大鼠肌鈣(gai)蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）elisa試劑盒使用說(shuo)明書

注：本試(shi)劑盒僅供研(yan)究使用，以下為中文說(shuo)明書，僅供參考(kao)，請(qing)以隨(sui)貨(huo)英文說(shuo)明書為準。

檢(jian)測范(fan)圍(wei)：7.5pg/ml - 1200pg/ml

方法：雙抗夾心(xin)法(fa)；兩步法(fa)；酶(mei)免elisa法(fa)

保(bao)存條(tiao)件及有效(xiao)期：

1．試劑盒(he)保存(cun)：2-8℃。

2．有效期(qi)：6個月

使用目(mu)的(de)：本試(shi)劑盒用于測定(ding)大鼠血清、血漿、細胞(bao)上(shang)清液(ye)(ye)(ye)、細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)(ye)、尿液(ye)(ye)(ye)、體(ti)液(ye)(ye)(ye)、灌洗(xi)液(ye)(ye)(ye)、腦脊髓、心房(fang)(fang)水、胸房(fang)(fang)水、組織等相關液(ye)(ye)(ye)體(ti)樣本中肌(ji)鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）含(han)量。

實驗(yan)原理：本試劑盒應用雙抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)夾心法測定標本中(zhong)大鼠肌(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋白(bai)Ⅰ（P-Tn-Ⅰ）水平。用純(chun)化的(de)(de)(de)大鼠肌(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋白(bai)Ⅰ（Tn-Ⅰ）抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)包(bao)被微(wei)(wei)孔板(ban)，制成(cheng)(cheng)(cheng)固相(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)，往包(bao)被單抗(kang)(kang)的(de)(de)(de)微(wei)(wei)孔中(zhong)依次加入肌(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋白(bai)Ⅰ（Tn-Ⅰ），再與HRP標記的(de)(de)(de)肌(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋白(bai)Ⅰ（Tn-Ⅰ）抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)結合，形成(cheng)(cheng)(cheng)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)-抗(kang)(kang)原(yuan)-酶標抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)復合物(wu)，經過*洗滌后(hou)加底物(wu)TMB顯色(se)(se)(se)。TMB在HRP酶的(de)(de)(de)催化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)(cheng)(cheng)藍色(se)(se)(se)，并在酸的(de)(de)(de)作用下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)(cheng)(cheng)zui終(zhong)的(de)(de)(de)黃色(se)(se)(se)。顏色(se)(se)(se)的(de)(de)(de)深淺(qian)和樣品中(zhong)的(de)(de)(de)肌(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋白(bai)Ⅰ（Tn-Ⅰ）呈正相(xiang)關。用酶標儀(yi)在450nm波長下(xia)測定吸光(guang)度（OD值），通過標準曲線計算樣品中(zhong)大鼠肌(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋白(bai)Ⅰ（Tn-Ⅰ）濃度。

試劑盒組成：

標本(ben)要(yao)求：

1．標本(ben)采集后盡(jin)(jin)早進(jin)行(xing)(xing)提取(qu)，提取(qu)按相關文獻進(jin)行(xing)(xing)，提取(qu)后應盡(jin)(jin)快進(jin)行(xing)(xing)實驗。若不能馬上進(jin)行(xing)(xing)試(shi)驗，可將標(biao)本放(fang)于-20℃保存，但應避免反復凍(dong)融

2．不(bu)能檢測含NaN3的(de)(de)樣品，因NaN3抑制辣根過氧(yang)化物酶的(de)(de)（HRP）活性(xing)。

操作(zuo)步驟：

1.標準品的稀(xi)釋(shi)：本試劑盒提供原倍標準品一(yi)支，用戶(hu)可按照(zhao)下列圖表(biao)在小試管中(zhong)進行稀(xi)釋(shi)。

2.加樣：分別設空白孔(kong)（空白對照(zhao)孔(kong)不加樣品及(ji)酶(mei)標試劑，其余各步操(cao)作相同）、標準孔(kong)、待測(ce)樣品孔(kong)。在酶標(biao)包被板上(shang)標(biao)準品準確加樣(yang)50μl，待測樣品(pin)孔中先加(jia)樣品(pin)稀釋液40μl，然后(hou)再加待測(ce)樣品10μl（樣品zui終稀釋度(du)為5倍）。加(jia)樣將樣品加(jia)于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板(ban)膜封板(ban)后置(zhi)37℃溫育30分(fen)鐘。  

