ELISA試劑盒操作事項細則

1.正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2.在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
(1)固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
(3)酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
(4)酶的(de)底(di)(di)物(wu)及供(gong)氫體(ti)(ti)的(de)選(xuan)擇(ze)：對(dui)供(gong)氫體(ti)(ti)的(de)選(xuan)擇(ze)要求(qiu)是價(jia)廉、安全、有(you)明顯地顯色反應(ying)(ying)，而本身(shen)無色。有(you)些供(gong)氫體(ti)(ti)(如OPD等(deng))有(you)潛在(zai)(zai)的(de)致癌(ai)(ai)作(zuo)用(yong)，應(ying)(ying)注(zhu)意防(fang)護。有(you)條件者應(ying)(ying)使(shi)用(yong)不致癌(ai)(ai)、靈敏度(du)高的(de)供(gong)氫體(ti)(ti)，如TMB和ABTS是目前較為(wei)滿意的(de)供(gong)氫體(ti)(ti)。底(di)(di)物(wu)作(zuo)用(yong)一段時間后，應(ying)(ying)加入強(qiang)酸(suan)或強(qiang)堿以(yi)終止反應(ying)(ying)。通常底(di)(di)物(wu)作(zuo)用(yong)時間，以(yi)10-30分鐘(zhong)為(wei)宜。底(di)(di)物(wu)使(shi)用(yong)液(ye)必須(xu)新鮮配(pei)制，尤其是H2O2在(zai)(zai)臨(lin)用(yong)前加入。