Caco2結腸癌細(xi)胞系（株(zhu)）傳代基本技術(shu)

1. 選用細胞生長(chang)(chang)狀態好（80－90％），生長(chang)(chang)數量大(da)于5×105 的細胞進行傳代。

2. 吸除細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液。用含雙抗(kang)的1×PBS（pH7.4）清洗細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶2 次。加入1ml 消化液至細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶，輕輕搖(yao)動，使細(xi)胞(bao)消化液剛(gang)剛(gang)覆蓋細(xi)胞(bao)表面(mian)。注：消化液配比為：0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA。

4. 將細胞培養瓶置于5%CO2、95%空氣、37℃培養箱(xiang)靜置培養數分鐘后(hou)，在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞的消化狀態。

注意(yi)：若貼(tie)壁細(xi)胞(bao)逐漸趨于圓形、部(bu)分(fen)懸浮(fu)后(hou)，即可用手指輕(qing)輕(qing)拍(pai)打細(xi)胞(bao)培養瓶側(ce)部(bu)或底部(bu)使大部(bu)分(fen)貼(tie)壁細(xi)胞(bao)脫落，之后(hou)立即加入(ru)細(xi)胞(bao)終止(zhi)液(ye)，終止(zhi)細(xi)胞(bao)消化(hua)。每種(zhong)細(xi)胞(bao)的(de)消化(hua)時(shi)間有差異，消化(hua)時(shi)注意(yi)觀察，不(bu)要消化(hua)太久。

5. 吹打培養瓶中懸浮細胞若干次，吸出(chu)細胞懸浮液，轉入15ml 離心管(guan)中，

1000rpm 離心5 分(fen)鐘。

6. 棄離心管中上清液，加入(ru)細胞培養液重懸(xuan)細胞。細胞計數(shu)，確定(ding)細胞數(shu)量(liang)。

7. 細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分瓶后(hou)，加入適量細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養液(ye)至(zhi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養瓶中(zhong)，置(zhi)于(yu)5%CO2、95%空(kong)氣、37℃ 培(pei)養箱靜置(zhi)培(pei)養24 小時(shi)。

來源：慧穎生物實驗室

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