ELISA法是免疫(yi)診斷中的一(yi)(yi)項新(xin)技術，不僅適用于臨床標本(ben)的檢查(cha)，而且由(you)于一(yi)(yi)天之內可以檢查(cha)幾百(bai)甚至上千份標本(ben)，也適合(he)(he)于血清流行病學調查(cha)。它以免疫(yi)學反應為基礎，將(jiang)抗(kang)原、抗(kang)體(ti)(ti)的特異性反應與酶(mei)對底物(wu)的催(cui)化作用相結合(he)(he)起來的一(yi)(yi)種敏感(gan)性很高(gao)的試(shi)驗技術。由(you)于抗(kang)原、抗(kang)體(ti)(ti)的反應在(zai)一(yi)(yi)種固相載體(ti)(ti)──聚苯乙(yi)烯微量滴定(ding)板的孔中進行，每加入(ru)一(yi)(yi)種試(shi)劑孵育后(hou)，可通過洗滌除去多余的游(you)離(li)反應物(wu)，從而保證試(shi)驗結果的特異性與穩定(ding)性。在(zai)實際應用中，通過不同的設計(ji)，具體(ti)(ti)的方法步驟可有(you)多種。

ELISA試劑盒使用安全

1.正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2.在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
(1)固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
(3)酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
(4)酶(mei)的底(di)(di)物及供氫(qing)體(ti)(ti)(ti)的選擇：對(dui)供氫(qing)體(ti)(ti)(ti)的選擇要(yao)求是(shi)價廉、安(an)全、有(you)明顯地顯色(se)反應(ying)(ying)，而本身無色(se)。有(you)些供氫(qing)體(ti)(ti)(ti)(如(ru)OPD等(deng))有(you)潛在的致(zhi)癌作用(yong)，應(ying)(ying)注意(yi)防護。有(you)條件(jian)者應(ying)(ying)使用(yong)不致(zhi)癌、靈敏度高的供氫(qing)體(ti)(ti)(ti)，如(ru)TMB和(he)ABTS是(shi)目前(qian)較為(wei)滿意(yi)的供氫(qing)體(ti)(ti)(ti)。底(di)(di)物作用(yong)一段時間后(hou)，應(ying)(ying)加(jia)入(ru)強(qiang)酸或強(qiang)堿以終止反應(ying)(ying)。通常(chang)底(di)(di)物作用(yong)時間，以10-30分鐘為(wei)宜。底(di)(di)物使用(yong)液必須新鮮(xian)配制，尤其是(shi)H2O2在臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia)入(ru)。