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抗體(ti)保存得當與否,直接決定了抗體(ti)的活性和(he)使用效果(guo)!如果(guo)抗體(ti)保存得當,大(da)部分抗體(ti)活性都可以維持(chi)數月甚至數年。 本指南以(yi)abcam抗體保存方法為主(zhu),同樣也可以(yi)應用到其他絕大部分公司的抗體產(chan)品! 請謹記(ji)!無論何時請按(an)照說明(ming)書推薦的保(bao)存條件正確保(bao)存抗體! 1. 收到抗(kang)體后請務必在12000rpm離(li)心20-30s后再(zai)打開管蓋(gai)進行分裝和保存! Abcam的(de)(de)抗體使(shi)用非常(chang)特殊(shu)的(de)(de)儲(chu)存管,只有在(zai)(zai)(zai)12000rpm離心(xin)(xin)(xin)20-30s才能將附著在(zai)(zai)(zai)管壁(bi)或蓋內(nei)的(de)(de)抗體全部離心(xin)(xin)(xin)下來。即使(shi)是在(zai)(zai)(zai)10000rpm離心(xin)(xin)(xin)也會導(dao)致(zhi)離心(xin)(xin)(xin)不(bu)*,導(dao)致(zhi)出(chu)現(xian)抗體的(de)(de)量不(bu)足的(de)(de)現(xian)象! 2. 對(dui)于abcam大部(bu)分抗體,比(bi)較合(he)適(shi)的保存方式是分裝后保存在(zai) -20oC or -80oC 。 對絕(jue)大多數抗體(ti)來說,保(bao)存在-20oC是*足夠了。沒有任(ren)何(he)證據顯示保(bao)存在-80oC 會有更多的好處(chu)! 分(fen)裝可(ke)以zui大程度的(de)降(jiang)(jiang)低反(fan)復凍融對(dui)抗體活性的(de)損害(hai),同時也降(jiang)(jiang)低了由于多次從同一管(guan)中吸取抗體造成的(de)污染(ran)可(ke)能性。 分裝(zhuang)的(de)量以一次實驗用完(wan)為(wei)好,zui少不能(neng)少于10ul每份(fen)。因為(wei)分裝(zhuang)體積(ji)越(yue)小,抗體的(de)濃度越(yue)可能(neng)會(hui)受到蒸發以及管壁吸附的(de)影響(xiang) 復融(rong)后的分裝抗體如果一次用不(bu)完,將(jiang)剩余(yu)母液保存在4oC,避免再凍起(qi)來! 抗(kang)體工作液(ye)應該當天(tian)配制當天(tian)用完(wan),在4oC 盡量不要超過1天(tian)。 避免將抗體(ti)保(bao)存(cun)在(zai)自動除(chu)霜冰箱中(zhong)。盡(jin)量將抗體(ti)保(bao)存(cun)在(zai)冰箱里(li)層,而不是門上 3. 大部分(fen)抗(kang)體收到(dao)后4oC短(duan)暫(zan)保存1-2周對抗(kang)體活性是沒有影響的。 如(ru)果(guo)抗體(ti)很快(1-2周)會(hui)使用(yong),推薦在4oC保(bao)(bao)存(cun)(cun),這是為了避免(mian)反(fan)復凍融對抗體(ti)活性的(de)損(sun)害。如(ru)果(guo)要長期保(bao)(bao)存(cun)(cun)則是在-20oC or -80oC。zui關鍵(jian)的(de)一(yi)點是要根(gen)據說明書推薦的(de)方式(shi)來(lai)正確的(de)保(bao)(bao)存(cun)(cun)抗體(ti)! 但是,腹水形(xing)式的產品(pin)(pin)請在(zai)(zai)收到后立即凍起來!因(yin)為該類產品(pin)(pin)含有(you)大量的蛋白酶,長期在(zai)(zai)4oC保(bao)存會導(dao)致抗體的降解! 4. 大部分(fen)抗體(ti)的(de)運輸(shu)條件:一般的(de)運輸(shu)過(guo)程需要1-2周的(de)時間(jian),所(suo)以是在(zai)4oC的(de)條件下來完(wan)成的(de)。 4oC運輸(shu)(shu)(shu)zui主要(yao)(yao)的目(mu)的是(shi)為(wei)了避免反復凍(dong)融(rong)(rong)對抗體活(huo)性的損害(如果使用干(gan)(gan)冰運輸(shu)(shu)(shu),那么收到(dao)時抗體是(shi)凍(dong)起來(lai)的,為(wei)了分(fen)裝就(jiu)需(xu)要(yao)(yao)解凍(dong)。這就(jiu)多了一(yi)次(ci)凍(dong)融(rong)(rong)的過(guo)程)。所以運輸(shu)(shu)(shu)過(guo)程中避免干(gan)(gan)冰運輸(shu)(shu)(shu)! 特殊(shu)抗體的保存條件: 酶(mei)聯(lian)抗(kang)體:永(yong)遠(yuan)保存在4oC,避免凍起來。否則會導(dao)致酶(mei)活性的下降或者喪失 偶聯(lian)抗(kang)(kang)體(ti):所(suo)有偶聯(lian)抗(kang)(kang)體(ti)都是(shi)在(zai)棕色(se)管中或(huo)使用錫箔紙避(bi)光(guang)保(bao)存。尤其是(shi)熒光(guang)抗(kang)(kang)體(ti),對光(guang)極為敏感,因此(ci)在(zai)所(suo)有的實驗階段(duan)也是(shi)要避(bi)光(guang)操作的! IgG3的(de)同(tong)型對照:永遠保存在4oC,避免凍(dong)起來。因為如果出現凍(dong)融(rong)過程(cheng),該抗體非常容(rong)易(yi)形(xing)成多聚體
