標簽抗體

簡介

標簽抗體，別名為抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區域或基團，是與抗體特異性結合的結構或序列。隨著生物技術的發展，科研人員可以通過DNA重組技術，構建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白，進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化，以達到研究的需求。

主要類別

Flag抗(kang)體-抗(kang)Flag

　　融(rong)合(he)標(biao)(biao)(biao)(biao)簽，如Flag、GST等(deng)標(biao)(biao)(biao)(biao)簽的(de)(de)使(shi)用可以(yi)簡化(hua)(hua)(hua)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)純(chun)化(hua)(hua)(hua)過(guo)(guo)程(cheng)、控制蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)固定(ding)(ding)的(de)(de)空間取向及方(fang)便檢測、使(shi)體內生物(wu)事件可視化(hua)(hua)(hua)、提(ti)高重組(zu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)產量、增(zeng)強重組(zu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)可溶性(xing)和穩定(ding)(ding)性(xing)等(deng)。常用的(de)(de)標(biao)(biao)(biao)(biao)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等(deng)。其中(zhong)Flag標(biao)(biao)(biao)(biao)簽系(xi)統(tong)利用一個(ge)短的(de)(de)親水性(xing)八氨(an)(an)基(ji)酸肽(tai)（DYKDDDDK）融(rong)合(he)到目標(biao)(biao)(biao)(biao)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。 　　Flag標(biao)(biao)(biao)(biao)簽可位于(yu)(yu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)C端(duan)或N端(duan)，該(gai)(gai)系(xi)統(tong)已(yi)廣泛應(ying)用于(yu)(yu)各種細胞類型，包括細菌(jun)、酵母(mu)和哺(bu)乳動物(wu)細胞等(deng)，相應(ying)的(de)(de)Flag也(ye)被(bei)廣泛應(ying)用。由于(yu)(yu)Flag標(biao)(biao)(biao)(biao)簽系(xi)統(tong)的(de)(de)純(chun)化(hua)(hua)(hua)條件是非(fei)變性(xing)的(de)(de)，因(yin)此可以(yi)純(chun)化(hua)(hua)(hua)所有有活(huo)性(xing)的(de)(de)融(rong)合(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。Flag標(biao)(biao)(biao)(biao)簽可以(yi)通(tong)過(guo)(guo)加入腸激(ji)酶處理去除(chu)，腸激(ji)酶專(zhuan)一識別該(gai)(gai)肽(tai)序(xu)列C末端(duan)的(de)(de)5個(ge)氨(an)(an)基(ji)酸殘基(ji)。 　　Flag抗體可以(yi)用于(yu)(yu)檢測和Flag標(biao)(biao)(biao)(biao)簽融(rong)合(he)表(biao)達(da)(da)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)表(biao)達(da)(da)、細胞內定(ding)(ding)位，以(yi)及純(chun)化(hua)(hua)(hua)、定(ding)(ding)性(xing)或定(ding)(ding)量檢測Flag融(rong)合(he)表(biao)達(da)(da)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)等(deng)。

His抗(kang)體-抗(kang)His

　　融合標簽根據其相對分子質量大小可以分為兩大類：大的蛋(dan)白質分子和小的多肽片段。融合標簽的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。 　　His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用于重組蛋白質的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His融合標簽與其他標簽相比有很多明顯優勢，是目前用于純化的融合標簽中使用的一種。利用 His標簽可以建立一個基于融合蛋白的檢測和純化系統。 　　His抗體可以用于檢測和His標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測His融合表達蛋白等。

