小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒說明書

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠CTX-I抗體包被于酶標板上，實驗時標本或標準品中的CTX-I會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠CTX-I抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗小鼠CTX-I抗體與結合在包被抗體上的小鼠CTX-I結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現藍色，加終止液后變黃。用酶標儀在450nm波長處測OD值，CTX-I濃度與OD₄₅₀值之間呈正比，通過繪制標準曲線求出標本中CTX-I的濃度。

標本收集:

1. 血清：全血標(biao)本于(yu)室溫(wen)放置2小(xiao)時(shi)或4℃置夜后于(yu)1000×g離(li)心(xin)20分鐘(zhong)，取上清即可檢測，收(shou)集(ji)血液(ye)的試(shi)管應(ying)為一次性的無(wu)熱原(yuan)，無(wu)內毒素試(shi)管。

2. 血(xue)漿：抗凝劑推薦使用EDTA.Na2，標本(ben)采集后30分(fen)鐘(zhong)內(nei)于1000×g離心15分(fen)鐘(zhong)，取上清即(ji)可檢測。避免使用溶血(xue)，高血(xue)脂(zhi)標本(ben)。

3. 組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)(jiang)：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，以(yi)去除殘留(liu)血(xue)液（勻漿(jiang)(jiang)中(zhong)裂解(jie)的紅細胞會影響測(ce)量結果），稱重(zhong)后(hou)將(jiang)(jiang)組(zu)織(zhi)剪碎(sui)。將(jiang)(jiang)剪碎(sui)的組(zu)織(zhi)與(yu)對應(ying)體積的PBS（一(yi)般按1:9的重(zhong)量體積比，比如1g的組(zu)織(zhi)樣本對應(ying)9mL的PBS，具(ju)體體積可(ke)根據實驗需要適當調整，并做好記(ji)錄。推(tui)薦(jian)在(zai)PBS中(zhong)加(jia)入(ru)蛋白酶抑制劑）加(jia)入(ru)玻(bo)璃勻漿(jiang)(jiang)器中(zhong)，于冰上充分(fen)研磨。為了進一(yi)步裂解(jie)組(zu)織(zhi)細胞，可(ke)以(yi)對勻漿(jiang)(jiang)液進行超聲(sheng)破(po)碎(sui)，或反復凍融(rong)。zui后(hou)將(jiang)(jiang)勻漿(jiang)(jiang)液于5000×g 離(li)心5~10分(fen)鐘，取上清檢測(ce)。

4. 細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養上(shang)清：取細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養上(shang)清于(yu)1000×g離心20分(fen)鐘，除去雜質(zhi)及細(xi)(xi)胞(bao)碎片。取上(shang)清檢測。

5. 其(qi)它生(sheng)物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

6. 標本應清(qing)澈(che)透明，懸浮物(wu)應離心(xin)去除。

7. 標(biao)本收集(ji)后若不及(ji)時檢(jian)測，請按一次(ci)使用量分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)于-20℃/-80℃冰箱內(nei)，避免反(fan)復(fu)凍(dong)融，1-6月內(nei)檢(jian)測,4℃保存(cun)的應在1周內(nei)進(jin)行檢(jian)測。

8. 如果您的樣本(ben)中檢測物濃度高于標(biao)準品zui高值，請根據(ju)實際情況，做適當(dang)倍(bei)數(shu)稀釋(shi)(建議(yi)先做預實驗，以確定(ding)稀釋(shi)倍(bei)數(shu))。

小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒說明書

注意事項：

1. 保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的污染，否則可能會出現錯誤的結果。

1. 酶(mei)(mei)標(biao)板(ban)：剛開啟的酶(mei)(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)中(zhong)可能會有(you)少許水樣物質，此(ci)為正常現象，不(bu)會對實驗結果造成任(ren)何影響(xiang)。
2. 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。每次的加樣時間控制在10分鐘內。推薦設置復孔。
3. 溫育：為防止樣品蒸發，實驗時必須(xu)給酶(mei)標板覆膜；洗(xi)板后應盡快進行下步操(cao)作，避免酶(mei)標板處(chu)于干燥狀態；嚴格遵守給定的(de)溫育時間(jian)和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中(zhong)反應孔中(zhong)殘留的洗滌液應在吸(xi)水紙上拍干，勿將濾紙直接(jie)放入反應孔中(zhong)吸(xi)水。在讀數前要注意清除(chu)底部殘留的液體和(he)手指印(yin)，以(yi)免(mian)影(ying)響酶(mei)標(biao)儀讀數。
5. 試劑配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate體(ti)(ti)積較小(xiao)，運輸過程(cheng)會使(shi)液(ye)體(ti)(ti)沾(zhan)到(dao)管壁或瓶蓋，因此(ci)使(shi)用(yong)前1000轉/分離心(xin)1min，以使附(fu)著管(guan)壁或瓶蓋的液體沉積(ji)到管(guan)底。取用前(qian)，請(qing)用移液器小(xiao)心吹打4-5次使溶液混(hun)勻。標準(zhun)品(pin)(pin)、生物素(su)化抗體工作液、酶結合物工作液請根據(ju)所需用量配制，并使用相應的稀(xi)釋液配制，不能(neng)混(hun)淆(xiao)。請配制標準(zhun)品(pin)(pin)及工作液，盡量不要微量配制（如吸(xi)取Concentrated Biotinylated Detection Ab時(shi)，一(yi)次不要(yao)小于10μL），以避免由(you)于(yu)不準確稀釋而造成濃(nong)度誤差；請勿重復使用已(yi)稀釋過的(de)標準品、生物素化抗體工(gong)作液、酶結合物工作液。若需(xu)要分(fen)次使用標準品應按(an)照每一次用量分(fen)裝，將(jiang)其放在-20～-80℃貯存。避免反(fan)復凍融。
6. 顯(xian)色(se)時(shi)間的(de)控制：加入底物后請(qing)定時(shi)觀察反應(ying)孔(kong)的(de)顏色(se)變(bian)化（比如每(mei)隔5分鐘），如梯度已(yi)很(hen)明(ming)顯，請(qing)提前(qian)加入(ru)終止液終止反應，避免顏色過(guo)深影響(xiang)酶(mei)標儀讀數。
7. 底(di)物：底(di)物請避(bi)光保存(cun)(cun)，在(zai)儲存(cun)(cun)和溫育(yu)時避(bi)免(mian)強光直(zhi)接照射(she)。
8. 混(hun)勻(yun)：充分(fen)輕微(wei)混(hun)勻(yun)對反應(ying)結果尤為重(zhong)要，使用微(wei)量振蕩器(qi)(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在(zai)反應前(qian)手工輕輕敲擊酶標(biao)板框混勻。
9. 安(an)全(quan)：試驗(yan)(yan)中請穿著實(shi)驗(yan)(yan)服并帶(dai)乳膠手套做好防護(hu)工作。特別是檢測血(xue)液(ye)或者其他體(ti)液(ye)標本(ben)時，請按(an)國家生物試驗(yan)(yan)室(shi)安(an)全(quan)防護(hu)條例執(zhi)行。
10. 不同批號(hao)的(de)試劑盒組份不能混用（洗滌液(ye)和反(fan)應終止(zhi)液(ye)除外）
11. 試驗(yan)中所(suo)用(yong)的(de)EP管(guan)和吸頭均為(wei)一次性(xing)使用，嚴(yan)禁混用，否(fou)則(ze)將影響試驗結果！

小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒說明書

更多試劑盒請點擊：