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ELISA法檢測HBV與金標快速法兩者相比較

發布時間:2012-06-15瀏覽:1498次

  探(tan)討hbv采(cai)用(yong)(yong)金(jin)標(biao)快速法(fa)(fa)(fa)(fa)與(yu)(yu)elisa法(fa)(fa)(fa)(fa)檢測(ce)(ce)的結(jie)果對比分析(xi)。方法(fa)(fa)(fa)(fa) 本次研究選擇(ze)我院體檢某(mou)校新(xin)生為對象,分別采(cai)用(yong)(yong)酶(mei)聯免疫吸附(fu)試(shi)驗(elisa)和金(jin)標(biao)快速法(fa)(fa)(fa)(fa)對hbv進行(xing)(xing)檢測(ce)(ce),就臨床結(jie)果進行(xing)(xing)回顧性分析(xi)。結(jie)果 elisa法(fa)(fa)(fa)(fa)與(yu)(yu)金(jin)標(biao)快速法(fa)(fa)(fa)(fa)平(ping)行(xing)(xing)檢測(ce)(ce)hbv結(jie)果,經rpha法(fa)(fa)(fa)(fa)初篩,200份為hbsag陽性血清,對其分別使用(yong)(yong)elisa法(fa)(fa)(fa)(fa)與(yu)(yu)金(jin)標(biao)快速測(ce)(ce)試(shi)法(fa)(fa)(fa)(fa)對乙(yi)肝五項進行(xing)(xing)平(ping)行(xing)(xing)檢測(ce)(ce),結(jie)果無明(ming)顯差(cha)異(p>0.05)。

    hbv五項指標(biao)(biao)2種方法(fa)檢測結(jie)果的(de)總符合率(lv)分別(bie)為(wei)(wei)98.5%、99.5%、99%、96%、96.5%。以elisa為(wei)(wei)常規方法(fa)對(dui)金標(biao)(biao)快速測試法(fa)進行驗證,則金標(biao)(biao)法(fa)分別(bie)為(wei)(wei)99.5%、100%、98.5%、94.5%、95%敏(min)感(gan)性(xing)。特異性(xing)分別(bie)為(wei)(wei)84.5%、99.5%、96.5%、96%、96%。結(jie)論 金標(biao)(biao)快速法(fa)更(geng)方便、簡單、準確、快速,在對(dui)乙肝病(bing)毒五項指標(biao)(biao)快速測定中較為(wei)(wei)適(shi)用(yong),無需溫育、洗(xi)滌、終止等相對(dui)復雜的(de)步(bu)驟,對(dui)儀(yi)器設備(bei)要求(qiu)不高,可通過肉眼在15min后讀出(chu)結(jie)果,可將(jiang)此方法(fa)用(yong)于健(jian)康(kang)查(cha)體、大(da)(da)規模(mo)流行病(bing)學調查(cha)中,特別(bie)是在各種內(nei)窺鏡檢查(cha)的(de)術前,和健(jian)康(kang)人(ren)群(qun)的(de)篩查(cha),值(zhi)得廣泛推廣應用(yong)。病(bing)毒性(xing)肝炎在臨床具有較強感(gan)染(ran)力、發病(bing)率(lv)較高,對(dui)人(ren)類(lei)健(jian)康(kang)造(zao)成嚴重(zhong)威脅(xie)的(de)傳染(ran)性(xing)疾病(bing),其中危(wei)害(hai)zui大(da)(da)的(de)是乙型肝炎(hbv),hbv表(biao)面攜帶者至2002年止,據(ju)who初步(bu)估計有4億以上,其中約(yue)有1.3億發生在我國(guo),且母嬰傳播所造(zao)成的(de)感(gan)染(ran)約(yue)占30%~50%[1]。

    在(zai)對(dui)(dui)(dui)乙肝(gan)預(yu)后進(jin)行(xing)預(yu)測、流行(xing)病學(xue)調查、獻(xian)血人(ren)員篩查、公共環境衛生(sheng)、乙型肝(gan)炎免(mian)疫(yi)水(shui)平等實驗(yan)室檢(jian)(jian)測中(zhong),乙型肝(gan)炎表面抗(kang)(kang)(kang)原(hbaag)、e抗(kang)(kang)(kang)原(hbeag)、抗(kang)(kang)(kang)心抗(kang)(kang)(kang)體(抗(kang)(kang)(kang)-hbc)、表面抗(kang)(kang)(kang)體(抗(kang)(kang)(kang)-hbs)、e抗(kang)(kang)(kang)體(抗(kang)(kang)(kang)-hbe)等實用項目(mu)檢(jian)(jian)測的方(fang)法較為重要(yao)。本次研(yan)究選擇我院體檢(jian)(jian)某校新(xin)生(sheng)為對(dui)(dui)(dui)象,分別(bie)采用酶聯免(mian)疫(yi)吸附(fu)試驗(yan)(elisa)和金標快速法對(dui)(dui)(dui)hbv進(jin)行(xing)檢(jian)(jian)測,就臨床結果進(jin)行(xing)回顧性(xing)分析。

