大鼠肌鈣蛋白(bai)T（Tn-T）elisa試劑盒Kit|說明書

中(zhong)文名稱(cheng):大鼠(shu)肌鈣蛋白T（Tn-T）elisa試劑(ji)盒

別名：大鼠肌鈣蛋白T（Tn-T）elisa檢測試劑盒(he)；大(da)鼠肌(ji)鈣(gai)蛋白T（Tn-T）elisa酶免試劑(ji)盒(he)

英文名稱(cheng)：Rat Troponin T,Tn-T ELISA Kit

規格：96T

注：本試劑盒僅供研(yan)究(jiu)使用，以(yi)下為(wei)中文說(shuo)明(ming)書(shu)，僅供參考，請以(yi)隨貨英(ying)文說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)準。

檢測范(fan)圍：2.5pg/ml - 400pg/ml

使用目的(de)：本(ben)試劑盒用于測定大鼠血(xue)清(qing)、血(xue)漿及(ji)相關(guan)液體(ti)樣本(ben)中(zhong)肌鈣蛋白T（Tn-T）含(han)量。

使用樣本：大(da)鼠血(xue)清(qing)、血(xue)漿、細胞(bao)(bao)上清(qing)液、細胞(bao)(bao)裂(lie)解(jie)液、尿液、體液、灌洗液、腦(nao)脊髓、心房水、胸房水、組(zu)織等(deng)。

實驗(yan)原理：本試(shi)劑盒應用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾(jia)心法測定(ding)標(biao)(biao)本中(zhong)大鼠肌(ji)(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)T（P-Tn-T）水平(ping)。用(yong)純化(hua)(hua)的(de)大鼠肌(ji)(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)T（Tn-T）抗(kang)體(ti)包被微(wei)孔(kong)板，制成固(gu)相抗(kang)體(ti)，往包被單抗(kang)的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加入(ru)肌(ji)(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)T（Tn-T），再與HRP標(biao)(biao)記的(de)肌(ji)(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)T（Tn-T）抗(kang)體(ti)結合(he)(he)，形成抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)復合(he)(he)物(wu)，經(jing)過*洗滌后加底物(wu)TMB顯(xian)色。TMB在HRP酶的(de)催化(hua)(hua)下(xia)轉化(hua)(hua)成藍色，并(bing)在酸的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉化(hua)(hua)成zui終(zhong)的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深淺和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)肌(ji)(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)T（Tn-T）呈(cheng)正(zheng)相關。用(yong)酶標(biao)(biao)儀在450nm波長下(xia)測定(ding)吸(xi)光(guang)度（OD值），通過標(biao)(biao)準曲(qu)線(xian)計(ji)算樣(yang)品(pin)中(zhong)大鼠肌(ji)(ji)鈣(gai)(gai)(gai)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)T（Tn-T）濃度。

試(shi)劑(ji)盒組(zu)成：

樣(yang)本要求：

1．標(biao)本采集后(hou)盡早進行(xing)(xing)提取，提取按(an)相關文獻(xian)進行(xing)(xing)，提取后(hou)應盡快進行(xing)(xing)實(shi)驗。若不能馬上進行(xing)(xing)試驗，可將標(biao)本放(fang)于-20℃保存，但應避(bi)免反復凍(dong)融

2．不能檢測(ce)含(han)NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑制辣(la)根過(guo)氧(yang)化物酶的（HRP）活性。

操(cao)作步驟：

1.標(biao)準品(pin)的稀(xi)釋：本試(shi)(shi)劑盒(he)提供原倍(bei)標(biao)準品(pin)一支，用戶可按照下列圖表在小試(shi)(shi)管中(zhong)進行稀(xi)釋。

