胞專用培(pei)養(yang)(yang)基和(he)無菌(jun)離心(xin)管培(pei)養(yang)(yang)基需提前預 熱

3、用完培(pei)稀釋(shi)凍存管(guan)中的(de)細胞(bao)懸液至(zhi)(zhi)離(li)心 管(guan)中收(shou)集細胞(bao)至(zhi)(zhi)元南(nan)離(li)心管(guan)，800-1100 rp/5min，取出離心管，管底(di)可見細胞沉淀

4、去除上清(qing)，用5ml完培(pei)重懸離心管中的 細胞液至T25瓶中，十字搖晃均勻；放(fang)入培 養箱(xiang)，隔天觀察

傳(chuan)代(dai)
1、準備(bei)所需耗材紫(zi)外(wai)消毒30分(fen)鐘，觀察細胞密度(du) 80%即可(ke)傳代(dai)； 2、去掉(diao)舊(jiu)培養基，加入(ru)3mIPBS緩沖液輕輕潤洗后去 除，加入(ru)1ml胰(yi)酶(mei)，均勻覆蓋細胞表面(胰酶需(xu)提前預 熱)； 3、細胞消化至變(bian)圓(yuan)，輕(qing)拍(pai)瓶(ping)身滑落.加入(ru)4ml完(wan)培終(zhong) 止消化，收(shou)集消化下來的細胞(bao)至無菌(jun)離(li)心管， 800-1100 rpm/5min 4、取出離心管，管底可見細胞沉淀，準(zhun)備(bei)兩個T25瓶(ping) ,各加入2.5ml培養基； 5、離心管內去(qu)上清，用5ml完培重(zhong)細胞懸液，分裝至 2個T25瓶，十字搖晃均勻放入培養箱，隔天(tian)觀(guan)察；

特殊細(xi)胞收(shou)到注意事項

部(bu)分細胞(bao)由于貼(tie)壁不(bu)牢在(zai)運輸過程中發生細胞(bao)脫落(luo)，這是(shi)正常現(xian)象正確處(chu)理后都可以(yi)正常生長(chang)。 1、將培養瓶內所有(you)培養基(ji)轉入無菌(jun)離(li)心(xin)(xin)管，離(li)心(xin)(xin)收集細胞（1200rpm3-5min）去除舊培養(yang)基； 2、用PBS重懸細胞，將所有(you)細胞收集到一個離(li)心(xin)管中，再次離(li)心(xin)（1200rpm3-5min）去除PBS； 3、加入1ml左右0.25%胰酶(mei)重(zhong)懸(xuan)細胞，混勻即可，不能吹(chui)打太(tai)多次(ci)，放入(ru)培養箱(xiang)消(xiao)化，根據細胞特性決(jue)定消(xiao)化時(shi)間（約1~2分鐘） 4、消化好后(hou)，用(yong)移(yi)液槍輕輕吹(chui)打細(xi)胞懸液，使(shi)細(xi)胞團分散，迅速(su)加入3-5ml培養基(ji)混(hun)勻(yun)以(yi)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，離心(xin) （1200rpm3-5min） 去除(chu)胰酶； 5、加入5ml左右的(de)細(xi)胞相應的(de)培(pei)養基混勻，按比例接入無菌培(pei)養瓶/皿中； 6、顯微鏡下觀(guan)察看細胞是否成均勻分(fen)散(san)的單顆細胞，若有3-5個成(cheng)團(tuan)的小細胞團(tuan)可不用重新消化(hua)，使之貼壁后待細胞生長穩 定后再消散細胞。