中文(wen)名稱：人(ren)橋連整(zheng)合(he)因子1（BIN1）ELISA試劑(ji)盒

英(ying)文名稱：Human Bridging Integrator 1 （BIN1）ELISA Kit

別名：人橋連整合因(yin)子1（BIN1）酶免(mian)試(shi)劑盒；人(ren)橋連整合(he)因子(zi)1（BIN1）ELISA 檢測(ce)試劑(ji)盒

規格：96T

關(guan)于 人橋(qiao)連整合因子1（BIN1）ELISA試劑盒說明書  詳情如下：

試劑(ji)盒(he)技術參數：

試劑(ji)盒(he)性(xing)(xing)能：1.樣(yang)品線性(xing)(xing)回歸與預期濃度相關系數R 值為0.92 以上。

            2.批內(nei)與批間應(ying)分(fen)別小于9%和15%

檢測(ce)范圍：5pg/ml -180pg/ml

保存條件：2-8°C

有效期：6個月

樣本處理(li)及要求：

1. 血清：室溫(wen)血液自然凝固10-20 分鐘(zhong)，離心20 分鐘(zhong)左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集(ji)上

清(qing)，保存過程中(zhong)如出現(xian)沉(chen)淀，應再次(ci)離心。

2. 血漿：應(ying)根據(ju)標本的(de)要求選擇EDTA 或(huo)檸(ning)檬酸鈉(na)作為抗凝劑，混合10-20 ;分鐘后，離心

20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔細收(shou)集上(shang)清，保(bao)存過程中(zhong)如(ru)有沉淀形成，應該再次(ci)

離心。

3. 尿液：用無菌管收集(ji)，離心(xin)20 分鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000 轉/分）。仔細(xi)收集(ji)上清，保存過程

中如(ru)有(you)沉淀(dian)形成，應再次離心。胸(xiong)腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞(bao)培養上清(qing)：檢測分(fen)泌性的(de)成份時，用無菌(jun)管收集。離心20 分(fen)鐘左右（2000-3000 轉/分(fen)）。仔細收集上清(qing)。檢測細胞(bao)內的(de)成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞(bao)懸液，細胞(bao)

濃度達到100 萬/ml 左(zuo)右。通過(guo)反(fan)復凍融，以使(shi)細胞破壞并(bing)放出細胞內(nei)成份。離心20 分鐘左(zuo)右（2000-3000 轉/分）。仔(zi)細收集上(shang)清。保存過(guo)程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標(biao)本(ben)：切割(ge)標(biao)本(ben)后，稱取(qu)重量。加(jia)入(ru)一定(ding)量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備(bei)

用。標本融化后仍然保(bao)持(chi)2-8℃的(de)溫度。加(jia)入(ru)一(yi)定(ding)量的(de)PBS（PH7.4），用手(shou)工或勻漿器

將標本勻漿充分。離心(xin)20 分鐘(zhong)左右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔細收集上清(qing)。分裝后一(yi)份(fen)待

檢測，其余冷凍(dong)備用。

6. 標本采集后(hou)盡早進(jin)(jin)行(xing)(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關(guan)文獻進(jin)(jin)行(xing)(xing)，提(ti)取(qu)后(hou)應盡快進(jin)(jin)行(xing)(xing)實驗。若不(bu)能(neng)馬上

進行(xing)試驗(yan)，可將標本放于-20℃保存，但應避免反(fan)復(fu)凍(dong)融.

7. 不能檢測含NaN3 的樣品(pin)，因(yin)NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

檢(jian)測目的：本試劑(ji)盒用于測定人(ren)血(xue)清，血(xue)漿及相關(guan)液體(ti)樣本中(zhong)橋連整合因子(zi)1（BIN1）含量。

