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兔白細胞介素1(IL-1)定量檢測ELISA試劑盒說明書
【試劑盒名稱】
兔白細胞(bao)介素1(IL-1)定量檢測試劑盒(ELISA)
【試劑盒用途】
定量檢測兔血(xue)清、血(xue)漿及相關液體(ti)(ti)樣本中(zhong)白(bai)細胞介素1(IL-1)的含量(liang)。
【檢測原理】
本(ben)試劑盒采用雙(shuang)抗體(ti)兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待(dai)測樣本(ben)加入到(dao)預(yu)先包被(bei)兔白細胞介素1(IL-1)抗(kang)體透明酶(mei)標包被板中(zhong),溫育足(zu)夠時(shi)間后,洗滌(di)除去未結合(he)的成分,再(zai)加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗(xi)滌(di)除去(qu)未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(mei)(HRP)催化下轉化為藍色(se)產(chan)物(wu),在酸的作用(yong)下變成黃色,顏色(se)的深淺與樣品中兔白細胞介素1(IL-1)濃(nong)度呈正相(xiang)關,450nm波長下測定(ding)OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本(ben)中兔白細胞介(jie)素1(IL-1)含(han)量(liang)。
【試劑盒組成】
1 | 酶標包(bao)被板(ban) | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑(ji)B液(ye) | 6mL |
2 | 標(biao)準品 | 0.3mL*6管 | 8 | 終止液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 說(shuo)明(ming)書(shu) | 1份(fen) |
4 | 生物素 | 1mL | 10 | 封板膜 | 2張(zhang) |
5 | 酶標試(shi)劑 | 10mL | 11 | 密封(feng)袋 | 1個 |
6 | 顯色(se)劑(ji)A液 | 6mL |
備注:標準品(S0→S5)濃度依次為:320、160、80、40、20、0ng/L.
【需要而未提供的試(shi)劑和(he)器(qi)材】
1、37℃恒溫箱(xiang)
【操作(zuo)步驟】
1、準備:從冰箱(xiang)取出試劑盒(he),室溫復溫平衡(heng)30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌(di)液稀釋成(cheng)原(yuan)倍的洗滌(di)液。
3、設置加(jia)樣孔:取(qu)足(zu)夠數(shu)量的酶標包(bao)被(bei)板,固(gu)定于框架上,分別設置(zhi)標準品(pin)孔、待測(ce)樣本孔和空白對(dui)照孔,記錄各孔位置(zhi)。
4、加標(biao)準品(pin)(pin):標(biao)準品(pin)(pin)孔(kong)中加入標(biao)準品(pin)(pin)50μL;空白(bai)對照(zhao)孔不加(jia)。
5、加待測樣(yang)本:待測樣(yang)本孔(kong)中(zhong)先加入生物素10μL,再加(jia)待測(ce)樣(yang)本50μL;空白(bai)對(dui)照孔(kong)不加。
6、加酶標工作液:每(mei)孔加入酶標工作液100μL;空白(bai)對(dui)照孔不加(jia)。
7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫(wen)箱溫(wen)育60min。
8、洗(xi)板:棄去(qu)液體(ti),吸水紙上拍(pai)干(gan),每孔(kong)加滿洗(xi)滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙(zhi)上拍(pai)干(gan),如此重復洗板4次(也可用洗板機(ji)按說明書操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑(ji)A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。
10、終止:取(qu)出酶(mei)標板,每(mei)孔加終止液50μL,終止(zhi)反應(顏色(se)(se)由藍色(se)(se)立轉黃(huang)色(se)(se))。
11、測定:以空白孔調零,在(zai)終止后15分鐘(zhong)內,用450nm波長測量各孔(kong)的(de)吸(xi)光值(OD值)。
12、計算:根據(ju)標準品的(de)(de)(de)濃(nong)(nong)(nong)度及對應的(de)(de)(de)OD值(zhi),計算(suan)出標準曲線的(de)(de)(de)直(zhi)線回歸方程,再根據(ju)樣本的(de)(de)(de)OD值(zhi),在回歸方程上(shang)計算(suan)出對應的(de)(de)(de)樣品濃(nong)(nong)(nong)度,也可(ke)以使用各種應用軟件來計算(suan)。zui終(zhong)濃(nong)(nong)(nong)度為實際測(ce)定濃(nong)(nong)(nong)度乘以稀釋(shi)倍數(shu)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標(biao)本采(cai)集后盡(jin)早(zao)進行(xing)(xing)提(ti)取,提(ti)取按(an)相關文獻進行(xing)(xing),提(ti)取后應(ying)盡(jin)快進行(xing)(xing)實(shi)驗(yan)。若不(bu)能立即試驗(yan),可將標(biao)本放(fang)于(yu)-20℃保存,但應避免(mian)反復凍融。
3、樣本(ben)應充分離心,不得有溶血及顆粒。
【注意事(shi)項】
1、實驗嚴格按(an)照說明(ming)書的(de)操作進行,實驗結果判定必(bi)須以酶標(biao)儀讀數為準。
2、酶標包被板開封后如未用完,應(ying)立即裝入密(mi)封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有(you)的標準品(pin)、樣本和空(kong)白對照都做雙份(fen)檢測(ce),取平均值(zhi),以減小(xiao)實驗(yan)誤差。
4、若(ruo)顯色過(guo)淺,可適當延長底物溫育時間(jian)。
5、為(wei)避免(mian)交叉污染,標準品、樣本和空白對照(zhao)每(mei)加一個就要更換(huan)一次(ci)吸頭;酶標工作液(ye)、樣本稀釋液(ye)和底物等(deng)公共組分(fen),要懸臂加樣,不(bu)得(de)碰到(dao)微孔;不得(de)重(zhong)復使用封(feng)板膜。
6、試劑(ji)盒保(bao)質(zhi)期內(nei)使用(yong),不同批號的試劑(ji)不得混用(yong)。
7、底物B對光(guang)敏感,避免(mian)長時間暴露于(yu)光(guang)下(xia)。
【檢測(ce)范圍】
10ng/L - 320ng/L
【規格】
96T/盒(he)
【貯藏】
2-8℃,避光防潮保存(cun)。
【有效(xiao)期(qi)】
6個月