無論是保存(cun)還是運輸,避免反(fan)復(fu)凍(dong)融! 反復凍融會導致抗體變性,導致多聚體形成,從而降低抗體的(de)結合能(neng)力! 抗體保存其它相關(guan)信(xin)息(xi): 關于加入甘油保存: 有些人(ren)會(hui)加(jia)50%的(de)甘(gan)油到抗(kang)體(ti)中來避(bi)免反復凍融(rong),甘(gan)油在-20oC 會(hui)降低(di)冰點。這對(dui)很多抗(kang)體(ti)可(ke)能是(shi)可(ke)行(xing)的(de)。但是(shi)abcam僅對(dui)非(fei)常(chang)小的(de)一部分抗(kang)體(ti)檢測過(guo)其在這種條件下(xia)的(de)穩定(ding)性;而abcam只對(dui)按照推薦條件保(bao)存的(de)抗(kang)體(ti)提(ti)供(gong)質量保(bao)證(zheng)!加(jia)入(ru)甘(gan)油的(de)溶液(ye)不建議在-80oC保(bao)存,因為這已(yi)經超過(guo)了甘(gan)油的(de)冰點。如果您要加(jia)入(ru)甘(gan)油來保(bao)存抗(kang)體(ti)的(de)話,請謹(jin)慎(shen)注意無菌操作,避(bi)免污(wu)染(ran)! 關于蛋白(bai)保護劑: 蛋(dan)白在高濃度時(shi)更不(bu)容易(yi)降解(1 mg/ml 或(huo)者(zhe)更高),這(zhe)就是為什么在抗(kang)體(ti)(ti)中加入BSA之類作為穩定劑(ji)的原因(yin)了;另(ling)一方面(mian),加入的蛋(dan)白也可以減(jian)少抗(kang)體(ti)(ti)由于管壁吸(xi)附所造成的損失。但是如果抗(kang)體(ti)(ti)要用(yong)來標(biao)(biao)記的話,則(ze)不(bu)能加入蛋(dan)白穩定劑(ji),因(yin)為這(zhe)些穩定劑(ji)會和抗(kang)體(ti)(ti)一起競爭結合(he)標(biao)(biao)記物。 關于*(sodium azide)的使用: 為了防止微(wei)生物(wu)污染(ran),*經常被加入到抗(kang)體中(終(zhong)濃度0.02% (w/v))。Abcam的很多抗(kang)體已經含有了0.02%-0.05%的*,在說明書的“Storage buffer”中有標(biao)明的。 在下述情(qing)況中(zhong)不能(neng)使用*: 如果抗體(ti)用于(yu)染色(se)或(huo)處理活細胞,用于(yu)體(ti)內研究: *在抵抗(kang)微(wei)生物的(de)同時,對其它大(da)部(bu)分有機物也(ye)是有毒的(de),因為它阻斷了線粒體的(de)cytochrome electron transport system. 要偶聯帶有氨(an)基基團的抗體: *會干(gan)擾任何含有氨基基團(tuan)的偶聯,因此在進行偶聯之前,應將*去除(chu)。偶聯后的抗體可以(yi)加入*保存,但是濃度(du)只能(neng)是0.01%。對(dui)于需要偶聯的抗體,thimerosal (merthiolate)可以(yi)替(ti)代*作為保護(hu)劑! 注:*的去(qu)除(chu)方式: 可以通過(guo)凝膠電泳或過(guo)濾的方(fang)式去除(chu)!IgG的分子量(liang)是150kDa (IgM 是~ 600kDa); *的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的(de)濾膜即可將*從(cong)抗體中(zhong)去(qu)除(chu)。 |
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用相應的稀(xi)(xi)釋(shi)液稀(xi)(xi)釋(shi),里(li)面的保護(hu)蛋白(bai)和防腐劑會使保存(cun)效果好一些,另外不要凍融,不小心凍上問(wen)題也(ye)不大,用酶(mei)(mei)標稀(xi)(xi)釋(shi)液稀(xi)(xi)釋(shi)的酶(mei)(mei)或用小牛血(xue)清+防腐劑稀(xi)(xi)釋(shi)的抗(kang)血(xue)清4°保存(cun)半年(nian)沒有問(wen)題。
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