實驗(yan)原理(li)：本(ben)試劑盒(he)應用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)法測(ce)定(ding)標本(ben)中人橋(qiao)連(lian)整(zheng)(zheng)合(he)(he)因(yin)子(zi)1（BIN1）水平。用(yong)純化(hua)的(de)(de)人橋(qiao)連(lian)整(zheng)(zheng)合(he)(he)因(yin)子(zi)1（BIN1）抗(kang)體(ti)包(bao)(bao)被(bei)微孔板(ban)，制成(cheng)(cheng)固相抗(kang)體(ti)，往包(bao)(bao)被(bei)單抗(kang)的(de)(de)微孔中依次加(jia)入橋(qiao)連(lian)整(zheng)(zheng)合(he)(he)因(yin)子(zi)1（BIN1），再與(yu)HRP 標記(ji)的(de)(de)橋(qiao)連(lian)整(zheng)(zheng)合(he)(he)因(yin)子(zi)1（BIN1）抗(kang)體(ti)結合(he)(he)，形成(cheng)(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)標抗(kang)體(ti)復合(he)(he)物(wu)，經過*洗滌后加(jia)底物(wu)TMB 顯色(se)。TMB 在HRP 酶(mei)的(de)(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成(cheng)(cheng)藍色(se)，并在酸的(de)(de)作用(yong)下轉化(hua)成(cheng)(cheng)zui終(zhong)的(de)(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)(de)深淺和樣(yang)品中的(de)(de)橋(qiao)連(lian)整(zheng)(zheng)合(he)(he)因(yin)子(zi)1（BIN1）呈正相關。用(yong)酶(mei)標儀在450nm 波長下測(ce)定(ding)吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣(yang)品中人橋(qiao)連(lian)整(zheng)(zheng)合(he)(he)因(yin)子(zi)1（BIN1）濃度。

試劑盒組成：

試劑盒組成48 孔配置(zhi)96 孔配置(zhi)保存

說明書1 份1 份

封(feng)板膜2 片（48） 2 片（96）

密封(feng)袋1 個1 個

酶(mei)標包(bao)被(bei)板1×48 1×96 2-8℃保存

標(biao)準品(pin)：270pg/ml 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保(bao)存

標準品稀釋液(ye)1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存

酶標(biao)試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

樣(yang)品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

顯色劑A 液(ye)3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

顯色劑B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保(bao)存

終止液3ml×1 瓶(ping)(ping)6ml×1 瓶(ping)(ping)2-8℃保存

濃縮洗(xi)滌液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶2-8℃保存。

操作步驟：

1. 標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)的稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)(shi)與加(jia)(jia)(jia)(jia)樣：在(zai)(zai)酶(mei)標(biao)包被板(ban)上設標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)10 孔(kong)(kong)(kong)，在(zai)(zai)*、第(di)(di)(di)二(er)(er)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)100μl，然(ran)后(hou)(hou)在(zai)(zai)*、第(di)(di)(di)二(er)(er)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)(yun)；然(ran)后(hou)(hou)從*孔(kong)(kong)(kong)、第(di)(di)(di)二(er)(er)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)各(ge)(ge)(ge)取(qu)100μl 分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)三(san)孔(kong)(kong)(kong)和第(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)(kong)，再(zai)在(zai)(zai)第(di)(di)(di)三(san)、第(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)(kong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)(yun)；然(ran)后(hou)(hou)在(zai)(zai)第(di)(di)(di)三(san)孔(kong)(kong)(kong)和第(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)先(xian)各(ge)(ge)(ge)取(qu)50μl 棄(qi)掉(diao)，再(zai)各(ge)(ge)(ge)取(qu)50μl 分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)六(liu)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)，再(zai)在(zai)(zai)第(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)六(liu)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)(yun)；混(hun)勻(yun)(yun)后(hou)(hou)從第(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)六(liu)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)各(ge)(ge)(ge)取(qu)50μl 分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)七、第(di)(di)(di)八孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)，再(zai)在(zai)(zai)第(di)(di)(di)七、第(di)(di)(di)八孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)(yun)后(hou)(hou)從第(di)(di)(di)七、第(di)(di)(di)八孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)取(qu)50μl 加(jia)(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)九、第(di)(di)(di)十孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)，再(zai)在(zai)(zai)第(di)(di)(di)九第(di)(di)(di)十孔(kong)(kong)(kong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)(yun)后(hou)(hou)從第(di)(di)(di)九第(di)(di)(di)十孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)各(ge)(ge)(ge)取(qu)50μl 棄(qi)掉(diao)。（稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)(shi)后(hou)(hou)各(ge)(ge)(ge)孔(kong)(kong)(kong)加(jia)(jia)(jia)(jia)樣量都(dou)為50μl，濃度分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)為180pg/ml， 120pg/ml，60pg/ml，30pg/ml， 15pg/ml）。

