（本試劑盒僅供體(ti)外(wai)研究(jiu)使用(yong)、不用(yong)于(yu)臨床診斷!）

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)法測(ce)定標(biao)(biao)本中(zhong) 小(xiao)鼠軟(ruan)(ruan)骨(gu)(gu)(gu)糖(tang)(tang)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)39(HC gp-39)水平(ping)。用純化的(de)(de)(de)(de)小(xiao)鼠軟(ruan)(ruan)骨(gu)(gu)(gu)糖(tang)(tang)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)39(HC gp-39)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)微(wei)孔板，制(zhi)成(cheng)固相抗(kang)體(ti)，往包(bao)被(bei)單抗(kang)的(de)(de)(de)(de)微(wei)孔中(zhong)加(jia)入軟(ruan)(ruan)骨(gu)(gu)(gu)糖(tang)(tang)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)39(HC gp-39)，再與(yu)HRP標(biao)(biao)記的(de)(de)(de)(de)軟(ruan)(ruan)骨(gu)(gu)(gu)糖(tang)(tang)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)39(HC gp-39)抗(kang)體(ti)結合，形成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)復合物(wu)，經過*洗滌后加(jia)底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在HRP酶的(de)(de)(de)(de)催(cui)化下轉(zhuan)(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，并(bing)在酸(suan)的(de)(de)(de)(de)作用下轉(zhuan)(zhuan)化成(cheng)zui終的(de)(de)(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)(de)(de)深淺和(he)樣品(pin)(pin)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)軟(ruan)(ruan)骨(gu)(gu)(gu)糖(tang)(tang)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)39(HC gp-39)呈正相關。用酶標(biao)(biao)儀在450nm波(bo)長下測(ce)定吸光度（OD值），通過標(biao)(biao)準曲線計算樣品(pin)(pin)中(zhong)小(xiao)鼠軟(ruan)(ruan)骨(gu)(gu)(gu)糖(tang)(tang)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)39(HC gp-39)的(de)(de)(de)(de)濃度。

試劑(ji)盒(he)組(zu)成：

注意事項：

1． 試劑盒從(cong)冷藏環境(jing)中取(qu)出應在室溫平衡15-30分鐘后(hou)方可使用，酶標包被(bei)板開封(feng)后(hou)如未用完，板條應裝入密封(feng)袋中保存。

2． 濃洗(xi)滌(di)液可能會有結晶析出，稀釋時(shi)可在水浴中加溫助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時(shi)不影(ying)響結果(guo)。

3． 各步加(jia)樣(yang)均應使(shi)用加(jia)樣(yang)器，并(bing)經常校對其準確性，以(yi)避免試驗誤差。一(yi)次加(jia)樣(yang)時間控制在(zai)5分鐘(zhong)內，如標本數量多，推(tui)薦(jian)使(shi)用排(pai)槍加(jia)樣(yang)。

4． 請每次測定的同時做(zuo)標準(zhun)曲線，做(zuo)復孔(kong)。如標本中待測物質含(han)量過高（樣本OD值大于標準(zhun)品(pin)孔(kong)*孔(kong)的OD值），請先(xian)用樣品(pin)稀釋液稀釋一定倍(bei)(bei)數(shu)（n倍(bei)(bei)）后再(zai)測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍(bei)(bei)數(shu)（×;n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉(cha)污(wu)染。

6． 底(di)物(wu)請避光保(bao)存。

7． 嚴格按照(zhao)說明書的操作進行，試驗結(jie)果(guo)判定必須以酶標(biao)儀讀(du)數為準.

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄(qi)物都應(ying)按(an)傳染(ran)物處理。

