人小細胞(bao)(bao)肺癌細胞(bao)(bao)NCI-H196操作法
1×10?cells/T25培養瓶
培養條(tiao)件(jian)：RPMI1640培養基；10%胎牛(niu)血清；1%雙(shuang)抗

常溫細胞收貨當天處(chu)理方式(shi)

1.收(shou)到常溫細(xi)胞后，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現象。

2. 鏡(jing)下觀察有無微生(sheng)物污(wu)染現(xian)象，拍照記錄不同倍數鏡(jing)下細(xi)胞狀態(tai)和有無染菌(jun)現(xian)象， 方便(bian)后(hou)續售后處理。

3. 消(xiao)毒后，更換(huan)贈送(song)的培(pei)養液放置(zhi)培(pei)養箱靜止2-3小時。如細胞有多(duo)數懸浮(fu)細胞需要離心收(shou)集重新接種止培(pei)養(yang)瓶。

4. 觀(guan)察細胞(bao)密度若(ruo)超過 80%則可正常(chang)傳代(dai)處理(有的原代細胞不可傳代，請根據實(shi)際情況決(jue)定)，傳代推薦比(bi)例(li) 1：2 到 1：3（按實際收貨細(xi)(xi)胞密度決定，若不確定 可聯系技術支持）；若細(xi)(xi)胞密度(du)不到 80%則可繼續培養(yang)，注意擰松瓶蓋或(huo)更換透氣瓶蓋；懸(xuan)浮(fu)細胞注意離(li)心所(suo)有培養(yang)基(ji)以收集細(xi)胞。

5. 由于氣(qi)溫，運輸等(deng)影(ying)響造成貼壁細胞(bao)漂浮的，請將(jiang)細胞(bao)離心收集后(hou)在離心管中消(xiao)化(hua)后(hou)進行傳代（參考(kao)附件），或及時聯系技術支持(chi)進行指(zhi)導傳代。

貼壁細胞傳代：1.從培養容器中吸出用過的細胞培養基并丟棄；

2.從與貼壁細胞層相對(dui)的(de)容(rong)器(qi)一側(ce)輕(qing)輕(qing)加(jia)入沖洗(xi)液以避免攪動細胞層，前后搖晃容(rong)器(qi)數(shu)次

3. 從培(pei)養(yang)容器中吸出沖洗液并(bing)丟棄，向培(pei)養(yang)瓶(ping)中加入預(yu)熱(re)的(de)胰酶；胰酶量應(ying)足以(yi)覆(fu)蓋細胞(bao)層(T25為(wei)1ml)；

4.將培養容(rong)器在室溫下孵育約 2分鐘（請注意實際(ji)孵(fu)育(yu)時間根據所用細胞系不同而有所差(cha)異(yi)）；

5.在顯微鏡下觀察細(xi)胞解(jie)離情況；如(ru)果(guo)解(jie)離程度未(wei)達(da) 90%，可(ke)將孵育時間延長(chang)幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況；

6.細胞(bao)解離(li)程(cheng)度大于等于 90%時，傾(qing)斜培養容器，使(shi)細(xi)胞(bao)上液體盡快流盡；加入(ru)所用解(jie)離劑兩倍體積的預熱生(sheng)長培養基；吹打(da)細胞層(ceng)表面數次，使培養基分散；

7.將細胞轉(zhuan)移到15mL 無菌離心管中，以 200×g 的離(li)心力離(li)心 3-5 分鐘（請注意離心速(su)度和時(shi)間依(yi)細胞種類(lei)不同而有所(suo)差異(yi)）；

8.用最少體積的預熱生長培(pei)養基(ji)重(zhong)新懸(xuan)浮細胞沉淀(dian)，將細胞懸(xuan)液(ye)按照推薦比例稀(xi)釋(shi)，并(bing)將適量體積的細(xi)胞(bao)懸液轉移到新的細(xi)胞(bao)培養(yang)容器(qi)中，把細(xi)胞(bao)放回培養(yang)箱（注(zhu)：如果使用(yong)培養(yang)瓶，將其放入培養箱(xiang)前應將(jiang)瓶蓋旋松，以(yi)便進行(xing)充(chong)分的氣體(ti)交換，除非您使(shi)用(yong)的是(shi)通(tong)氣式培養瓶和透(tou)氣性瓶蓋）。

懸浮細胞傳代：將 T25 培養瓶中的懸液收(shou)集至離心管(guan)中 1000rpm 離心 5min，收集(ji)上(shang)清(qing)，加 1-2ml 培養基重懸，按 1:2 比例進(jin)行比例傳代分(fen)到新T25瓶中，補充5-8ml/瓶(ping)新的培養基(ji) ，最后(hou)放入(ru)細胞(bao)培養箱中培養。

 人(ren)小細胞肺癌細胞NCI-H196操作法 

人黑色素瘤細胞MNT-1  1×10?cells T25培養瓶

人(ren)結直(zhi)腸腺癌(ai)細胞COLO320 1×10?cells T25培養瓶

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人(ren)支氣管良性腫(zhong)瘤(liu)NCI-H727 1×10?cells T25培養瓶

人卵巢癌細胞IGR-OV1  1×10?cells T25培養瓶

人卵(luan)巢癌細胞(bao)OV-90 1×10?cells T25培養瓶

人惡(e)性(xing)多(duo)發(fa)性(xing)畸胎瘤細(xi)胞NTERA-2 1×10?cells T25培養瓶

人急性髓(sui)性嗜酸性粒細胞(bao)白血病細胞(bao)EOL-1    1×10?cells T25培(pei)養瓶(ping)