細(xi)胞(bao)活力檢(jian)測(ce)

    在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)群(qun)體中(zhong)(zhong)總有(you)一些(xie)因各種原因而死亡的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，總細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)中(zhong)(zhong)活細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)所占的(de)百分比叫做(zuo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)活力(li)。由組織中(zhong)(zhong)分離(li)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)一般(ban)要檢查活力(li)，以(yi)了解分離(li)的(de)過程(cheng)對細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)是否有(you)損傷(shang)作用(yong)；復蘇(su)后的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)也要檢查活力(li)，了解凍存和復蘇(su)的(de)效果。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)懸(xuan)液(ye)制備后，zui常用(yong)活體染料(liao)臺盼藍對細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)染色，進行細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)計數。

    正常細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)胞(bao)(bao)膜(mo)完(wan)整，臺盼(pan)藍不能透過活細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)正常完(wan)整的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)，故(gu)活細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)不著色；而(er)喪失活性(xing)或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)不完(wan)整的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)胞(bao)(bao)膜(mo)通透性(xing)增(zeng)加，臺盼(pan)藍能進(jin)入(ru)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)內而(er)使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)著色（藍色）。

操(cao)作步驟：

1. 配制4%臺(tai)(tai)盼藍母(mu)液(ye)：稱取4g臺(tai)(tai)盼藍，加(jia)少(shao)量蒸餾水研磨，加(jia)雙蒸水至(zhi)100mL，用(yong)濾紙過濾，4℃保存。使(shi)用(yong)時用(yong)PBS稀釋(shi)至(zhi)0.4%。

2. 胰(yi)酶消化貼(tie)壁細(xi)胞(bao)，制備單細(xi)胞(bao)懸液，并(bing)作適當稀(xi)釋（106 cells/mL）。

3. 取少量細胞懸液與0.4%臺(tai)盼藍溶液以9:1混合，輕輕吹(chui)打(da)混勻，染色(se)2~3min。

4. 顯微鏡(jing)下(xia)觀察，死細(xi)胞著淺藍色并(bing)膨大，無光(guang)澤(ze)；活(huo)細(xi)胞保持正常形態，無色透明(ming)有光(guang)澤(ze)。若需計(ji)(ji)算活(huo)細(xi)胞率(lv)則將染(ran)色的(de)細(xi)胞懸液滴入細(xi)胞計(ji)(ji)數板計(ji)(ji)數。

活細胞率（%）= 活細胞總數/（活細胞總數+死細胞總數）×100%

注(zhu)意事項：臺盼藍染細胞時，時間(jian)不宜過長。否則，部分活細胞也會著(zhu)色(se)，會干擾計數的準確性。