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HEK-293-6e細胞培養

發(fa)布時間(jian):2014-04-11瀏覽(lan):2119次

HEK-293-6e細胞培養

使用F17+L谷氨酰胺培養液,37℃ 下置于5%CO2培養箱中。待細胞融合至80%,用0.25%胰酶消化傳代后接種(細胞密度5 XlO4)于培養瓶或孔板,待細胞融合至約70%后用于實驗。

細胞培養方法如(ru)下: 

1.貼壁(bi)細(xi)胞(bao)細(xi)胞(bao)換液:

1)吸光(guang)培養瓶中的培養液(ye)。

2)用(yong)1xD-hank`s洗一次。

3)加(jia)入適量的新鮮培養液(ye),接種于新的培養瓶內,放(fang)入培養箱內培養。

2.懸(xuan)浮細胞換(huan)液

1)吸光培養(yang)瓶中的培養(yang)液放入15ml離心管中離心1500rpm 5min。

2)細胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。

3)加入(ru)適量(liang)的(de)新(xin)鮮培養(yang)(yang)液,接種于新(xin)的(de)培養(yang)(yang)瓶內,放入(ru)培養(yang)(yang)箱內培養(yang)(yang)。

3.細胞傳代(貼壁(bi)細胞傳代采用胰(yi)酶消化(hua)法,常用消化(hua)液(ye)為0.25%的胰(yi)蛋白(bai)液(ye))

1)吸光培養瓶中的培養液。

2)用1xD-hank`s洗一(yi)次。

3)加入0.5ml-1ml 0.25%的胰(yi)蛋白酶液(以消化液能覆蓋整個瓶底為(wei)準(zhun))。

4)靜止(zhi)2-10分鐘(zhong)(顯微鏡下動(dong)態監測(ce))。

5)吸(xi)去胰蛋白酶(mei)液,加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)基。

6)用吸管吸取瓶(ping)內培養液(ye),反復吹打瓶(ping)壁細(xi)胞(bao),形成細(xi)胞(bao)懸液(ye)。

7)吸取1/5-1/10細胞(bao)懸液(ye)接種(zhong)于新的培養(yang)瓶內。

8)加入適量的新(xin)(xin)鮮培(pei)(pei)養液,接種于新(xin)(xin)的培(pei)(pei)養瓶內(nei),放入培(pei)(pei)養箱內(nei)培(pei)(pei)養。

4.細胞(bao)的凍存(cun):

1)預(yu)先配制凍存液:90%胎牛血清+10%DMSO

2)取對數期生長細胞經胰酶消化后加入培養液終止胰酶反應,離心(1500rpm 5min)去上清留沉淀加適量凍存液,用吸管吸打制成細胞懸液(1 XlO5-5X106/ml)

3)加入1ml細胞懸(xuan)液(ye)于凍存(cun)管中(zhong),密封后標記凍存(cun)細胞名稱(cheng)和凍存(cun)日期。

5.細胞復蘇:

1)從(cong)液氮中取出凍(dong)存管,迅速投入37度(du)(du)-38度(du)(du)水浴(yu)中

2)使其(qi)融(rong)化5min內用培養液(ye)稀釋至原液(ye)體的10倍以(yi)上,低速離心1500rpm 5min

3)去上清,加入培(pei)養(yang)液,細胞轉入培(pei)養(yang)器皿中進行(xing)培(pei)養(yang)

 

 

如(ru)果(guo)培養基(ji)還未到,我們(men)建議離心(xin),離心(xin)后分別收集細胞(bao)和培養基(ji)。取5ML培養基(ji)重(zhong)懸細胞(bao)沉淀(dian)。接種于T25培養瓶中。

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