2.加(jia)樣(yang)：分別(bie)設空白孔（空白對照(zhao)孔不加(jia)樣(yang)品及酶標試劑，其余各步(bu)操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶(mei)標(biao)包被板(ban)上(shang)標(biao)準品(pin)準確(que)加樣50μl，待測樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先加樣(yang)品(pin)稀釋液40μl，然后再加待測樣品(pin)10μl（樣品(pin)zui終(zhong)稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混勻。

3.溫(wen)(wen)育：用封(feng)板膜封(feng)板后置(zhi)37℃溫(wen)(wen)育30分鐘(zhong)。  

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后(hou)備用

5.洗(xi)滌：小心(xin)揭掉封板膜，棄去液(ye)體，甩干，每(mei)孔加滿洗滌液，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)后棄去，如(ru)此重復5次，拍干。

6.加(jia)(jia)酶(mei)(mei)：每孔加(jia)(jia)入酶(mei)(mei)標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育(yu)：操作(zuo)同3。

8.洗滌：操作(zuo)同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色15分(fen)鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止(zhi)反應（此時藍(lan)色立轉黃(huang)色）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長(chang)依序測量各(ge)孔(kong)的吸光度（OD值）。 測定應在加終(zhong)止液(ye)后15分鐘(zhong)以(yi)內進行。

操(cao)作程序總結：

1）準備試(shi)劑盒，樣品和標準品

2）加入準備好的樣品和標準品，37°C反應30分鐘

3）洗板(ban)5次，加入(ru)酶標試(shi)劑(ji)，37°C反應30分鐘

4）洗板5次，加入顯(xian)色(se)液A，B，37°C顯(xian)色(se)10分鐘(zhong)

5）加(jia)入(ru)終止液(ye)

6）15分鐘內讀OD值
7）計算

計算：

  以標(biao)準(zhun)物的濃度(du)(du)為橫(heng)坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙上(shang)繪出標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，根據樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)(zhi)由標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)查出相應的濃度(du)(du)；再(zai)乘以稀釋倍(bei)(bei)數；或用(yong)標(biao)準(zhun)物的濃度(du)(du)與OD值(zhi)(zhi)計算(suan)出標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)的直線(xian)回歸方(fang)程式(shi)，將樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)(zhi)代入方(fang)程式(shi)，計算(suan)出樣(yang)品(pin)濃度(du)(du)，再(zai)乘以稀釋倍(bei)(bei)數，即為樣(yang)品(pin)的實際濃度(du)(du)。

保存(cun)條件及有效期：

1．試(shi)劑(ji)盒(he)保(bao)存：；2-8℃。

2．有(you)效期：6個月

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環境(jing)中取出應在室溫平衡15-30分鐘后(hou)方可使用(yong)，酶標包(bao)被板(ban)開(kai)封(feng)后(hou)如未用(yong)完，板(ban)條(tiao)應裝(zhuang)入密(mi)封(feng)袋(dai)中保(bao)存。

2．濃洗滌液可能會有(you)結晶析出，稀釋時可在水(shui)浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使(shi)用加樣器，并(bing)經常校對其準確性，以避(bi)免(mian)試驗誤(wu)差。一次(ci)加樣時間控制在(zai)5分鐘內，如標本數量(liang)多(duo)，推(tui)薦使(shi)用排槍加樣。

4．請每次測定的同(tong)時(shi)做標準(zhun)曲(qu)線(xian)，做復孔。如標本(ben)中待測物質含量過(guo)高（樣本(ben)OD值(zhi)大(da)于標準(zhun)品孔*孔的OD值(zhi)），請先用樣品稀(xi)釋(shi)(shi)液稀(xi)釋(shi)(shi)一定倍(bei)數（n倍(bei)）后再測定，計算時(shi)請zui后乘以總稀(xi)釋(shi)(shi)倍(bei)數（×n×5）。

5．封(feng)板膜(mo)只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格(ge)按照說(shuo)明書的操作進行，試驗(yan)結果判定必須(xu)以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品(pin)，洗滌液和(he)各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試(shi)劑不同批號組分不得混用(yong)。