GST抗(kang)體-抗(kang)GST

　　隨著越來(lai)越多的(de)(de)新(xin)(xin)基因的(de)(de)發現，基因融(rong)合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)體系以(yi)其在(zai)(zai)新(xin)(xin)發現蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)研(yan)究中(zhong)(zhong)的(de)(de)顯著優(you)勢已得(de)到(dao)廣(guang)(guang)泛(fan)應(ying)(ying)用(yong)。其中(zhong)(zhong)GST標(biao)簽體系具(ju)有蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)產(chan)率高、表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)產(chan)物純化(hua)方便，以(yi)及(ji)利于(yu)GST抗體制(zhi)備(bei)等特(te)點。GST融(rong)合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)在(zai)(zai)水溶(rong)液中(zhong)(zhong)可溶(rong)，可從細菌裂(lie)解液中(zhong)(zhong)提取，在(zai)(zai)不變性的(de)(de)條件(jian)下通(tong)過親和(he)層(ceng)析得(de)到(dao)。GST融(rong)合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)可被位點特(te)異(yi)性蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)裂(lie)解，從而除去GST蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。融(rong)合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)又(you)是(shi)一(yi)個(ge)非常(chang)好的(de)(de)強免(mian)疫原，因此(ci)，很(hen)容易(yi)制(zhi)備(bei)抗新(xin)(xin)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)抗體。正是(shi)由(you)于(yu)以(yi)上的(de)(de)優(you)點，商品化(hua)的(de)(de)GST融(rong)合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)體系以(yi)及(ji)GST系統(tong)(tong)至今仍被廣(guang)(guang)泛(fan)應(ying)(ying)用(yong)。 　　近年來(lai)在(zai)(zai)原核表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)體系中(zhong)(zhong)，谷胱甘肽S轉移酶(mei)GST表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)純化(hua)系統(tong)(tong)的(de)(de)應(ying)(ying)用(yong)更為普遍(bian)。用(yong)GST融(rong)合(he)(he)表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)系統(tong)(tong)表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)外源基因時，對融(rong)合(he)(he)表(biao)(biao)(biao)達(da)(da)產(chan)物的(de)(de)檢測和(he)純化(hua)非常(chang)重(zhong)要，這里面就包(bao)括了GST的(de)(de)應(ying)(ying)用(yong)。

GFP抗體-抗GFP

　　常用(yong)的(de)(de)標(biao)簽包括GFP、HA、Flag、His、GST等(deng)(deng)。其(qi)中綠(lv)色螢光蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)（Green Fluorescent Protein），簡(jian)稱GFP，這(zhe)種(zhong)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質zui早是由下(xia)村脩等(deng)(deng)人在(zai)1962年在(zai)一種(zhong)學名Aequorea victoria的(de)(de)水(shui)母(mu)中發(fa)現。其(qi)基因所產生的(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質，在(zai)藍色波長范圍的(de)(de)光線(xian)激發(fa)下(xia)，會發(fa)出綠(lv)色螢光。 　　GFP或(huo)(huo)其(qi)突(tu)(tu)變(bian)體(ti)EGFP等(deng)(deng)被廣(guang)泛用(yong)于(yu)基因表達(da)(da)效率的(de)(de)檢測(ce)(ce)，以及和目的(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)融合(he)表達(da)(da)用(yong)于(yu)檢測(ce)(ce)目的(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)表達(da)(da)和分布。一般來說，GFP抗體(ti)不僅(jin)可(ke)以檢測(ce)(ce)GFP或(huo)(huo)其(qi)適(shi)當(dang)的(de)(de)突(tu)(tu)變(bian)體(ti)，也(ye)可(ke)以檢測(ce)(ce)和GFP或(huo)(huo)其(qi)適(shi)當(dang)的(de)(de)突(tu)(tu)變(bian)體(ti)融合(he)表達(da)(da)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)表達(da)(da)、細(xi)胞(bao)內(nei)定位(wei)，以及純化、定性或(huo)(huo)定量檢測(ce)(ce)GFP融合(he)表達(da)(da)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)等(deng)(deng)。 　　GFP標(biao)簽可(ke)位(wei)于(yu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質的(de)(de)C端或(huo)(huo)N端，該系統已廣(guang)泛應(ying)(ying)用(yong)于(yu)各種(zhong)細(xi)胞(bao)類型，包括細(xi)菌(jun)、酵母(mu)和哺乳(ru)動物細(xi)胞(bao)等(deng)(deng)，相應(ying)(ying)的(de)(de)GFP也(ye)被廣(guang)泛應(ying)(ying)用(yong)。

