人(ren)單(dan)胺(an)氧(yang)化酶A（MAOA)酶聯免疫分析(xi)（ELISA）

試劑(ji)盒使用(yong)說明書

本試(shi)劑(ji)盒(he)僅(jin)供研(yan)究使用。

藥(yao)品名稱：

通用名：人單胺(an)氧化酶A（MAOA)酶聯(lian)免(mian)疫(yi)分析試(shi)劑盒

使用目的：

本(ben)試劑盒用(yong)于(yu)測定人血清，血漿及相關液體樣本中單胺氧化(hua)酶A（MAOA)含量。

實驗(yan)原理

本試(shi)劑盒應(ying)用(yong)間接法測(ce)定標本中人單胺氧化酶A（MAOA)水(shui)平。用純(chun)化的(de)人單胺氧化酶A（MAOA)抗體(ti)(ti)包被微孔(kong)板，制成固(gu)相抗體(ti)(ti)，往包被單抗的(de)(de)微孔(kong)中依(yi)次加入已知濃度的(de)(de)單胺氧化酶A（MAOA)標準品和未(wei)知(zhi)濃度的單胺氧化酶A（MAOA)待(dai)檢樣品，溫育后，加(jia)入(ru)生(sheng)物(wu)素標(biao)記的抗IgG抗(kang)體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成(cheng)免疫復合物，經(jing)過(guo)*洗滌(di)后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的(de)(de)催(cui)化下轉化成藍(lan)色(se)，并(bing)在(zai)酸的(de)(de)作用下轉化成zui終的(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺和(he)樣(yang)品中(zhong)的(de)(de)單胺氧化酶A（MAOA)呈正相關。用酶標(biao)儀在(zai)450nm波長下(xia)測定吸光度(du)（OD值），通(tong)過標準(zhun)曲線計算樣品中人單胺氧化酶A（MAOA)濃(nong)度。

試劑盒組成

標本要(yao)求(qiu)

1．不能檢測(ce)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根(gen)過氧化物酶的（HRP）活(huo)性(xing)。

2．標本采集后盡(jin)(jin)早進(jin)行(xing)(xing)提(ti)(ti)取，提(ti)(ti)取按相(xiang)關文(wen)獻進(jin)行(xing)(xing)，提(ti)(ti)取后應盡(jin)(jin)快進(jin)行(xing)(xing)實驗(yan)。若不(bu)能(neng)馬上進(jin)行(xing)(xing)試驗(yan)，可將標本放于-20℃保存，但(dan)應避免反復凍融

操(cao)作步驟(zou)

1. 根據(ju)(ju)待測樣品(pin)數量(liang)加上標(biao)準品(pin)的數量(liang)決(jue)定(ding)所需的板條數。每個標(biao)準品(pin)和(he)空白孔(kong)建議(yi)做復(fu)孔(kong)。每個樣品(pin)根據(ju)(ju)自(zi)己的數量(liang)來定(ding)，能使用復(fu)孔(kong)的盡量(liang)做復(fu)孔(kong)。
2. 加(jia)樣：分別(bie)設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作(zuo)相同）、標準品孔、待測樣品(pin)孔。然后在標準(zhun)品(pin)孔中加(jia)入標準(zhun)品(pin)50μl，在(zai)樣本(ben)反應孔中先加(jia)入待測(ce)樣品10μl再加(jia)入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為(wei)5倍），蓋上(shang)封板膜(mo)，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3. 配液：將20倍濃縮(suo)洗滌液用(yong)蒸餾(liu)水20倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封(feng)板膜，棄去(qu)液體(ti)(ti)，甩干(gan)，每孔加(jia)滿洗滌液，靜置30秒后(hou)棄去，如此重復4次，拍干。
5. 加生物(wu)素(su)標(biao)記(ji)的抗-IgG抗體：每孔加入生(sheng)物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘(zhong)
6. 洗滌(di)：操(cao)作(zuo)同4。
7. 加鏈霉親(qin)和素-HRP：每孔加入50μl的(de)鏈酶(mei)親和素(su)-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌：操作同(tong)4。
9. 顯色(se)：每孔先(xian)加入顯色(se)劑(ji)A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻(yun)，37℃避光(guang)顯色15分鐘.
10. 終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液50μl，終止反(fan)應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白(bai)空調零，450nm波(bo)長依(yi)序測(ce)量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終(zhong)止液(ye)后(hou)15分鐘以內進行。

計算

  以標(biao)準物的(de)濃度為橫坐標(biao)，OD值為縱坐標，在坐標紙(zhi)上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準(zhun)曲線查(cha)出(chu)相(xiang)應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準(zhun)物(wu)的濃度與(yu)OD值計算(suan)出(chu)標(biao)準曲線的直(zhi)線回(hui)歸方程(cheng)式，將(jiang)樣品的OD值待入方程式，計算出樣品(pin)濃度，再乘以稀釋倍(bei)數，即為樣品(pin)的實際濃度。

注意(yi)事項

1．試劑盒(he)從冷藏環境中(zhong)取(qu)出應在室溫平衡(heng)15-30分鐘后方可(ke)使用，酶標(biao)包被板開封(feng)后如未用完，板條應裝入密(mi)封(feng)袋中保存(cun)。

2．濃洗(xi)滌液(ye)可能會有結晶析出，稀釋(shi)時可在水浴中加溫助溶(rong)，洗(xi)滌時不影(ying)響結果。

3．各(ge)步加樣(yang)均(jun)應使(shi)用加樣(yang)器，并經常校對(dui)其準確(que)性(xing)，以避(bi)免試驗誤差。一次加樣(yang)時間控制在5分鐘(zhong)內(nei)，如標(biao)本數量多，推薦(jian)使用排槍加樣。

1. 如(ru)標本中待測物(wu)質含量過高（樣本OD值大(da)于標準品孔*孔的(de)OD值），請先將樣(yang)本稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計(ji)算時請zui后乘以稀釋(shi)倍數（×5×n）。
2. 封板膜只限一次性使用，以避(bi)免交叉污染。

6．本試劑(ji)不同(tong)批號(hao)組分(fen)不得混用。顯色(se)劑(ji)B請(qing)避光保(bao)存(cun)。

7．嚴(yan)格按照說明書的操作進行，試驗結果判定(ding)必須(xu)以(yi)酶標儀讀數為準(zhun).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物(wu)都應按傳染(ran)物(wu)處理(li)。

9. 如與英文說(shuo)明書有異，以(yi)英文說(shuo)明書為準。

檢(jian)測范圍：

0.9 IU/ml-60 IU/ml

靈敏(min)度：

0.225 IU/ml

規格：

96人份/盒

保存(cun)條件及有效期

1．試劑盒(he)保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(ge)月