2. 加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)：分(fen)別設空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)（空(kong)白對(dui)照孔(kong)(kong)(kong)不加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)及酶(mei)(mei)標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步操(cao)作相同）、待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)(kong)。在(zai)酶(mei)(mei)標包被板上(shang)待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)先加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)稀(xi)釋液40μl，然后再加(jia)(jia)待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)zui終(zhong)稀(xi)釋度為(wei)5 倍）。加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)加(jia)(jia)于酶(mei)(mei)標板孔(kong)(kong)(kong)底部(bu)，盡量不觸及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕輕晃(huang)動(dong)混勻。

3. 溫(wen)(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板后(hou)置(zhi)37℃溫(wen)(wen)育(yu)30 分(fen)鐘。

4. 配(pei)液：將(jiang)30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用(yong)蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用(yong)。

5. 洗滌(di)：小(xiao)心(xin)揭掉封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液體，甩干，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液，靜(jing)置30 秒后棄(qi)去(qu)，如此(ci)重復5 次，拍干。

6. 加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標(biao)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫(wen)育：操(cao)作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加(jia)入顯色劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光(guang)顯色15 分鐘.

10. 終(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定(ding)：以空白孔調零，450nm 波長依序測量(liang)各(ge)孔的(de)吸光度（OD 值）。測定(ding)應在(zai)加終(zhong)止液(ye)后15 分鐘以內進行(xing)。

注(zhu)意事項：

1． 試(shi)劑(ji)盒(he)從冷藏環境中(zhong)取出(chu)應(ying)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包(bao)被板(ban)開封后如未用完，板(ban)條應(ying)裝(zhuang)入(ru)密封袋(dai)中(zhong)保存。

2． 濃洗滌液可(ke)能會有結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀釋時可(ke)在水浴中(zhong)加溫助溶(rong)，洗滌時不(bu)影響(xiang)結(jie)果。

3． 各步加(jia)(jia)(jia)樣(yang)均(jun)應使用(yong)(yong)加(jia)(jia)(jia)樣(yang)器，并(bing)經常(chang)校對(dui)其(qi)準確(que)性(xing)，以(yi)避免試驗誤差。一次加(jia)(jia)(jia)樣(yang)時(shi)間(jian)控制在5 分鐘內(nei)，如標本數(shu)量多，推薦(jian)使用(yong)(yong)排槍加(jia)(jia)(jia)樣(yang)。

4． 請(qing)每次(ci)測(ce)(ce)定(ding)的同時(shi)做標準曲線(xian)，做復孔。如標本(ben)中待測(ce)(ce)物質含量過高(gao)（樣本(ben)OD 值大于標準品(pin)孔*孔的OD 值），請(qing)先用樣品(pin)稀(xi)釋液稀(xi)釋一定(ding)倍(bei)數(shu)（n 倍(bei)）后再測(ce)(ce)定(ding)，計算時(shi)請(qing)zui后乘(cheng)以總稀(xi)釋倍(bei)數(shu)（×n×5）。

5. ;  封板膜(mo)只限(xian)一次性使(shi)用(yong)，以避免交叉污染。

6． 底物請避(bi)光保存。

7． 嚴(yan)格按照說明(ming)書的操(cao)作進行，試驗(yan)結果判定(ding)必須以(yi)酶(mei)標儀讀數為準.

8． 所有(you)樣品，洗(xi)滌(di)液和各種(zhong)廢棄物(wu)都應(ying)按傳染物(wu)處(chu)理(li)。

9． 本試劑不同(tong)批(pi)號組分不得混用。

10. 如(ru)與英文(wen)說明書有(you)異，以英文(wen)說明書為準。

計算：

以標(biao)(biao)準物(wu)的濃(nong)度為橫坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)，OD 值(zhi)為縱坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)，在坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)紙上繪出(chu)標(biao)(biao)準曲(qu)線(xian)，根據(ju)樣(yang)品的OD值(zhi)由標(biao)(biao)準曲(qu)線(xian)查出(chu)相應的濃(nong)度；再(zai)乘(cheng)以稀釋倍數；或用標(biao)(biao)準物(wu)的濃(nong)度與(yu)OD 值(zhi)計算出(chu)標(biao)(biao)準曲(qu)線(xian)的直線(xian)回歸方(fang)程(cheng)式，將樣(yang)品的OD 值(zhi)代入方(fang)程(cheng)式，計算出(chu)樣(yang)品濃(nong)度，再(zai)乘(cheng)以稀釋倍數，即為樣(yang)品的實際濃(nong)度。

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