DT40細胞，雞淋(lin)巴瘤(liu)細胞培養方法 簡介(jie)：
種(zhong)屬：雞
又稱(cheng)：DT-40; DT 40; DT40B; LSCC-DT40

組織(zhi)來(lai)源(yuan)：法氏(shi)囊

疾(ji)病：淋巴瘤

傳(chuan)代比(bi)列/細胞(bao)消化：1:2傳(chuan)代

培養(yang)條(tiao)件：DMEM養基；10%胎(tai)牛血(xue)清；5%雞(ji)血清； 0.05mMβ-巰基乙(yi)醇(chun)； 1%雙抗

介紹：DT40是來(lai)自Hyline SC雞法氏囊淋(lin)巴細胞(bao)株(zhu)經鳥類白血(xue)病(bing)病(bing)毒(du)(du)誘導建株(zhu)的。原始淋(lin)巴瘤用羅氏相關病(bing)毒(du)(du)1(RAV-1)感染出生１天的小雞(ji)得到。法氏囊(nang)中生成(cheng)的腫瘤制成(cheng)細胞懸液后通過(guo)靜脈注射輸入(ru)同基(ji)因型的受(shou)體(ti)小雞(ji)。經過(guo)一(yi)次體(ti)內移植(zhi)后，建立了DT40細(xi)胞株。 這株細(xi)胞包(bao)含的前病毒基因整(zheng)合在c-myc原癌(ai)基因(yin)的上游，表達的c-myc RNA水平較高。它缺少一個正(zheng)常(chang)c-myc基因，但含有兩個拷貝ALV去調控的myc基(ji)因。這株細胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基(ji)因(IgL)的(de)能力。 在IgL位點，DT40包含一個(ge)重排和一個(ge)胚(pei)系同(tong)源基因。c-rel基因和(he)v-rel癌基因在DT40細株中都(dou)能誘導組織(zhi)相容(rong)性(MHC)II類抗原表達。v-rel 誘導(dao)的MHCII表達比c-rel誘(you)導快(kuai)，且其有效性在數周后達(da)到c-rel的50倍。這株細(xi)胞呈淋巴母細(xi)胞表(biao)型。傳染性檢(jian)測表(biao)明DT40釋放低(di)水平的傳(chuan)染性(xing)RAV-1。這株(zhu)細胞可以用于穩轉研(yan)究。

形態：淋巴母細胞樣

倍(bei)增時間

培養(yang)條件

凍存條件

懸浮(fu)生長(chang)

~48h

氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；二氧(yang)化碳，5%。 溫度(du)：37攝氏度，培(pei)養箱濕度為(wei)70%-80%。

凍存液：90%FBS，DMSO 10%,

或使用(yong)非程(cheng)序凍存(cun)液

保藏機構

備注ATCC; CRL-2111

該細(xi)胞為懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞，請(qing)注意(yi)離心收集細(xi)胞懸(xuan)液，請(qing)勿(wu)直接倒掉(diao)細(xi)胞培養液。

僅(jin)限于科學研(yan)究(jiu)，不可(ke)作為動物或人類疾(ji)病的治療產品使用。

產品使用

細胞接收處理(li)流程：

1：觀察(cha)有無(wu)破損(sun)漏液情(qing)況，如有請拍照及時聯系客服。

2：酒精消毒培養(yang)瓶表面(mian)后顯微鏡下觀(guan)察(cha)細胞狀態，觀(guan)察(cha)拍照后不用(yong)打開培養(yang)瓶蓋 放(fang)入培養(yang)箱靜(jing)

止(zhi)2-3小時穩定 細胞(bao)狀態。

3：請按(an)照細胞操作指(zhi)南進行(xing)第一次傳代凍存處理。

4：產(chan)品隨貨會附帶細胞(bao)(bao)說明(ming)書、細胞(bao)(bao)培養操作指南、細胞(bao)(bao)鑒定、支(zhi)原體檢測報(bao)告(gao)。

5：若產品有(you)異常或其他疑問，可隨時聯系客(ke)服；轉至(zhi)技術支持。

 DT40細胞，雞淋巴瘤細胞培養(yang)方法

常溫細胞收貨(huo)當天處理方式(shi)

