92-1人葡萄膜黑(hei)色素(su)瘤傳代(dai)方法
慧穎(ying)生物熱(re)賣細胞：

人多(duo)發(fa)性骨髓瘤(liu)細胞RPMI-8226 1×10?cells T25培養瓶(ping) RPMI1640培養基；10%胎牛血清；1%雙抗 懸(xuan)浮生長 提供STR鑒定報(bao)告

人結直腸腺癌細(xi)胞LS174T 1×10?cells T25培養瓶(ping) MEM培養基(ji)；10%胎牛血清；1%雙抗(kang) 貼壁生長 提供STR鑒定(ding)報(bao)告

人多(duo)形(xing)性惡性膠(jiao)質瘤T98G 1×10?cells T25培養瓶 MEM培養基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報(bao)告

人膽管癌細胞HuCCT1 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基；10%胎(tai)牛血清；1%雙抗 貼壁生(sheng)長 提供STR鑒定報告

人(ren)子宮內膜癌細胞(bao)Ishikawa 1×10?cells T25培(pei)養(yang)瓶 DMEM培養基；10%胎牛血(xue)清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告

人(ren)葡萄(tao)膜黑(hei)色素瘤(liu)92-1 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基(ji)；10%胎牛血(xue)清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒(jian)定報告

人結腸癌(ai)細(xi)胞HCT-116 1×10?cells T25培養瓶 McCoy’s 5A培養(yang)基；10%胎牛血清；1%雙(shuang)抗 貼壁生長 提供STR鑒定(ding)報告

人非小細(xi)胞肺癌細(xi)胞NCI-H3122 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基；10%胎牛(niu)血清；1%雙抗 貼壁(bi)生長 提供(gong)STR鑒定報告(gao)

人胰(yi)腺癌細胞HPAC 1×10?cells T25培(pei)養瓶 DMEM培養(yang)基；10%胎牛血清；1%雙抗(kang) 貼(tie)壁生長 提供STR鑒定報告

人肝癌細胞SNU-398 1×10?cells T25培養瓶 RPMI1640培養基；10%胎牛血清(qing)；1%雙抗 貼壁，懸(xuan)浮混合生長(chang) 提供(gong)STR鑒定(ding)報告

92-1人葡萄膜黑色素瘤(liu)傳代方(fang)法

1、提(ti)前打(da)開水裕鍋，加熱到37度，從液(ye)氮(dan) 罐中取出需要復蘇的細(xi)胞；

2、放水裕(yu)鍋(guo)快速解凍(中途不要隨意拿(na)出凍 存管直到凍存管中的(de)液(ye)體全部(bu)融(rong)化)準備(bei)細 胞專用(yong)培養基和無(wu)菌離心管培養基需(xu)提前預 熱

3、用完培稀(xi)釋凍存(cun)管中(zhong)(zhong)的細胞懸液至(zhi)(zhi)離(li)心(xin) 管中(zhong)(zhong)收集細胞至(zhi)(zhi)元南離(li)心(xin)管，800-1100 rp/5min，取出離心管(guan)，管(guan)底可(ke)見(jian)細胞沉淀

4、去除上清，用5ml完培重懸離心管中的 細胞液至T25瓶中，十字(zi)搖晃均勻；放(fang)入培 養箱，隔天(tian)觀察

傳代
1、準(zhun)備(bei)所需耗材紫外消毒30分鐘，觀(guan)察細胞密度(du) 80%即可傳(chuan)代； 2、去掉舊培養(yang)基，加入3mIPBS緩沖液(ye)輕輕潤(run)洗(xi)后去 除，加入1ml胰酶，均勻覆蓋細胞表面(胰(yi)酶需提(ti)前預(yu) 熱)； 3、細胞消化(hua)至(zhi)變圓，輕拍(pai)瓶(ping)身滑(hua)落.加(jia)入4ml完培終 止(zhi)消化(hua)，收集消化(hua)下來的細胞(bao)至無菌離心管， 800-1100 rpm/5min 4、取出離心(xin)管，管底(di)可(ke)見細胞沉淀，準(zhun)備兩個(ge)T25瓶 ,各加入2.5ml培養基； 5、離心管內去上清，用5ml完培(pei)重細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，分裝至 2個T25瓶，十(shi)字(zi)搖晃均勻(yun)放(fang)入培養(yang)箱，隔天觀察(cha)；

特(te)殊細胞收到注意(yi)事項(xiang)

部分細(xi)胞由于貼壁不牢在運輸過程(cheng)中發生(sheng)細(xi)胞脫落，這是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)正(zheng)確處理后都可以正(zheng)常(chang)生(sheng)長。 1、將培養瓶內所有(you)培養基轉入無菌離(li)心(xin)管(guan)，離(li)心(xin)收(shou)集(ji)細(xi)胞（1200rpm3-5min）去除舊(jiu)培養基； 2、用(yong)PBS重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，將所有(you)細(xi)胞(bao)收集到一個離心(xin)(xin)管中(zhong)，再次離心(xin)(xin)（1200rpm3-5min）去除PBS； 3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養箱消化，根據細胞特性決定消化時間（約1~2分鐘） 4、消化(hua)好后，用移液槍(qiang)輕輕吹打細胞懸液，使細胞團(tuan)分散，迅速加入3-5ml培養(yang)基混勻(yun)以終止消化，離心(xin) （1200rpm3-5min） 去(qu)除(chu)胰酶； 5、加入5ml左右(you)的細胞相應的培養基混(hun)勻，按比例接入無(wu)菌培養瓶/皿中； 6、顯微鏡下觀(guan)察看細胞是否成均勻分散的單顆細胞，若有(you)3-5個(ge)成團的小(xiao)細(xi)胞團可不(bu)用重新(xin)消化(hua)，使之貼(tie)壁后待細(xi)胞生(sheng)長穩 定后再消散細(xi)胞。