人血(xue)管內(nei)皮細胞粘(zhan)附分(fen)子1（VCAM-1）ELISA試劑盒|Kit說明書

產品(pin)名稱：人血管內皮細(xi)胞粘附分(fen)子1（VCAM-1）ELISA試(shi)劑(ji)盒

別(bie)名：人(ren)血(xue)管(guan)內皮細(xi)胞粘附分(fen)子1（VCAM-1）ELISA檢測試(shi)劑盒；人血(xue)管內(nei)皮細胞粘(zhan)附(fu)分子1（VCAM-1）ELISA酶免試劑盒

英文名稱：Human Vascuolar cell adhesion molecule 1 （VCAM-1）ELISA Kit

規格：96T

檢測(ce)原理：試(shi)劑盒采(cai)用(yong)(yong)雙抗(kang)(kang)體一步(bu)夾(jia)心(xin)法酶(mei)聯免(mian)疫吸附(fu)試(shi)驗（ELISA）。往預先包(bao)被(bei)血管內(nei)(nei)皮細胞粘附(fu)分(fen)子(zi)1（VCAM-1/CD106）抗(kang)(kang)體的包(bao)被(bei)微孔(kong)中，依(yi)次加入標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記的檢測(ce)抗(kang)(kang)體，經過溫(wen)育并*洗滌。用(yong)(yong)底物(wu)TMB顯色(se)(se)，TMB在(zai)過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的催化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍色(se)(se)，并在(zai)酸的作用(yong)(yong)下(xia)轉化(hua)成zui終的黃色(se)(se)。顏色(se)(se)的深淺和樣品中的血管內(nei)(nei)皮細胞粘附(fu)分(fen)子(zi)1（VCAM-1/CD106）呈正相(xiang)關。用(yong)(yong)酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

操作步(bu)驟(zou)：

1. 從(cong)室溫平衡20min 后(hou)的鋁(lv)箔袋中取(qu)出所需板(ban)條(tiao)(tiao)，剩余板(ban)條(tiao)(tiao)用自封(feng)袋密封(feng)放回4℃。

2. 設(she)置(zhi)標準品(pin)孔和樣本孔，標準品(pin)孔各加不同(tong)濃度的標準品(pin)50μL；

3. 樣(yang)(yang)本孔(kong)先(xian)加(jia)待測樣(yang)(yang)本10μL，再加(jia)樣(yang)(yang)本稀釋液(ye)40μL；空白孔(kong)不加(jia)。

4. 除空白孔(kong)外，標(biao)準品孔(kong)和樣本(ben)孔(kong)中每孔(kong)加入(ru)辣根過氧化物酶（HRP）標(biao)記的檢測抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封板膜封住反應孔(kong)，37℃水浴鍋(guo)或恒(heng)溫箱溫育60min。

5. 棄去液體(ti)，吸水紙(zhi)上拍干，每孔加(jia)滿洗(xi)(xi)滌液，靜置1min，甩去洗(xi)(xi)滌液，吸水紙(zhi)上拍干，如(ru)此重復洗(xi)(xi)板5 次（也(ye)可用洗(xi)(xi)板機洗(xi)(xi)板）。

6. 每孔加(jia)入底物A、B 各(ge)50μL，37℃避光孵育(yu)15min。

7. 每孔(kong)加入終止液50μL，15min ;內，在(zai)450nm 波長(chang)處測定(ding)各孔(kong)的OD 值(zhi)。

試劑盒性能：

1. 準確(que)性：標(biao)準品線性回(hui)歸與(yu)預(yu)期濃(nong)度相關(guan)系數R 值，大于等(deng)于0.9900。

2. 靈敏度：zui低檢測濃(nong)度小于1.0 ng/mL。

3. 特異性(xing)：不(bu)與其它(ta)可溶性(xing)結構類似物(wu)交(jiao)叉反應。

4. 重復(fu)性：板內(nei)、板間變異(yi)系數均小于15%。

5. 貯藏(zang)：2-8℃，避(bi)光(guang)防(fang)潮保存。

6. 有效(xiao)期：6 個月

人血管內(nei)皮細胞粘附(fu)分子1（VCAM-1）ELISA試劑(ji)盒|Kit說明書 其它介紹：

樣品收集、處理及保(bao)存方法：

1. 血清：使用(yong)不含熱原和內毒素(su)的試管(guan)，操作過程(cheng)中避免任何細(xi)胞(bao)刺激，收(shou)集血液(ye)后，3000 轉離心10 分(fen)鐘將(jiang)血清和紅細(xi)胞(bao)迅速(su)小心地分(fen)離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝(ning)。3000 轉離心30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 ;轉離(li)心10 分鐘去除顆粒(li)和聚合物(wu)。

4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將組(zu)織加入適量生理鹽水搗(dao)碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣(yang)本收集后不及時檢(jian)測(ce)，請按一次用(yong)量分(fen)裝(zhuang)，凍存于-20℃，避免反(fan)復凍融，在(zai)室溫下解(jie)凍并確保樣(yang)品(pin)均勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍。

操作(zuo)注意(yi)事項：

1. 試劑(ji)盒(he)保存在2-8℃，使用前室(shi)溫(wen)平衡20 分鐘。從(cong)冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jie)晶，這屬于正常(chang)現象(xiang)，水(shui)浴加熱(re)使結(jie)晶*溶(rong)解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應(ying)立即放(fang)回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃(nong)度(du)(du)為(wei)0 的S0 號標準(zhun)品即可視為(wei)陰性(xing)對照(zhao)或(huo)者空(kong)白；按照(zhao)說(shuo)明書操作時樣本(ben)已經稀釋5 倍(bei)，zui終(zhong)結(jie)果乘以5 才是樣本(ben)實(shi)際濃(nong)度(du)(du)。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間(jian)、加液量及順序進行(xing)溫(wen)育操作。

5. 所有液體(ti)組(zu)分(fen)使用前充分(fen)搖勻。

試(shi)劑盒組成：

名稱 96孔(kong)配(pei)(pei)置 48孔(kong)配(pei)(pei)置 備注

微孔酶(mei)標板12 孔×8 條(tiao)12 孔×4 條(tiao)無

標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無(wu)

樣本稀(xi)釋(shi)液(ye)6mL 3mL 無(wu)

檢測抗(kang)體(ti)-HRP 10mL 5mL 無

20×洗(xi)滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jin)行(xing)稀釋

底物(wu)A 6mL 3mL 無

底物(wu)B 6mL 3mL 無

終止液6mL 3mL 無

封板膜2 張2 張無

說明書(shu)1 份(fen)1 份(fen)無

自(zi)封袋1 個1 個無

注：標(biao)準品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 ng/mL

洗(xi)板方法(fa)：

1. 手工洗板(ban)：甩盡孔(kong)內液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)，靜置1min 后(hou)甩盡孔(kong)內液(ye)體(ti)，在吸(xi)水紙上(shang)拍(pai)干，如(ru)此洗板(ban)5 次(ci)。

2. 自(zi)動洗(xi)板(ban)機(ji)：每(mei)孔注入洗(xi)液350μL，浸泡(pao)1min，洗(xi)板(ban)5 次。