葡聚糖凝膠柱(zhu)的使用方法：

(1) 預(yu)處理
稱取(qu)Sephadex G-25（50－100目）約5g，加入蒸餾水100ml，置室溫下3h進(jin)行溶(rong)脹。
(2) 裝柱
凝(ning)膠層析柱的(de)(de)直徑與柱長之比一般為1:15。柱的(de)(de)底部用(yong)裝(zhuang)有(you)細(xi)玻(bo)璃管的(de)(de)橡皮(pi)塞(sai)塞(sai)緊，用(yong)洗凈的(de)(de)玻(bo)璃絲（約200目尼龍布）墊底或購買類似規格的(de)(de)商品柱。然(ran)后(hou)將柱垂直安裝(zhuang)好，先加入1/3柱體積蒸餾(liu)水(shui)，接著(zhu)將溶脹好的(de)(de)凝(ning)膠邊攪勻(yun)邊連(lian)續裝(zhuang)入，使它(ta)們在(zai)柱內自然(ran)沉(chen)降。同(tong)時大(da)開下(xia)口慢速(su)流出(chu)蒸餾(liu)水(shui)。裝(zhuang)柱后(hou)的(de)(de)凝(ning)膠必(bi)須(xu)均勻(yun)，不(bu)能有(you)氣(qi)泡或明(ming)顯條紋。否則，必(bi)須(xu)到出(chu)重(zhong)裝(zhuang)，裝(zhuang)好后(hou)，用(yong)蒸餾(liu)水(shui)平(ping)衡2－3h即可加樣品分離。

(3) 加(jia)樣

加(jia)樣(yang)前，首先把柱內凝膠(jiao)(jiao)上(shang)面(mian)(mian)多(duo)余(yu)的蒸餾(liu)水放出，直(zhi)到(dao)柱內液(ye)面(mian)(mian)與(yu)凝膠(jiao)(jiao)表面(mian)(mian)相(xiang)齊(qi)（或留一極薄液(ye)層(ceng)）為止。然后，由柱的上(shang)端加(jia)水解液(ye)2ml，注(zhu)意不要讓溶液(ye)把凝膠(jiao)(jiao)沖松(song)浮起，加(jia)完樣(yang)品后，打開(kai)下口(kou)緩慢放出液(ye)體至液(ye)面(mian)(mian)與(yu)凝膠(jiao)(jiao)面(mian)(mian)相(xiang)齊(qi)，再用少量(liang)蒸餾(liu)水沖洗(xi)原(yuan)來盛(sheng)樣(yang)品的容器2－3次，待全部進入(ru)層(ceng)析柱后，即可(ke)進行洗(xi)脫。
(4) 洗脫(tuo)與收集(ji)
洗(xi)脫(tuo)時，用蒸餾水作(zuo)洗(xi)脫(tuo)劑，并且要連續不斷地進行，使凝(ning)膠(jiao)(jiao)柱上端保持一(yi)定的(de)液(ye)(ye)層(ceng)，防止凝(ning)膠(jiao)(jiao)柱表面的(de)液(ye)(ye)體流(liu)干。本實驗(yan)洗(xi)脫(tuo)液(ye)(ye)流(liu)出(chu)的(de)速度(du)應控(kong)制在0.8－1.0ml/min。洗(xi)脫(tuo)液(ye)(ye)的(de)收集(ji)采用分管(guan)(guan)(guan)連續順序(xu)收集(ji)，每管(guan)(guan)(guan)收集(ji)3ml，共(gong)收集(ji)10管(guan)(guan)(guan)。據經驗(yan)，4或5號管(guan)(guan)(guan)核苷酸濃(nong)度(du)zui大，可(ke)作(zuo)為層(ceng)析鑒定的(de)樣品液(ye)(ye)。但(dan)因層(ceng)析柱長度(du)的(de)差異，管(guan)(guan)(guan)號會有變(bian)化(hua)，必要時可(ke)用紫外檢測A260nm，找出(chu)濃(nong)度(du)zui大的(de)管(guan)(guan)(guan)號。
(5) 凝膠的(de)再(zai)生(sheng)和回(hui)收
凝(ning)膠柱(zhu)使用一(yi)次后，必(bi)須反沖(chong)疏松一(yi)次，平衡(heng)后再(zai)(zai)使用。若使用數(shu)次，就需要(yao)再(zai)(zai)生(sheng)(sheng)處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡(pao)，然后用蒸餾水(shui)洗(xi)至中性備(bei)用。若實(shi)驗(yan)完畢，將再(zai)(zai)生(sheng)(sheng)后的(de)凝(ning)膠在(zai)(zai)布氏漏斗上用蒸餾水(shui)洗(xi)滌抽干，再(zai)(zai)用95%乙醇洗(xi)兩次，在(zai)(zai)60℃烘(hong)箱(xiang)中烘(hong)干，回收保存(cun)。