產品名稱：人甲胎蛋白（AFP）ELISA試劑(ji)盒

方法(fa)：ELISA定量

規格：96T

產地：美國* 若想知(zhi)道品(pin)牌請(qing)致電(dian)： ！

一、試劑盒的(de)組成

1．兔抗AFP包被的微孔板(ban)：96孔，1塊；

2．零緩沖(chong)液(ye)：1瓶，13mL；

3．凍干參照標(biao)準品：1套（0，20，50，150，500和1000ng/mL）；

4．酶聯試劑：13 mL；

5．TMB試劑（一步）：1lmL；

6．終止液(ye)（1N HGL）：1lmL。

二、自(zi)備材料

1．精(jing)密吸管(guan)：0.02，0.05，0.10，0.15，0.20和1.0mL；

2．一(yi)次性吸管(guan)吸頭；

3．蒸餾水(shui)；

4．渦旋混(hun)合器(qi)或等同物(wu)；

5．吸(xi)水紙或紙巾(jin)；

6．坐標紙；

7．酶標(biao)儀。

三、樣品的采集和制備

    按(an)規(gui)定的醫學(xue)技術要求(qiu)從(cong)獲(huo)得的全(quan)血樣(yang)品中制(zhi)備(bei)血清，此試劑盒(he)僅(jin)使用血清樣(yang)品，且無任何添加劑。

四(si)、試(shi)劑盒的保(bao)存和儀(yi)器(qi)

未啟(qi)封的試劑盒(he)須保(bao)存在2~8℃的環境下(xia)；微孔板(ban)存放(fang)在有(you)干燥(zao)劑的密(mi)封袋里(li)，以(yi)盡量減少其在潮濕空氣中的暴露(lu)；已啟(qi)封的試劑盒(he)在上述保(bao)存條件(jian)下(xia)，在有(you)效期內可保(bao)持穩定。用(yong)酶標儀在450nm處測(ce)定吸收值(zhi)時，要求譜(pu)寬≤10nm，光密(mi)度值(zhi)O.D.在0~2間或(huo)更大些(xie)。

五、試(shi)劑準備

1．檢測前(qian)使所有(you)試劑達到室溫（18~25℃，下同）。

2．用0.5mL蒸餾水溶解每個凍干的標準(zhun)品（至(zhi)少需20分鐘(zhong)）并輕(qing)輕(qing)混合。已(yi)溶解(jie)的標準(zhun)品須在2~8℃下密封保存(cun)。

六、檢測步驟

1．把所需數量(liang)的微孔固定在支架上(shang)。

2．分別(bie)吸取10µL標準(zhun)品、樣品和(he)稀釋對照品加入相應(ying)微孔。

3．將100µL零緩沖液分別加(jia)入到每個微(wei)孔中。

4．充(chong)分(fen)混合(he)30秒鐘（此(ci)步充(chong)分(fen)混合(he)至關(guan)重(zhong)要）。

5．室溫溫育30分鐘。

6．翻轉微孔架，棄(qi)掉(diao)溫(wen)育混合物(wu)。

7．用蒸(zheng)餾水(shui)(shui)或去離(li)子水(shui)(shui)沖洗微孔5次。

8．在吸(xi)水紙或紙巾上扣擊微孔(kong)(kong)板(ban)以(yi)*除去微孔(kong)(kong)中殘余的(de)水滴。

9．向(xiang)每個微孔中分別加(jia)入100µL的酶(mei)聯試劑，輕輕混(hun)合5秒鐘(zhong)。

10．室溫(wen)溫(wen)育(yu)30分鐘。

11．翻轉(zhuan)微孔架，棄(qi)掉溫育混合物。

12．用蒸(zheng)餾水沖洗微孔5次(ci)（請勿使(shi)用自(zi)來水）。

13．在吸水紙上扣擊微孔板(ban)以除去殘余的水滴。

14．向每(mei)個微孔(kong)中分別(bie)加入(ru)100µL的TMB試劑(ji)，輕(qing)輕(qing)混合5秒(miao)鐘(zhong)。

15．室(shi)溫溫育(yu)20分鐘。

16．向每個微孔加入100µL終(zhong)(zhong)止液（1N HCL）終(zhong)(zhong)止反應。

17．輕(qing)輕(qing)混合30秒鐘(zhong)（此步對確保藍色*變成黃色至關(guan)重要）。

18．在(zai)15分鐘內(nei)用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450m處讀出光(guang)密度值。 

七、結果計算

1．計(ji)算(suan)出每個參照(zhao)標準品、樣品、對(dui)照(zhao)品和患者樣品的平均吸(xi)收(shou)值（A450）。

2．以每個參照標(biao)準品的平均吸(xi)收值作縱軸(zhou)（Y），濃(nong)度值（ng/mL）作橫軸(zhou)（X）在坐標(biao)紙上繪制出標(biao)準曲線。

3．根據每個(ge)樣品(pin)的平(ping)均吸收(shou)值(zhi)，在標準曲線上找(zhao)出相(xiang)應的AFP濃度(du)值(zhi)（ng/mL）。

八、標(biao)準曲(qu)線(xian)實(shi)例

    在450nm處以Y軸上(shang)顯示的(de)吸收值，X軸上(shang)顯示的(de)AFP濃(nong)度值得出典型(xing)的(de)標準曲線(xian)。此標準曲線(xian)僅用于說明，不能用于計(ji)算未知樣品。每個使用者(zhe)應根據(ju)自(zi)己的(de)數據(ju)制作(zuo)標準曲線(xian)。 

九、期望值(zhi)和靈(ling)敏度(du)

 在高危患者血(xue)清中(zhong)，用(yong)本試劑盒(he)所(suo)測得的AFP值在100~350ng/mL之間可(ke)診斷為肝(gan)細胞癌(ai)。其AFP水(shui)平超(chao)過350ng/mg，通(tong)常表明已患病。大(da)約(yue)97％的健(jian)康受(shou)試者AFP水(shui)平低于8.5ng/mL。本試劑盒(he)可(ke)檢測的AFP的zui小濃度為2.0ng/mL。