9． 本試(shi)劑不(bu)(bu)同批(pi)號組分不(bu)(bu)得混用。

操作(zuo)步驟：

1.  標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)與加(jia)樣：在(zai)(zai)(zai)酶標(biao)(biao)包被板(ban)上(shang)設標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)10孔(kong)(kong)，在(zai)(zai)(zai)*、第(di)(di)(di)二孔(kong)(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)100μl，然(ran)后(hou)在(zai)(zai)(zai)*、第(di)(di)(di)二孔(kong)(kong)中(zhong)加(jia)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)50μl，混勻(yun)(yun)；然(ran)后(hou)從(cong)*孔(kong)(kong)、第(di)(di)(di)二孔(kong)(kong)中(zhong)各(ge)取100μl分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)到(dao)第(di)(di)(di)三孔(kong)(kong)和第(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)，再(zai)在(zai)(zai)(zai)第(di)(di)(di)三、第(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)50μl，混勻(yun)(yun)；然(ran)后(hou)在(zai)(zai)(zai)第(di)(di)(di)三孔(kong)(kong)和第(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)中(zhong)先各(ge)取50μl棄(qi)(qi)掉，再(zai)各(ge)取50μl分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)到(dao)第(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)六(liu)(liu)孔(kong)(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)(zai)(zai)第(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)六(liu)(liu)孔(kong)(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)50ul，混勻(yun)(yun)；混勻(yun)(yun)后(hou)從(cong)第(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)六(liu)(liu)孔(kong)(kong)中(zhong)各(ge)取50μl分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)到(dao)第(di)(di)(di)七(qi)、第(di)(di)(di)八(ba)(ba)孔(kong)(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)(zai)(zai)第(di)(di)(di)七(qi)、第(di)(di)(di)八(ba)(ba)孔(kong)(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)50μl，混勻(yun)(yun)后(hou)從(cong)第(di)(di)(di)七(qi)、第(di)(di)(di)八(ba)(ba)孔(kong)(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)(bie)(bie)取50μl加(jia)到(dao)第(di)(di)(di)九、第(di)(di)(di)十(shi)孔(kong)(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)(zai)(zai)第(di)(di)(di)九第(di)(di)(di)十(shi)孔(kong)(kong)分(fen)別(bie)(bie)(bie)加(jia)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)50μl，混勻(yun)(yun)后(hou)從(cong)第(di)(di)(di)九第(di)(di)(di)十(shi)孔(kong)(kong)中(zhong)各(ge)取50μl棄(qi)(qi)掉。（稀(xi)釋(shi)后(hou)各(ge)孔(kong)(kong)加(jia)樣量都為(wei)50μl，濃(nong)度分(fen)別(bie)(bie)(bie)為(wei)180 ug/L，120 ug/L ，60 ug/L，30 ug/L， 15 ug/L）。

2.  加樣(yang)(yang)：分別設(she)空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對照孔(kong)不(bu)加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)及酶標(biao)試劑，其余(yu)各(ge)步操作相(xiang)同(tong)）、待(dai)測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)。在酶標(biao)包被(bei)板上待(dai)測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)中先加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再加待(dai)測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)(pin)zui終稀釋度為5倍(bei)）。加樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加于酶標(biao)板孔(kong)底部，盡量不(bu)觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻。

3.  溫育(yu)(yu)：用封板膜封板后置(zhi)37℃溫育(yu)(yu)30分鐘。

4.  配(pei)液(ye)：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)30（48T的20倍）倍稀(xi)釋后備用(yong)。

5.  洗滌：小心揭掉封板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體，甩干，每孔加滿洗滌液(ye)，靜置30秒后棄去(qu)，如此(ci)重復5次，拍(pai)干。

6.  加酶：每孔加入(ru)酶標試劑50μl，空白孔除外(wai)。

7.  溫育(yu)：操作同3。

8.  洗滌：操作(zuo)同5。

9.  顯色：每(mei)孔先(xian)加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光顯色15分(fen)鐘.

10. 終(zhong)止(zhi)(zhi)：每(mei)孔加終(zhong)止(zhi)(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)(zhi)反(fan)應（此時藍(lan)色(se)立轉黃色(se)）。

11. 測(ce)(ce)定(ding)：以空白空調零，450nm波長依序測(ce)(ce)量各孔的吸光度（OD值）。 測(ce)(ce)定(ding)應在加終(zhong)止液后15分鐘(zhong)以內(nei)進行。

小鼠軟(ruan)骨糖蛋白39(HC gp-39)Elisa試劑盒相關產品主要有：

小鼠基質金屬(shu)蛋白酶(mei)-9（MMP-9）Elisa試劑(ji)盒

小鼠軟骨糖蛋白39(HC gp-39)Elisa試(shi)劑盒

小鼠組織因子(zi)途徑抑制物(TFPI)Elisa試(shi)劑(ji)盒

小鼠免(mian)疫球蛋白G2a(IgG2a)Elisa試劑盒

小鼠蛋白激酶(mei)A（PKA）Elisa試劑盒(he)