    1 資料與方法
    1.1 一般資料 本次研究對象4600例,行3~5ml靜脈血采集,將血清分離,初篩應用反向被動血球凝集試驗(rpha)的方法,將hbsag陽性的血清對乙肝hbaag、抗-hbs、抗-hbc、hbeag、抗-hbe分別用elisa和金標法平行進行檢測,隨機分為elisa法組200例,金標快速法組200例,2組對象在年齡、性別、病性、病程及hbeag檢測方面比較無統計學差異(p >0.05),具有可比性。
    1.2 方法
    1.2.1 金標(biao)快速檢(jian)測法 血清(血漿)與(yu)乙(yi)肝抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan))內(nei)的相應(ying)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(抗(kang)(kang)體(ti)(ti))特異性(xing)(xing)結合以金、銀、硒(xi)等為標(biao)志物,依據雙抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(抗(kang)(kang)體(ti)(ti))夾(jia)心(xin)原(yuan)(yuan)理,對(dui)該(gai)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan))在經組織化學的呈色反應(ying)之(zhi)后進(jin)行(xing)定性(xing)(xing)檢(jian)測。先從冰箱中在試(shi)(shi)(shi)驗前(qian)取出(chu)(chu)(chu)測試(shi)(shi)(shi)條(tiao),常溫(wen)1~2h放置后使用(yong),依次在試(shi)(shi)(shi)驗前(qian)將hbv五項(xiang)指標(biao)測試(shi)(shi)(shi)條(tiao)的一端在盛有血清標(biao)本(ben)的試(shi)(shi)(shi)管中插入約5s,后取出(chu)(chu)(chu)在白(bai)紙上放置,對(dui)弱(ruo)陽(yang)性(xing)(xing)結果等待10~15min行(xing)判(pan)斷,對(dui)強陽(yang)性(xing)(xing)結果在2min內(nei)即可觀察,zui遲不宜超過20min。結果判(pan)定:若(ruo)有一條(tiao)紅色線先后在測試(shi)(shi)(shi)條(tiao)中段出(chu)(chu)(chu)現,則為陽(yang)性(xing)(xing),若(ruo)無紅色線出(chu)(chu)(chu)現為測試(shi)(shi)(shi)條(tiao)失(shi)效或試(shi)(shi)(shi)驗失(shi)敗。

    1.2.2 elisa法(fa) hbsag目前常用(yong)的免(mian)疫測(ce)定方法(fa)為(wei)(wei)elisa試驗,應用(yong)多克(ke)隆或單克(ke)隆抗體(ti),針對hbaag的α決定簇,為(wei)(wei)雙抗體(ti)夾心模式,可行(xing)0.5ng/ml以(yi)下的測(ce)定。乙型肝炎在(zai)早期診斷指標為(wei)(wei)血(xue)(xue)清中(zhong)檢出hbsag,除急性期外,在(zai)發生hbv感染后,大部分人無臨床表現(xian)。但hbsag可在(zai)血(xue)(xue)中(zhong)檢出,這類人群為(wei)(wei)hbsag攜帶者。 hbv感染的標志為(wei)(wei)血(xue)(xue)清hbaag。

    1.3 統(tong)計學方(fang)法 采用spss13.0統(tong)計學軟件,計數資料(liao)行c2檢驗(yan)(yan),p 0.05),見表(biao)1。hbv五(wu)項指標2種方(fang)法檢測結果的總符合率分別(bie)為(wei)98.5%、99.5%、99%、96%、96.5%。以elisa為(wei)常(chang)規方(fang)法對金(jin)標快(kuai)速測試法進行驗(yan)(yan)證,則金(jin)標法分別(bie)為(wei)99.5%、100%、98.5%、94.5%、95%敏感性。特異性分別(bie)為(wei)84.5%、99.5%、96.5%、96%、96%。

    2 討論
    慢性乙型肝炎在(zai)我國為(wei)高度流行(xing)區,在(zai)我國人口中(zhong),hbsag陽性者占8.83%,遠(yuan)遠(yuan)超出世界水平,hbv變異(yi)株近年來(lai)有研究出現使(shi)(shi)(shi)患者hbv感染復制(zhi)狀況更難診斷,常有漏(lou)診發生[2]。熒光定(ding)量(liang)pcr為(wei)一項實時檢(jian)測技術,操作通(tong)過(guo)*閉管式進行(xing),使(shi)(shi)(shi)擴增產物(wu)的(de)污(wu)染大大減少,并(bing)使(shi)(shi)(shi)檢(jian)測的(de)特異(yi)性提(ti)高,擴增產物(wu)或通(tong)過(guo)電腦自動(dong)讀數來(lai)行(xing)定(ding)量(liang),使(shi)(shi)(shi)檢(jian)測的(de)靈敏(min)度提(ti)高,避免了普通(tong)pcr檢(jian)測方法的(de)缺(que)點[3]。

    因fprobe的加入,fq-pcr更加提高了產物熒光定量檢測的特異性,并可得出定量結果,減少了實驗步驟,并使操作進一步簡化,使自動化的程度增加。 膠體金標記抗體檢測細菌表面抗原是1997年有學者曾報道的方法,在多種病原微生物中成為重要的檢測手須,本次研究采用金標快速法對hbv五項進行檢查,并和elisa行平行試驗,總符合較高,且2種方法檢測結果無明顯差異性,與elisa法比較,金標快速法更方便、簡單、準確、快速,在對乙肝病毒五項指標快速測定中較為適用,無需溫育、洗滌、終止等相對復雜的步驟,對儀器設備要求不高,可通過肉眼在15min后讀出結果,可將此方法用于健康查體、大規模流行病學調查中,特別是在各種內窺鏡檢查的術前和健康人群的篩查,故在hbv五項指標快速測定中,金標快速法為較理想的方法,快速、使用簡單、準確性高,值得廣泛推廣應用。
 

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