HuCCT1人膽管(guan)癌細(xi)胞傳代方法
慧穎生物熱賣細胞：

人多(duo)發(fa)性骨(gu)髓瘤(liu)細胞RPMI-8226 1×10?cells T25培養(yang)瓶 RPMI1640培養基(ji)；10%胎牛血清；1%雙抗 懸浮(fu)生長(chang) 提供STR鑒定報告

人結直(zhi)腸腺癌細胞LS174T 1×10?cells T25培養瓶 MEM培養基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼(tie)壁生長 提供STR鑒(jian)定報告

人多形性(xing)(xing)惡性(xing)(xing)膠質瘤T98G 1×10?cells T25培養瓶 MEM培養基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼(tie)壁生長 提供(gong)STR鑒定報告

人膽管癌(ai)細胞HuCCT1 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基；10%胎(tai)牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提(ti)供STR鑒定(ding)報告

人(ren)子宮內膜癌細胞Ishikawa 1×10?cells T25培(pei)養瓶 DMEM培養(yang)基(ji)；10%胎牛血清(qing)；1%雙抗 貼(tie)壁生(sheng)長 提供STR鑒定報告

人葡(pu)萄膜(mo)黑色素瘤92-1 1×10?cells T25培(pei)養瓶 RPMI1640培養(yang)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生(sheng)長(chang) 提(ti)供STR鑒(jian)定(ding)報(bao)告

人(ren)結腸癌細胞HCT-116 1×10?cells T25培養(yang)瓶(ping) McCoy’s 5A培養基；10%胎(tai)牛(niu)血清；1%雙抗 貼壁(bi)生長 提(ti)供STR鑒定報告

人非小細(xi)胞肺癌細(xi)胞NCI-H3122 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基；10%胎牛血(xue)清；1%雙抗 貼壁生長 提供(gong)STR鑒定報告

人胰腺癌細胞HPAC 1×10?cells T25培養瓶 DMEM培養(yang)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼(tie)壁生長 提供STR鑒定報告

人(ren)肝癌細胞SNU-398 1×10?cells T25培養(yang)瓶 RPMI1640培養基；10%胎牛(niu)血(xue)清；1%雙抗 貼壁(bi)，懸(xuan)浮混(hun)合生長(chang) 提供STR鑒定報(bao)告(gao)

HuCCT1人膽管癌(ai)細胞傳代方法

1、提前(qian)打開水裕(yu)鍋，加熱到(dao)37度，從液氮 罐中取出需要復蘇的細胞；

2、放水裕鍋快(kuai)速解凍(中途不(bu)要(yao)隨意(yi)拿出凍 存(cun)管直到(dao)凍存(cun)管中的(de)液體全部融化(hua))準備(bei)細 胞專(zhuan)用培(pei)養基(ji)和(he)無菌離(li)心管培(pei)養基(ji)需提前預 熱

3、用(yong)完(wan)培稀釋凍(dong)存管(guan)(guan)中(zhong)的(de)細胞(bao)(bao)懸液至離心(xin) 管(guan)(guan)中(zhong)收集細胞(bao)(bao)至元南離心(xin)管(guan)(guan)，800-1100 rp/5min，取出離(li)心(xin)管(guan)，管(guan)底可(ke)見細胞(bao)沉淀

4、去(qu)除(chu)上清，用5ml完培重懸離心管中的 細胞液至T25瓶中(zhong)，十字搖(yao)晃(huang)均勻；放入培 養箱(xiang)，隔天觀察(cha)

傳代
1、準備(bei)所需(xu)耗材紫外(wai)消毒30分(fen)鐘，觀(guan)察細胞密(mi)度 80%即可傳代； 2、去掉(diao)舊(jiu)培養基，加入3mIPBS緩沖液輕輕潤洗后去 除，加入1ml胰(yi)酶，均勻覆蓋細胞表(biao)面(mian)(胰酶需(xu)提(ti)前預 熱)； 3、細胞消化至變圓，輕拍(pai)瓶身滑落.加(jia)入4ml完培終 止消(xiao)化，收(shou)集消(xiao)化下來的細胞至無菌(jun)離心管， 800-1100 rpm/5min 4、取出離(li)心管，管底可見細胞沉淀，準備兩(liang)個T25瓶 ,各加入2.5ml培養基； 5、離心(xin)管內去上清，用5ml完培(pei)重細胞懸液，分裝至 2個T25瓶，十(shi)字搖晃均勻放入培養箱，隔天觀察(cha)；

特殊(shu)細(xi)胞收(shou)到注意事項

部分細(xi)胞(bao)由(you)于(yu)貼壁不(bu)牢(lao)在運輸過程中(zhong)發生(sheng)細(xi)胞(bao)脫(tuo)落，這是正常現象正確處理后都可以正常生(sheng)長。 1、將培(pei)養瓶內所有培(pei)養基轉入無菌離心管，離心收集細胞（1200rpm3-5min）去除(chu)舊培養基； 2、用PBS重懸細胞，將所有細胞收(shou)集到一個離(li)心(xin)管中，再次離(li)心(xin)（1200rpm3-5min）去(qu)除PBS； 3、加入1ml左右0.25%胰(yi)酶重懸(xuan)細胞(bao)(bao)，混勻即可，不能吹打太多(duo)次(ci)，放入培養(yang)箱(xiang)消化，根(gen)據細胞(bao)(bao)特性(xing)決定消化時間（約1~2分鐘） 4、消化好后，用移液(ye)槍輕(qing)輕(qing)吹打細胞懸液(ye)，使(shi)細胞團分散，迅速加入3-5ml培(pei)養基混勻以終止消化，離心 （1200rpm3-5min） 去(qu)除胰酶； 5、加入5ml左右(you)的細胞相應的培養(yang)基混勻(yun)，按比例接入(ru)無菌培養(yang)瓶/皿(min)中； 6、顯(xian)微鏡(jing)下觀察看細(xi)胞是否(fou)成均勻分散(san)的單顆細(xi)胞，若有3-5個(ge)成團的小細胞團可不用重(zhong)新消化，使之貼壁后待(dai)細胞生長穩 定(ding)后再消散細胞。