4.配液：將30倍濃縮(suo)洗滌(di)液用蒸餾水(shui)30倍稀釋(shi)后備(bei)用

5.洗滌：小心揭(jie)掉封板膜，棄去液體(ti)，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置(zhi)30秒(miao)后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入酶標(biao)試劑50μl，空白孔(kong)除(chu)外。

7.溫(wen)育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔(kong)先加入顯色劑A50μl，再加入顯色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光顯色15分鐘(zhong).

10.終(zhong)(zhong)止：每孔(kong)加終(zhong)(zhong)止液50μl，終止(zhi)反應（此時藍色立(li)轉黃色）。

11.測定：以空(kong)(kong)白空(kong)(kong)調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(du)（OD值）。 測定應在加終止液后15分(fen)鐘(zhong)以內進(jin)行(xing)。

操(cao)作程序總結：

1）準(zhun)備試劑盒，樣品和標準(zhun)品

2）加入準備好的(de)樣品和標準品，37°C反應30分鐘(zhong)

3）洗板5次，加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑，37°C反應(ying)30分鐘(zhong)

4）洗板(ban)5次(ci)，加入顯色(se)液A，B，37°C顯色(se)10分鐘

5）加入終止液

6）15分(fen)鐘內(nei)讀OD值(zhi)

計(ji)算(suan)：

  以標(biao)(biao)(biao)準物的濃度(du)為橫(heng)坐標(biao)(biao)(biao)，OD值(zhi)為縱坐標(biao)(biao)(biao)，在坐標(biao)(biao)(biao)紙上繪出標(biao)(biao)(biao)準曲(qu)線(xian)，根據樣品的OD值(zhi)由標(biao)(biao)(biao)準曲(qu)線(xian)查出相(xiang)應的濃度(du)；再乘以稀釋倍數；或(huo)用標準(zhun)物的(de)濃度(du)與OD值計算(suan)出(chu)標準(zhun)曲線的(de)直線回歸方程式(shi)，將樣品的(de)OD值代(dai)入方程式(shi)，計算(suan)出(chu)樣品濃度(du)，再乘以稀釋倍數(shu)，即為樣品的實(shi)際濃(nong)度。

注意(yi)事(shi)項：

1．試劑(ji)盒從冷藏環(huan)境中取出應(ying)在室溫平(ping)衡15-30分(fen)鐘(zhong)后方可使(shi)用，酶標包被板開封后如未用完(wan)，板條應(ying)裝入密封袋中保(bao)存(cun)。

2．濃洗滌(di)液可能(neng)會(hui)有結晶析出，稀釋時可(ke)在水浴中加溫(wen)助溶，洗滌時不影響(xiang)結果。

3．各步(bu)加(jia)樣(yang)均應使(shi)用加(jia)樣(yang)器，并經常校對(dui)其(qi)準確性，以避免試(shi)驗誤差。一次加(jia)樣(yang)時間(jian)控制在5分鐘內(nei)，如標(biao)本數量多(duo)，推薦使(shi)用排槍(qiang)加(jia)樣(yang)。

4．請(qing)每次測(ce)定的同時做標(biao)準曲線，做復孔。如(ru)標(biao)本中待(dai)測(ce)物質含量過(guo)高(gao)（樣(yang)本OD值大于(yu)標(biao)準品孔*孔的OD值），請(qing)先用樣(yang)品稀釋液稀釋一(yi)定倍數（n倍）后(hou)再測(ce)定，計(ji)算時請(qing)zui后(hou)乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉污染。

6．底物(wu)請避光保存。

7．嚴(yan)格按照說明書的操作(zuo)進行，試(shi)驗結果(guo)判定必須以(yi)酶標儀讀(du)數為準.

8．所有(you)樣品(pin)，洗滌液和各種廢棄物(wu)都應(ying)按傳(chuan)染物(wu)處理。

9．本試劑不(bu)同批號組分不(bu)得混用。