Myc抗體(ti)-抗Myc

　　隨著(zhu)蛋白(bai)(bai)質(zhi)組學(xue)(xue)的迅猛發展，重(zhong)(zhong)組蛋白(bai)(bai)質(zhi)的使用(yong)(yong)(yong)在(zai)近(jin)年來大大增(zeng)加。重(zhong)(zhong)組雜(za)合體含有一(yi)個(ge)親和(he)(he)標簽(qian)如GST、Myc、His等，可用(yong)(yong)(yong)于輔助目標蛋白(bai)(bai)的純(chun)化(hua)，這(zhe)已經被(bei)廣泛使用(yong)(yong)(yong)。利(li)用(yong)(yong)(yong)融合蛋白(bai)(bai)有助于重(zhong)(zhong)組蛋白(bai)(bai)純(chun)化(hua)和(he)(he)檢(jian)測的這(zhe)個(ge)有點被(bei)廣泛認可。在(zai)1985年開(kai)發出鼠抗(kang)c-myc并被(bei)作為免疫(yi)化(hua)學(xue)(xue)試劑用(yong)(yong)(yong)于細(xi)胞(bao)(bao)(bao)生物學(xue)(xue)和(he)(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)工(gong)程領域中(zhong)(zhong)。Myc標簽(qian)（序列為：EQKLISEEDL）已成功應用(yong)(yong)(yong)于WB雜(za)交技(ji)術、免疫(yi)沉淀IP和(he)(he)流式細(xi)胞(bao)(bao)(bao)術中(zhong)(zhong)。因(yin)此可用(yong)(yong)(yong)于檢(jian)測重(zhong)(zhong)組蛋白(bai)(bai)在(zai)細(xi)菌、酵母(mu)、昆蟲細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)(he)哺乳細(xi)胞(bao)(bao)(bao)中(zhong)(zhong)的表達情況。 Myc標簽(qian)可放在(zai)C端(duan)或N端(duan)，但(dan)Myc重(zhong)(zhong)組蛋白(bai)(bai)的低pH洗脫(tuo)條件往往會降低蛋白(bai)(bai)質(zhi)的活力，因(yin)此Myc標簽(qian)系統廣泛應用(yong)(yong)(yong)于檢(jian)測但(dan)很少用(yong)(yong)(yong)于純(chun)化(hua)。

HA抗(kang)體-抗(kang)HA

　　融合(he)標(biao)(biao)(biao)簽(qian)，如HA、His等標(biao)(biao)(biao)簽(qian)的(de)使用(yong)(yong)可(ke)以簡(jian)化蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)的(de)純化過(guo)程、控制蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)固定(ding)的(de)空間取(qu)向及(ji)方便檢測、使體內(nei)生物事件可(ke)視化、提高重(zhong)組蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)的(de)產量、增強重(zhong)組蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)的(de)可(ke)溶性(xing)和穩定(ding)性(xing)等。常用(yong)(yong)的(de)標(biao)(biao)(biao)簽(qian)包(bao)括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標(biao)(biao)(biao)簽(qian)系(xi)統利(li)用(yong)(yong)一個(ge)HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合(he)到(dao)目(mu)標(biao)(biao)(biao)蛋(dan)(dan)白(bai)。 　　HA標(biao)(biao)(biao)簽(qian)可(ke)位于蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)的(de)C端(duan)或N端(duan)，該系(xi)統已廣泛應(ying)用(yong)(yong)于多(duo)種(zhong)細胞(bao)類型(xing)，相應(ying)的(de)HA也被廣泛應(ying)用(yong)(yong)。HA能特異識別C末端(duan)或N末端(duan)帶有HA標(biao)(biao)(biao)簽(qian)(HA-tagged)的(de)融合(he)蛋(dan)(dan)白(bai)。