1.收到常溫細胞后，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xian)象。

2. 鏡(jing)下觀察有(you)無微生物污染現(xian)象(xiang)，拍(pai)照記(ji)錄(lu)不同(tong)倍數鏡(jing)下細胞狀(zhuang)態和有(you)無染菌現(xian)象(xiang)， 方便(bian)后續售后(hou)處(chu)理。

3. 消(xiao)毒后，更換(huan)贈送的培養液放置培養箱靜止2-3小時。如細胞有多數懸浮細胞需要離心收集(ji)重新接(jie)種止培(pei)養瓶(ping)。

4. 觀察細胞(bao)密度(du)若超過 80%則可正(zheng)常傳代處(chu)理(有的(de)原(yuan)代細胞不(bu)可傳代，請根據(ju)實(shi)際情(qing)況決(jue)定(ding))，傳代(dai)推薦比例(li) 1：2 到 1：3（按實(shi)際收貨細胞密(mi)度決(jue)定，若不(bu)確(que)定 可(ke)聯系(xi)技術支持）；若細胞密(mi)度不到(dao) 80%則可(ke)繼(ji)續培養，注意擰(ning)松瓶(ping)(ping)蓋或更換透氣(qi)瓶(ping)(ping)蓋；懸浮細胞(bao)注意離心所有培養基以(yi)收(shou)集細胞。

5. 由于氣溫，運(yun)輸等影響造(zao)成貼(tie)壁細胞漂浮的(de)，請將細胞離心收集后在離心管中消化后進(jin)行傳代（參考(kao)附件），或及時聯系技術支持進(jin)行指導傳代。貼壁細胞傳代：1.從培(pei)養容器中吸出用過的細胞培(pei)養基并丟棄；

2.從與貼壁細胞(bao)層相對的容(rong)器一側(ce)輕輕加入沖(chong)洗液以避(bi)免攪動(dong)細胞(bao)層，前后搖晃容(rong)器數(shu)次

3. 從培養(yang)容器中吸出沖洗液并丟(diu)棄(qi)，向培養(yang)瓶中加入預熱的胰酶(mei)；胰酶(mei)量應足以覆蓋細胞層(T25為(wei)1ml)；

4.將培養容器在室溫下孵育(yu)約 2分鐘(zhong)（請注意(yi)實(shi)際孵育時(shi)間根(gen)據所用細胞系不同而有所差異）；

5.在(zai)顯微鏡下觀察細胞解(jie)離(li)情況(kuang)；如果解(jie)離(li)程(cheng)度未達(da) 90%，可將孵(fu)育時間延長幾分鐘，每 30 秒鐘檢查(cha)一次解離情況；

6.細胞解離程度大于等于 90%時(shi)，傾(qing)斜培養(yang)容器，使細胞上液(ye)體(ti)盡(jin)快(kuai)流盡(jin)；加(jia)入所用解(jie)離劑兩(liang)倍體(ti)積的(de)預熱生(sheng)長培養基；吹打細胞層表面數次，使培養基分散；

7.將(jiang)細胞轉移到(dao)15mL 無(wu)菌離心管中，以 200×g 的離心(xin)力離心(xin) 3-5 分(fen)鐘（請注意離心(xin)速度和時(shi)間依細胞種(zhong)類不同而有(you)所差異）；

8.用最少體(ti)積的預熱生長培養基(ji)重新懸浮細胞沉(chen)淀，將細胞懸液按照推薦比例稀(xi)釋，并將適量(liang)體(ti)積的(de)細(xi)胞懸液轉移到新(xin)的(de)細(xi)胞培(pei)養容器中，把(ba)細(xi)胞放回培(pei)養箱（注：如果使(shi)用培(pei)養瓶(ping)，將(jiang)其(qi)放入培養(yang)箱前(qian)應將瓶(ping)蓋(gai)旋松，以(yi)便(bian)進(jin)行充分(fen)的(de)(de)氣(qi)體交(jiao)換，除(chu)非您使用的(de)(de)是(shi)通(tong)氣(qi)式培養(yang)瓶(ping)和(he)透(tou)氣(qi)性瓶(ping)蓋）。

懸(xuan)浮細(xi)胞傳代：將 T25 培養瓶中的懸液收(shou)集(ji)至(zhi)離(li)心管中 1000rpm 離(li)心 5min，收集上清，加 1-2ml 培養基重懸(xuan)，按(an) 1:2 比例進行比例傳代分到新T25瓶中，補充5-8ml/瓶新的培養基 ，最后放入細胞培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。