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兔白細胞介素1(IL-1)定量檢測ELISA試劑盒說明書

發布時(shi)間:2015-01-05瀏覽:1112次

兔白細胞介素1(IL-1)定量檢測ELISA試劑盒說明書

                                                     

【試劑盒名稱】

兔白細胞(bao)介素1IL-1)定量檢測試劑盒(ELISA

【試劑盒用途

定量檢測兔血(xue)清、血(xue)漿及相關液體(ti)(ti)樣本中(zhong)白(bai)細胞介素1IL-1的含量(liang)。

【檢測原理

本(ben)試劑盒采用雙(shuang)抗體(ti)兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待(dai)測樣本(ben)加入到(dao)預(yu)先包被(bei)兔白細胞介素1IL-1抗(kang)體透明酶(mei)標包被板中(zhong),溫育足(zu)夠時(shi)間后,洗滌(di)除去未結合(he)的成分,再(zai)加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗(xi)滌(di)除去(qu)未結合的成分。依次加入底物AB,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(mei)(HRP)催化下轉化為藍色(se)產(chan)物(wu),在酸的作用(yong)下變成黃色,顏色(se)的深淺與樣品中兔白細胞介素1IL-1濃(nong)度呈正相(xiang)關,450nm波長下測定(ding)OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本(ben)中兔白細胞介(jie)素1IL-1含(han)量(liang)。

【試劑盒組成

1

酶標包(bao)被板(ban)

12×8

7

顯色劑(ji)B液(ye)

6mL

2

標(biao)準品

0.3mL*6

8

終止液

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

說(shuo)明(ming)書(shu)

1份(fen)

4

生物素

1mL

10

封板膜

2張(zhang)

5

酶標試(shi)劑

10mL

11

密封(feng)袋

1

6

顯色(se)劑(ji)A

6mL




備注:標準品(S0S5)濃度依次為:3201608040200ng/L.

需要而未提供的試(shi)劑和(he)器(qi)材

137恒溫箱(xiang)

  1. 標準規格酶標儀
  2. 精密移液器及(ji)一次性吸頭(tou)
  3. 蒸餾水
  4. 一次性試(shi)管(guan)
  5. 吸水紙

【操作(zuo)步驟】

1、準備:從冰箱(xiang)取出試劑盒(he),室溫復溫平衡(heng)30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌(di)液稀釋成(cheng)原(yuan)倍的洗滌(di)液。

3、設置加(jia)樣孔:取(qu)足(zu)夠數(shu)量的酶標包(bao)被(bei)板,固(gu)定于框架上,分別設置(zhi)標準品(pin)孔、待測(ce)樣本孔和空白對(dui)照孔,記錄各孔位置(zhi)。

4、加標(biao)準品(pin)(pin):標(biao)準品(pin)(pin)孔(kong)中加入標(biao)準品(pin)(pin)50μL;空白(bai)對照(zhao)孔不加(jia)。

5、加待測樣(yang)本:待測樣(yang)本孔(kong)中(zhong)先加入生物素10μL,再加(jia)待測(ce)樣(yang)本50μL;空白(bai)對(dui)照孔(kong)不加。

6、加酶標工作液:每(mei)孔加入酶標工作液100μL;空白(bai)對(dui)照孔不加(jia)。

7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫(wen)箱溫(wen)育60min

8、洗(xi)板:棄去(qu)液體(ti),吸水紙上拍(pai)干(gan),每孔(kong)加滿洗(xi)滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙(zhi)上拍(pai)干(gan),如此重復洗板4次(也可用洗板機(ji)按說明書操作洗板)。

9、顯色:每孔先加入顯色劑(ji)A 50μL,再加入顯色劑B 50μL37℃避光顯色15min。

10、終止:取(qu)出酶(mei)標板,每(mei)孔加終止液50μL,終止(zhi)反應(顏色(se)(se)由藍色(se)(se)立轉黃(huang)色(se)(se))。

11、測定:以空白孔調零,在(zai)終止后15分鐘(zhong)內,用450nm波長測量各孔(kong)的(de)吸(xi)光值(OD值)。

12、計算:根據(ju)標準品的(de)(de)(de)濃(nong)(nong)(nong)度及對應的(de)(de)(de)OD值(zhi),計算(suan)出標準曲線的(de)(de)(de)直(zhi)線回歸方程,再根據(ju)樣本的(de)(de)(de)OD值(zhi),在回歸方程上(shang)計算(suan)出對應的(de)(de)(de)樣品濃(nong)(nong)(nong)度,也可(ke)以使用各種應用軟件來計算(suan)。zui終(zhong)濃(nong)(nong)(nong)度為實際測(ce)定濃(nong)(nong)(nong)度乘以稀釋(shi)倍數(shu)。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標(biao)本采(cai)集后盡(jin)早(zao)進行(xing)(xing)提(ti)取,提(ti)取按(an)相關文獻進行(xing)(xing),提(ti)取后應(ying)盡(jin)快進行(xing)(xing)實(shi)驗(yan)。若不(bu)能立即試驗(yan),可將標(biao)本放(fang)于(yu)-20℃保存,但應避免(mian)反復凍融。

3、樣本(ben)應充分離心,不得有溶血及顆粒。

【注意事(shi)項】

1、實驗嚴格按(an)照說明(ming)書的(de)操作進行,實驗結果判定必(bi)須以酶標(biao)儀讀數為準。

2酶標包被板開封后如未用完,應(ying)立即裝入密(mi)封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有(you)的標準品(pin)、樣本和空(kong)白對照都做雙份(fen)檢測(ce),取平均值(zhi),以減小(xiao)實驗(yan)誤差。

4、若(ruo)顯色過(guo)淺,可適當延長底物溫育時間(jian)。

5、為(wei)避免(mian)交叉污染,標準品、樣本和空白對照(zhao)每(mei)加一個就要更換(huan)一次(ci)吸頭;酶標工作液(ye)、樣本稀釋液(ye)和底物等(deng)公共組分(fen),要懸臂加樣,不(bu)得(de)碰到(dao)微孔;不得(de)重(zhong)復使用封(feng)板膜

6、試劑(ji)盒保(bao)質(zhi)期內(nei)使用(yong),不同批號的試劑(ji)不得混用(yong)。

7、底物B對光(guang)敏感,避免(mian)長時間暴露于(yu)光(guang)下(xia)。

檢測(ce)范圍

10ng/L - 320ng/L

【規格】

96T/盒(he)

【貯藏】

2-8℃,避光防潮保存(cun)。

【有效(xiao)期(qi)】

6個月

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