人C-反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒(he)使(shi)用(yong)說明書

 本試劑(ji)盒僅供研究(jiu)使(shi)用。   

藥品(pin)名稱：

通用名：人C-反(fan)應蛋(dan)白(CRP)酶(mei)聯免疫(yi)分(fen)析(xi)試(shi)劑(ji)盒

使用目的：

本試劑(ji)盒用于測(ce)定人血(xue)清，血(xue)漿及相關液體樣本中C-反應蛋(dan)白(bai)(CRP)含量(liang)。

實驗原理

本試(shi)劑盒應(ying)用間接法測定(ding)標(biao)本中人C-反(fan)應(ying)蛋白(CRP)水平(ping)。用純(chun)化(hua)的(de)(de)人C-反(fan)應(ying)蛋白(CRP)抗體(ti)(ti)(ti)包(bao)被微孔板，制成固相抗體(ti)(ti)(ti)，往包(bao)被單抗的(de)(de)微孔中依次加入(ru)已知(zhi)濃度的(de)(de)C-反(fan)應(ying)蛋白(CRP)標(biao)準品和未(wei)知(zhi)濃度的(de)(de)C-反(fan)應(ying)蛋白(CRP)待檢樣品，溫育(yu)后，加入(ru)生物素標(biao)記的(de)(de)抗IgG抗體(ti)(ti)(ti)，再與(yu)鏈霉親和素-HRP結合(he)，形成免疫復合(he)物，經過(guo)*洗滌后加底(di)物TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶的(de)催化(hua)下(xia)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)成藍色(se)，并在酸的(de)作用(yong)下(xia)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)成zui終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)樣品中(zhong)的(de)C-反(fan)應蛋白(bai)(CRP)呈正相關(guan)。用(yong)酶標儀在450nm波長下(xia)測定吸光度（OD值），通過(guo)標準曲線(xian)計算樣品中(zhong)人C-反(fan)應蛋白(bai)(CRP)濃度。

試劑盒組成

標(biao)本(ben)要(yao)求

1．不能檢(jian)測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本(ben)采集后盡早進(jin)行提(ti)取，提(ti)取按(an)相關(guan)文獻(xian)進(jin)行，提(ti)取后應(ying)(ying)盡快進(jin)行實(shi)驗。若不能(neng)馬上進(jin)行試驗，可將標本(ben)放于-20℃保存，但(dan)應(ying)(ying)避免反復凍融(rong)

操作步驟

1. 根據待(dai)測樣品(pin)數量(liang)(liang)加上標(biao)準品(pin)的(de)(de)(de)(de)數量(liang)(liang)決定(ding)所(suo)需的(de)(de)(de)(de)板條數。每(mei)個(ge)(ge)標(biao)準品(pin)和空白(bai)孔建議做復(fu)孔。每(mei)個(ge)(ge)樣品(pin)根據自己的(de)(de)(de)(de)數量(liang)(liang)來(lai)定(ding)，能使用(yong)復(fu)孔的(de)(de)(de)(de)盡量(liang)(liang)做復(fu)孔。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應(ying)孔中先加入待測樣品(pin)10μl再加(jia)入樣品稀釋(shi)液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上(shang)封(feng)板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫(wen)育45分鐘。
3. 配液(ye)：將20倍濃縮洗滌液(ye)用(yong)蒸餾水20倍稀釋(shi)后備用(yong)
4. 洗滌：小(xiao)心揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體，甩干，每(mei)孔加滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置30秒后(hou)棄去(qu)，如此重復4次，拍(pai)干。
5. 加生物素標記的抗(kang)-IgG抗(kang)體(ti)：每孔加入(ru)生物素標記的抗(kang)-IgG抗(kang)體(ti)50μl。37℃溫育30分鐘
6. 洗滌：操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8. 洗(xi)滌：操作同(tong)4。
9. 顯(xian)色(se)：每孔先加入顯(xian)色(se)劑A 50μl，再加入顯(xian)色(se)劑B 50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻，37℃避光顯(xian)色(se)15分鐘.
10. 終(zhong)止：每孔加(jia)終(zhong)止液(ye)50μl，終(zhong)止反(fan)應(ying)（此時藍色立轉黃色）。
11. 測(ce)定(ding)：以(yi)空白空調零，450nm波(bo)長依(yi)序測(ce)量各孔(kong)的(de)吸光度(du)（OD值）。 測(ce)定(ding)應在加(jia)終(zhong)止液后15分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行。

計算

  以(yi)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)物的(de)濃(nong)度為橫坐標(biao)，OD值(zhi)(zhi)為縱坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪出標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)曲線(xian)，根據樣品(pin)的(de)OD值(zhi)(zhi)由標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)曲線(xian)查出相(xiang)應的(de)濃(nong)度；再乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數(shu)(shu)；或(huo)用標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)物的(de)濃(nong)度與OD值(zhi)(zhi)計(ji)算出標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)曲線(xian)的(de)直線(xian)回歸(gui)方程式，將樣品(pin)的(de)OD值(zhi)(zhi)待入方程式，計(ji)算出樣品(pin)濃(nong)度，再乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數(shu)(shu)，即為樣品(pin)的(de)實際(ji)濃(nong)度。

注意事項

1．試(shi)劑盒從冷藏環境中(zhong)取出應在室溫平衡15-30分(fen)鐘后方可使用，酶標包被板(ban)開封(feng)后如未用完，板(ban)條應裝入密封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存(cun)。

2．濃洗(xi)(xi)滌(di)液可(ke)能會有結晶析出，稀釋時可(ke)在水浴中(zhong)加溫(wen)助溶(rong)，洗(xi)(xi)滌(di)時不影響(xiang)結果(guo)。

3．各步(bu)加樣均應使(shi)用加樣器(qi)，并經常校對(dui)其(qi)準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間(jian)控制(zhi)在5分鐘內，如(ru)標本數(shu)量多(duo)，推薦(jian)使(shi)用排槍加樣。

1. 如標本(ben)中待測(ce)物質含量(liang)過(guo)高（樣本(ben)OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本(ben)稀釋一(yi)定倍數（n倍）后再測(ce)定，計算時(shi)請zui后乘以稀釋倍數（×5×n）。
2. 封板膜只限(xian)一次(ci)性使用，以避免交叉污染。

6．本試劑不同(tong)批號組分(fen)不得混用。顯色劑B請避光(guang)保存。

7．嚴格按照說(shuo)明書的操作(zuo)進行，試驗結(jie)果判定必(bi)須(xu)以酶(mei)標儀(yi)讀數為準(zhun).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄(qi)物(wu)都應按傳染物(wu)處理(li)。

9. 如與(yu)英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測范圍：

0.625 ng/ml-40 ng/ml

靈敏度：

0.156 ng/ml

規格：

96人份/盒(he)

保存條件及有(you)效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有(you)效期：6個月